Методические указания по лабораторной диагностике амебиаза пчел

(утв. Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР
23 апреля 1984 г. № 115-6а)

1. Общие положения

1.1. Амебиаз - инвазионная болезнь взрослых пчел, сопровождающаяся поражением мальпигиевых сосудов. Возбудитель заболевания - амеба Malpighamoeba mellificae. Болезнь проявляется обычно весной и протекает совместно с нозематозом.

1.2. Диагноз на амебиаз устанавливают лабораторным методом исследования с учетом клинических и эпизоотологических данных.

1.3. При подозрении на амебиаз в ветеринарную лабораторию направляют не менее 50 живых пчел или столько же пчел из свежего подмора подозреваемых в заражении семей. Материал помещают в чистые стеклянные банки с притертой пробкой и отправляют в лабораторию в течение первых суток с момента его взятия.

2. Микроскопическое исследование

2.1. Для микроскопического исследования извлекают кишечник пчел на предметное стекло, наносят на него каплю воды и отделяют препаровальной иглой мальпигиевы сосуды. Их накрывают покровным стеклом.

Для этих же целей отделяют от пчел брюшко и растирают его пестиком в фарфоровой ступке с небольшим количеством воды (1 см³ на пчелу). Каплю образовавшейся суспензии наносят на предметное стекло и накрывают ее покровным. Препараты исследуют под микроскопом в затемненном поле зрения (увеличение ×400, ×600).

2.2. Диагноз устанавливают по наличию в поле зрения микроскопа 1 - 5 округлых или овальных двуконтурных цист амеб размером 6 - 7 мкм.

2.3. Для дифференцирования цист амеб от капель жира, дрожжевых клеток, зерен пыльцы, спор ноземы и грибов используют один из следующих методов.

2.3.1. К капле исследуемой суспензии на предметное стекло добавляют каплю 2 %-ного раствора эозина в физиологическом растворе, тщательно смешивают и накрывают покровным стеклом. Через 5 - 10 минут препарат исследуют под микроскопом. Цисты амеб окрашиваются в красный цвет; зерна пыльцы - в красновато-коричневый; споры ноземы, грибов, дрожжей и капли жира не окрашиваются.

2.3.2. Каплю исследуемой суспензии смешивают с раствором йода (йод - 5,0 г, йодистый калий - 10,0 г, вода - до 1000 см³), накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Ядра амеб окрашиваются в коричневый цвет, цитоплазма - в светло-коричневый, зерна пыльцы - в красновато-коричневый, споры ноземы, грибов и дрожжей не окрашиваются.

2.3.3. Из капли суспензии готовят мазок, высушивают его на воздухе, фиксируют над пламенем горелки в течение 3 - 5 сек. и окрашивают по Граму. Мазки исследуют под иммерсионной системой микроскопа. Цитоплазма амеб окрашивается в синий цвет, ядра - в красноватый, споры грибов, дрожжей, капли жира, зерна пыльцы - в темно-синии, споры ноземы не окрашиваются.

СОДЕРЖАНИЕ