Методические указания
Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия РФ
от 5 июня 2000 г. № 13-7-2/2045
«Методические указания по лабораторной диагностике эймериозов животных»

1. Общие положения

1.1. Эймериозы (кокцидиозы) - протозойные болезни животных, вызываемые простейшими рода Eimeria отряда Coccidiida, встречаются повсеместно, чаще в весенне-летний периоды, в теплых помещениях возможны зимой и протекают остро, подостро, хронически. Сельскохозяйственные животные, пушные звери, кролики чаще болеют в возрасте - 15 - 120 дн., птицы - с 10-дневного возраста и старше.

1.2. Диагноз на эймериозы устанавливают с учетом эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований (микроскопического, копрологического).

1.3. В лабораторию для исследования на эймериозы направляют:

от 20 - 30 подозреваемых в заболевании животных из прямой кишки пробы фекалий до 5 г;

от павших или вынужденно убитых - отрезки пораженных тонких и толстых кишок, перевязанные с обоих концов;

от пушных зверей, кроликов и птиц - групповые пробы фекалий или трупы целиком.

Отобранный патологический материал и пробы фекалий упаковывают во влагонепроницаемую тару и доставляют в лабораторию в день отбора, а трупы - не позднее 4 - 6 ч после гибели.

1.4. Лабораторные исследования на эймериозы включают:

микроскопию препаратов из соскобов пораженных участков органов и кишечника;

копроскопию мазков из фекалий;

определение видов и интенсивности инвазии.

2. Микроскопическое исследование

2.1. Трупы животных вскрывают и делают соскобы с пораженных мест слизистых оболочек тонких, толстых кишок, дополнительно у кроликов - из печени, птиц - со слизистой слепых отростков и гусей - из почек. Соскобы исследуют сразу.

2.2. Из каждого соскоба готовят по одному препарату. Небольшую часть соскоба наносят на предметное стекло, добавляют 2 - 3 капли жидкости, состоящей из равных частей глицерина и воды, тщательно размельчают иглой, накрывают покровным стеклом и исследуют в раздавленной капле в затемненном поле зрения микроскопа при увеличении в 140 - 280 раз.

2.3. При микроскопии учитывают, что меронты (шизонты) - тельца овальной или круглой формы, внутри которых сформировано множество мерозоитов; мерозоиты -клетки продолговатой формы с ядром; незрелые ооцисты - клетки с зернистой цитоплазмой шарообразной формы.

3. Копрологическое исследование

3.1. Фекалии исследуют для определения видового состава и количества ооцист эймерий.

3.2. Определение видов. Берут 3 г фекалий, переносят в ступку, добавляют 20 см³ воды, тщательно размешивают, фильтруют через капроновое или металлическое сито с размером ячеек 0,5 - 1,0 мм², перемешанный фильтрат переливают в пробирку и центрифугируют при 2000 - 3000 об/мин в течение 2 - 3 мин. Затем надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют жидкость, состоящую из равных частей насыщенного раствора хлорида натрия (380 - 400 г хлорида натрия растворяют в 1 дм³ горячей воды) и глицерина, размешивают и вновь центрифугируют при 1500 об/мин - 2 - 3 мин. При отсутствии глицерина можно использовать один насыщенный раствор хлорида натрия. Наибольшей флотационной способностью растворы обладают при температуре 20 - 22 °С. Металлической петлей (диаметр 5 - 7 мм) снимают с поверхностной пленки 3 капли, переносят на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют в затемненном поле зрения микроскопа при увеличении в 140 - 280 раз.

При микроскопии обнаруживают незрелые и спорулированные ооцисты эймерий. Виды эймерий дифференцируют по локализации, спорулированным ооцистам, их размеру, форме, цвету, характеру оболочек, наличии микропиле и остаточных тел в ооцисте (Приложение).

3.3. Определение интенсивности инвазии. Берут 3 г фекалий, переносят в ступку, добавляют 45 см³ воды, хорошо размешивают и фильтруют через металлическое или капроновое сито с размером ячеек 0,5 - 1,0 мм². Затем берут 10 см³ фильтрата, переливают в пробирку, центрифугируют при 2000 - 2500 об/мин в течение 2 - 3 мин и жидкость сливают полностью. К осадку добавляют 10 см³ насыщенного раствора хлорида натрия, размешивают, пипеткой набирают 0,15 см³ суспензии, переносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют в затемненном поле зрения микроскопа при увеличении 140 - 280 раз.

Подсчитывают количество ооцист эймерий в препарате. Подсчет ооцист проводят во всех 225 квадратах камеры Горяева и полученную сумму умножают на коэффициент 1111. Полученное количество показывает число ооцист в 1 г фекалий.

3.4. В зависимости от количества ооцист в 1 г фекалий определяют относительную степень пораженности по следующей таблице:

4. Результаты исследования считают положительными при обнаружении в препаратах исследованных материалов шизонтов, мерозоитов, незрелых и спорулированных ооцист эймерий.

5. Срок микроскопического (копрологического) исследования до 3 дн.

Методические указания по лабораторной диагностике эймериозов животных подготовлены Московской государственной академией ветеринарной медицины и биотехнологии (Н.Н. Евплов), Центральной научно-методической ветеринарной лабораторией (В.А. Седов, В.Д. Певнева), Всероссийским институтом экспериментальной ветеринарии (В.Т. Заблоцкий).

Утверждаю
Заместитель руководителя Департамента ветеринарии Минсельхозпрода России	В.В. Селиверстов

Приложение

к Методическим указаниям по лабораторной
диагностике эймериозов животных

Характеристика спорулированных ооцист распространенных видов эймерий

Содержание