МЕТОДИКА
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
КОРМОВ НА ЭНТЕРОКОККИ

Методика бактериологического исследования кормов на энтерококки разработана Всесоюзным научно-исследовательским институтом ветеринарной санитарии и Центральной ветеринарной лабораторией Главветупра Госагропрома СССР

1. Общие положения

1.1. Бактериологическое исследование кормов на обнаружение энтерококков проводят для уточнения этиологии желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных и птицы (молодняка).

1.2. Метод основан на двухэтапном посеве на ингибирующие среды, подавляющие рост грамотрицательных и частично грамположительных микробов.

1.3. Пробы корма отбираются согласно общепринятым методам.

2. Проведение исследований

2.1. В колбу с 450 мл стерильного физиологического раствора помещают 50 г корма (разведение 1:10), тщательно встряхивают на шуттель-аппарате 30 минут. Из полученной взвеси готовят последовательные разведения 1:100, 1:1000, 1:10000. Из каждого разведения вносят по 1 мл в пробирки с щелочно-полимиксиновой средой (приложение 1). Посевы инкубируют в термостате при 37° в течение 16 - 24 часов.

2.2. Из пробирок с измененным цветом среды в зеленый или желтый делают посев на плотную молочно-ингибиторную среду МИС (приложение 1) в бактериологических чашках. Посевы инкубируют в термостате при 37° в течение 24 - 48 часов.

2.3. Через 24 - 48 часов изучают рост колоний на среде МИС, идентифицируя разные виды и варианты энтерококков: Str. faecalis и его варианты образуют на молочно-ингибиторной среде круглые, выпуклые, с ровными краями, черные, с металлическим блеском колонии. Str. faecalis var. liquefaciens имеет способность кроме того образовывать вокруг колоний зону просветления с ободком помутнения по ее периферии. Str. faecium на среде МИС растет в виде мелких, сероватых, иногда почти бесцветных колоний.

2.4. У выделенных культур со среды МИС определяют морфологические и культурально-биохимичеcкие свойства согласно (таблица 1) основных дифференциальных признаков энтерококков и сходных с ними микроорганизмов.

2.5. Патогенные свойства энтерококков определяют биологической пробой на белах мышах. Для этого заражают внутрибрюшинно трех мышей массой 18 - 20 г в дозе 0,5 см³ суспензией суточной культуры со скошенного МПА, с концентрацией бактерий, соответствующей 5 ЕД по оптическому стандарту мутности. Для смыва культур с МПА и получения суспензии необходимой концентрации используют физиологический раствор. Патогенные культуры обычно вызывают гибель одной или более мышей в первые 3-е суток после заражения. Наблюдение за подопытными животными ведут в течение 5 суток.

3. Ветеринарно-санитарная оценка кормов

3.1. Корма, в которых обнаружены патогенные энтерококки, запрещается использовать без термической обработки. Их подвергают проварке при температуре не ниже 100° в течение 1 часа в соответствии с действующими Правилами бактериологического исследования кормов.

Приложение 1

Рецепты питательных сред

1. Щелочно-полимиксиновая среда

Раздельно готовят:

среду А: МПБ - 280 мл, хлорид натрия - 4,0 г, глюкоза - 8,0 г, дрожжевой экстракт - 16 мл.

раствор Б: натрий углекислый (Na₂CO₃) - 4,4, дистиллированная вода - 50 мл.

раствор В: калий двузамещенный фосфорнокислый (K₂НРO₄) - 2,0, дистиллированная вода - 50 мл.

Среду А, растворы Б и В стерилизуют при 5 атм. 12 - 15 минут.

После стерилизации их смешивают и добавляют 1,6 мл 1,6 %-ного щелочного раствора бромтимолблау (1,6 г бромтимолблау растворяют в 33 мл 0,4 %-ного раствора едкого натра и объем доводят до 100 мл дистиллированной водой) и 200000 ЕД полимиксина.

Среду разливают по 5 мл в пробирки. Хранят в холодильнике 7 - 10 дней.

2. Молочно-ингибиторная среда (МИС)

К 850 мл стерильного 2 %-ного МПА (при температуре не более 55°) добавляют 150 мл стерильного снятого молока, 12,5 мл 0,01 %-ного водного раствора кристаллического фиолетового (ингибитор), 10 мл 2 %-ного водного раствора теллурата калия, смешивают и разливают в чашки Петри.

3. Дрожжевой экстракт

250 г прессованных пекарских (свежих) дрожжей растворяют в 500 мл дистиллированной воды и автоклавируют текучим паром 30 минут. После остывания помещают в холодильник для отстаивания (на 4 - 5 суток), затем надосадочную жидкость сливают в стеклянную посуду. К этой жидкости добавляют 1,25 мл 0,01 %-ного водного раствора кристаллического фиолетового из расчета на 100 мл и стерилизуют текучим паром 20 - 30 минут. Хранят в холодильнике 1 месяц.

Таблица 1

Дифференциальные признаки энтерококков и сходных с ними микроорганизмов

СОДЕРЖАНИЕ