Государственное
санитарно-эпидемиологическое нормирование Федеральная
служба по надзору в сфере защиты прав потребителей 3.1. ЭПИДЕМИОЛОГИЯ. ПРОФИЛАКТИКА Изучение популяционного иммунитета к гриппу Методические указания Москва 2018 1. Разработаны Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Е.Б. Ежлова, А.А. Мельникова, Н.В. Фролова), Федеральным бюджетным учреждением науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора (Р.А. Максютов, В.Н. Михеев, А.Б. Рыжиков, Т.Н. Ильичева, А.Г. Дурыманов), Федеральным бюджетным учреждением науки «Центральный научно-исследовательский институт Эпидемиологии» Роспотребнадзора (В.В. Малеев, И.В. Михеева, С.Б. Яцышина, А.М. Домкина), ФГУП «Санкт-Петербургский НИИ вакцин и сывороток» ФМБА России (Г.М. Игнатьев). 2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 27 октября 2017 г. 3. Введены впервые. СОДЕРЖАНИЕ
3.1. ЭПИДЕМИОЛОГИЯ.
ПРОФИЛАКТИКА Изучение популяционного иммунитета к гриппу Методические указания I. Область применения1.1. Настоящие методические указания устанавливают порядок и организацию проведения серологического мониторинга в рамках эпидемиологического надзора за гриппом для достижения следующих целей: - прогнозирование эпидемиологической ситуации путем оценки состояния коллективного иммунитета к актуальным и ранее циркулировавшим антигенным вариантам возбудителей гриппа в предэпидемичеcкий период; - мониторинг за циркуляцией возбудителей гриппа с помощью обнаружения специфических антител к различным антигенным вариантам вирусов гриппа в сыворотках крови в реакции торможения гемагглютинации (РТГА); - объективная оценка эффективности специфической профилактики гриппа. 1.2. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов, осуществляющих федеральный государственный санитарно-эпидемиологический надзор, центров гигиены и эпидемиологии, научно-исследовательских и медицинских организаций. II. Общие положения2.1. Проведение серологического мониторинга с целью изучения популяционного иммунитета к гриппу является обязательным элементом эпидемиологического надзора, поскольку эпидемиологическое благополучие населения в отношении гриппа определяется состоянием популяционного иммунитета к актуальным штаммам возбудителей. 2.2. Серологические исследования также важны для ретроспективного анализа вспышек, которые могут иметь место в учреждениях закрытого типа, школах, больницах, геронтологических учреждениях. 2.3. В методических указаниях представлен общий методический подход, порядок организации и проведения лабораторных исследований по оценке популяционного иммунитета к гриппу. Особое внимание уделено описанию формирования репрезентативных групп населения для изучения популяционного иммунитета в зависимости от преследуемой цели, обработке результатов и их интерпретации. 2.4. Методические указания разработаны с целью установки единых требований к порядку сбора, хранения, транспортирования образцов сыворотки крови в ходе серомониторинга гриппа в Российской Федерации, оценке результатов исследований, а также проведению экспертизы и оценки качества иммунопрофилактики гриппа объективными методами. 2.5. Методические указания предназначены для применения в организациях и учреждениях Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, в медицинских и других организациях, обеспечивающих выполнение противоэпидемических мероприятий. 2.6. Информация о состоянии популяционного иммунитета необходима для разработки прогноза развития эпидемиологической ситуации, а также для планирования мероприятий по вакцинопрофилактике гриппа. 2.7. Перечень задач, решаемых в рамках изучения популяционного иммунитета к гриппу: - оценка состояния популяционного иммунитета к различным антигенным вариантам актуальных вирусов гриппа в группах населения различного возраста в предэпидемический период для разработки прогноза заболеваемости и планирования профилактических мероприятий; - выявление в предэпидемический период групп риска заболевания гриппом среди населения и территорий риска высокой заболеваемости; - оценка состояния популяционного иммунитета в сравнительном аспекте постэпидемического и предэпидемического периодов с целью определения этиологии эпидемии гриппа и истинной заболеваемости; - мониторинг вирусов гриппа животных у лиц, контактирующих с животными, с помощью серологических методов; - объективная оценка эффективности иммунизации населения в регионах; - оценка эффективности вакцин против гриппа. 2.8. Проведение серологического мониторинга состояния коллективного иммунитета оформляется постановлением Главного государственного санитарного врача по субъекту Российской Федерации, в котором по согласованию с органами управления здравоохранением определяются территории, время (график), контингенты и численность групп населения, подлежащих обследованию, определяются лаборатории для проведения исследований, а также лица, ответственные за организацию и проведение этой работы. В развитие постановления Главного государственного санитарного врача по субъекту Российской Федерации издается приказ органа управления здравоохранением субъекта Российской Федерации. 2.9. Проведение серологического мониторинга ежегодно включается в планы работы территориальных органов Роспотребнадзора, центров гигиены и эпидемиологии и научно-исследовательских организаций Роспотребнадзора и организаций здравоохранения. III. Введение3.1. Коллективный иммунитет популяции является лимитирующим фактором в отношении распространения различных антигенных вариантов вируса гриппа А и В. В этой связи исследование популяционного иммунитета может быть полезным для прогноза возникновения эпидемий, выявления особенностей эпидемического процесса, а также широко используется с целью оценки средств специфической профилактики при их разработке и использовании. 3.2. Оценка состояния популяционного иммунитета может проводиться с целью прогнозирования возникновения эпидемического подъема гриппа. Высокий уровень популяционного иммунитета к определенному антигенному варианту гемагглютинина на протяжении 2 лет подряд указывает на возможность исчезновения из циркуляции этих антигенных вариантов вируса. Низкий уровень популяционного иммунитета к определенному антигенному варианту гемагглютинина в предэпидемический период может служить предвестником эпидемического подъема гриппа, вызванного данным вариантом вируса гриппа. Помимо этого низкий уровень популяционного иммунитета в течение длительного периода к ранее циркулировавшему антигенному варианту вируса гриппа может служить настораживающим прогностическим признаком, указывающим на возможность эпидемической циркуляции близкого антигенного варианта вируса гриппа в будущем. 3.3. Наряду с другими тестами оценка состояния популяционного иммунитета по окончании эпидемии гриппа может служить дополнительным критерием оценки этиологии прошедшей эпидемии гриппа. 3.4. Особое значение имеют сероэпидемиологические исследования, направленные на определение у людей антител к вирусам гриппа животных, таких как высокопатогенный вирус гриппа A (H5N1), поскольку обнаружение антител к вирусу гриппа с пандемическим потенциалом у людей, не контактировавших с птицей, будет косвенно свидетельствовать о приобретении вирусами способности передаваться от человека к человеку. Такие исследования наряду с ПЦР-исследованиями позволили бы выяснить, какова доля бессимптомных случаев инфицирования людей вирусами гриппа животных. 3.5. С целью оценки эффективности вакцинации исследуется популяционный иммунитет до и после вакцинации. С целью оценки эффективности вакцин против гриппа исследуется иммунитет в целевых группах, которым рекомендована исследуемая вакцина. 3.6. Поскольку доказана корреляция между титром антител в сыворотке крови к определенному антигенному варианту гемагглютинина (НА) вирусов гриппа, определенным в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), и наличием защиты против инфицирования вирусом гриппа, имеющим данный антигенный вариант гемагглютинина, это исследование успешно используется для оценки коллективного иммунитета к гриппу. Уровень антител (или титр, определяемый в РТГА при последовательных двукратных разведениях сыворотки), при котором доля зараженных лиц (infection rate) падает в 2 раза по сравнению с наблюдаемой у лиц, не имеющих гомологичных антител, считают защитным 50%-м титром. Определенные опытным путем показатели 50 %-го защитного титра различаются для вирусов гриппа разных субтипов и людей разного возраста, тем не менее, защитным считают титр 1:40, однако некоторые исследователи считают, что для детей этот показатель должен составлять 1:80. 3.7. Низким титром считают значение ≤ 1:20, промежуточным (или средним) от 1:40 до 1:80, высоким ≥ 1:160. Среди лиц, имеющих антитела к гомологичному вирусу гриппа в среднем или высоком титре после перенесенной ранее инфекции, заразиться при контакте с возбудителем могут 9 %, среди лиц, приобретших антитела в таком же титре в результате вакцинации - 23 %, тогда как среди лиц, не имеющих антител, инфицируются 80 %. IV. Организация исследований4.1. Мониторинг состояния коллективного иммунитета к вирусам гриппа предусматривает серологическое обследование на каждой территории различных групп населения, при этом в одной пробе сыворотки крови определяют максимальный спектр антител к различным антигенным вариантам разных субтипов вирусов гриппа (эпидемическим вирусам гриппа человека: A/H1N1, A/H3N2, B/Yamagata и В/Victoria, высокопатогенным вирусам гриппа животных и пандемическим вирусам гриппа). 4.2. Отбор контингентов для обследования начинается с определения территорий. Границы территории определяются сферой обслуживания той или иной организацией здравоохранения. Это может быть отдельный организованный коллектив детей и взрослых, врачебный участок, населенный пункт, приписанный к фельдшерско-акушерскому пункту, территория обслуживания одной поликлиники, фермерское хозяйство. 4.3. Серологический мониторинг целесообразно проводить в первую очередь на крупных административных территориях субъектов Российской Федерации (в городах, районных центрах). Каждый сезон в обследование должны включаться разные районы и поликлиники города (районного центра). Периодичность их обследования должна составлять 6 - 7 лет (по графику). 4.5. Сбор образцов сыворотки крови осуществляется при условии анонимности методом случайной выборки у людей разных возрастных групп и с различным прививочным анамнезом в отношении гриппа. Перед проведением серологического обследования отобранных лиц медицинские работники должны провести разъяснительную работу, в том числе с родителями обследуемых детей, о целях проверки у них напряженности иммунитета к гриппу. По результатам серологического обследования детей в различных возрастных группах оценивается качество прививок, проводимых в организованных коллективах. 4.6. В зависимости от преследуемой цели исследования сбор сывороток производят от определенных контингентов людей в определенные сроки с соблюдением правил сбора, транспортирования и хранения собранных проб (прилож. 1 к МУ). Следует учитывать, что сыворотки не подлежат повторному размораживанию-замораживанию, поэтому при необходимости их многократного использования сыворотки следует предварительно аликвотировать. 4.7. Для осуществления серологического мониторинга гриппа на территории Российской Федерации используется РТГА (прилож. 2 к МУ). Для проведения РТГА должны использоваться зарегистрированные в Российской Федерации диагностикумы. 4.8. Результаты серологического обследования контингентов фиксируются в рабочих журналах лабораторий (табл. 1 - 3 в прилож. 6 к МУ) с указанием населенного пункта, организации, обследуемого и титра антител. 4.9. Динамическое слежение за состоянием иммунитета населения к гриппу, позволяет оценить потенциальную уязвимость населения и своевременно корректировать противоэпидемические мероприятия. При выявлении на какой-либо территории снижения уровня популяционного иммунитета в той или иной возрастной группе принимаются управленческие решения, направленные на увеличение уровня иммунной прослойки среди населения с учетом того, какой штамм представляет наибольшую эпидемическую опасность. Особое значение имеют сероэпидемиологические исследования высокопатогенных вирусов гриппа животных (например: A/H5N1, A/H7N9), поскольку значимое повышение количества людей, имеющих антитела к вирусу гриппа с пандемическим потенциалом и профессионально не контактирующих с животными, будет свидетельствовать о появлении варианта вируса, способного передаваться от человека к человеку. V. Оценка состояния популяционного иммунитета
|
|
Пример:
1) Количество эритроцитов в каждом большом угловом поле
50
48
42
40
2)
3) 281,25 - 250 = 31,25 мл ФСБР надо добавить к суспензии эритроцитов.
Адсорбция
сывороток с эритроцитами
для удаления неспецифических агглютининов
Присутствие неспецифических агглютининов в образцах сывороток может привести к ложноотрицательному результату в РТГА. Наличие неспецифических агглютининов можно обнаружить, если к разбавленной сыворотке добавить раствор эритроцитов. Если наблюдается гемагглютинация, то в этом случае сыворотка должна быть адсорбирована с эритроцитами перед тестированием в реакции торможения гемагглютинации.
Материалы
1. Эритроциты человека группы 0 или морской свинки.
2. Физиологический раствор с ФСБР (0,01 М ФСБР, pH = 7,2). Должен быть холодным. Хранить при температуре 4 °С и во время использования держать на льду.
3. Образцы сывороток, обработанных RDE.
4. Полистироловый 96-луночный микропланшет с V-образным дном.
5. Стерильные пипетки.
6. Одноразовые наконечники для многоканальных пипеток.
7. Микроцентрифужные пробирки.
Тестирование
неспецифических агглютининов
(работа в ламинарном боксе II класса биобезопасности!)
1. Разделите планшет с V-образным дном пополам, прочертив линию маркером со стойкими чернилами между рядами D и Е. Лунки рядов А и Е будут служить для внесения в них сывороток. Сыворотки из ряда А будут тестироваться между рядами А и D. Сыворотки из ряда Е будут тестироваться между рядами Е и Н.
2. Добавьте 25 мкл холодного ФСБР в лунки от ряда В до ряда D (с В1 - В10 до D1 - D10) для сывороток, которые будут протестированы в планшете торможения гемагглютинации № 1, и в лунки от ряда F до ряда Н (с F1 - F10 до H1 - Н10) для сывороток, которые будут протестированы в планшете торможения гемагглютинации № 2.
3. Добавьте по 50 мкл каждой сыворотки в лунки А1 - А10 и Е1 - Е10, соответствующие пронумерованным колонкам. В каждом планшете будет содержаться 22 образца сывороток.
4. Произведите серию двукратных разведений, перенося 25 мкл сыворотки из первого ряда в последующие ряды. Другими словами, перенесите из А в В, из В в С и из С в D. Удалите 25 мкл после ряда D. Также перенесите 25 мкл из Е в F, из F в G, из G в Н. Удалите 25 мкл после ряда Н.
5. Добавьте 25 мкл холодного ФСБР во все лунки, содержащие сыворотки; колонки 1 - 10.
6. Добавьте 50 мкл холодного ФСБР в колонку 12 на планшете в качестве контроля эритроцитов. Колонка 11 остается пустой.
7. Слегка постучите по планшету, чтобы сыворотки хорошо перемешались с ФСБР.
8. Добавьте 50 мкл 0,5 %-х эритроцитов во все лунки, кроме 11-й колонки.
9. Слегка постучите по планшету для лучшего перемешивания.
10. Выдержите при комнатной температуре в течение 30 минут, чтобы эритроциты смогли осесть.
11. Наклоните планшет под углом от 45° до 60°. Осевшие эритроциты в колонке 12 должны «потечь», напоминая слезу, под воздействием гравитации. Дождитесь, пока эти эритроциты не перестанут течь, и после этого запишите, в каких сыворотках произошла агглютинация эритроцитов. Агглютинированные эритроциты не «текут» и не образуют капли наподобие слезы.
12. Образцы сывороток с агглютинированными эритроцитами в лунках с разведением сыворотки 1:20 или больше должны быть адсорбированы с эритроцитами до тестирования в РТГА. Если агглютинация наблюдается только в первой лунке - разведение сыворотки 1:10, - тогда адсорбция необязательна.
Адсорбция сывороток с
эритроцитами
(работа в ламинарном боксе II класса биобезопасности!)
1. Смешайте в микроцентрифужной пробирке 100 мкл уплотненных эритроцитов с 400 мкл сыворотки, обработанной RDE.
2. Осторожно переверните, чтобы перемешать содержимое, и выдержите 30 минут при температуре 4 °С.
3. Снова осторожно переверните и выдержите еще 30 минут при температуре 4 °С.
4. Центрифугируйте в микроцентрифуге Эппендорф при 600? g в течение 5 минут.
5. Аккуратно соберите сыворотку, не затрагивая эритроциты.
Определение титра гемагглютинина вируса гриппа
Материалы
1. 0,5 %-я суспензия эритроцитов человека группы 0 или морской свинки в ФСБР.
2. Физиологический раствор с ФСБР (0,01 М ФСБР, pH = 7,2). ФСБР необходимо хранить при температуре 4 °С.
3. Антиген вируса гриппа.
Примечание. Антиген вируса гриппа должен храниться при температуре -70 °С в аликвотах одноразового использования. Быстро разморозьте антиген вируса незадолго до использования и положите на лед. После работы все остатки антигена вируса гриппа должны быть утилизированы. Никогда не используйте размороженный и повторно замороженный антиген вируса гриппа
4. Полистироловый 96-луночный микропланшет с V-образным дном.
5. Стерильные пипетки, одноразовые наконечники для многоканальных пипеток.
Процедура
1. На V-образных планшетах подпишите названия двух антигенов вирусов, которые вы будете использовать в тесте. Каждый антиген вируса тестируется дважды.
2. Добавьте 50 мкл холодного ФСБР в лунки со 2-го по 12-й в рядах А и В для первого антигена и в лунки со 2-й по 12-ю в рядах D и Е для второго антигена.
3. Добавьте 50 мкл холодного ФСБР во весь ряд Н. Этот ряд будет выполнять функцию контроля эритроцитов.
4. Добавьте 100 мкл первого антигена для тестирования в лунки А1 и В1. Добавьте 100 мкл второго тестируемого антигена в лунки D1 и Е1.
5. Проведите серию двукратных разведений, перенеся 50 мкл из первой лунки в каждую последующую до 12-й лунки. Из 12-й лунки удалите 50 мкл.
6. Добавьте 50 мкл 0,5 %-й суспензии эритроцитов во все лунки в рядах А, В, D, Е и Н на планшете.
7. Аккуратно постучите по планшету, чтобы перемешать содержимое.
8. Выдержите при комнатной температуре или при 4 °С в течение 30 минут.
9. Определите титры гемагглютининов, наклонив планшет под углом от 45° до 60°. Осевшие эритроциты в ряду Н должны «потечь» и образовать каплю. Дождитесь, пока эти эритроциты не перестанут течь, после чего отметьте те лунки, в которых эритроциты образовали «пуговки» и потекли. Наибольшее разведение антигена, которое дает полную гемагглютинацию («зонтик»), считается титром гемагглютинина.
10. Разведите антиген вируса в холодном ФСБР таким образом, чтобы приготовить рабочий раствор, содержащий 8 ГАЕ/50 мкл. Например, у Вас получился титр НА, равный 160. Разделите его на 8, получите 20. Следовательно, необходимо разбавить исходный вирусный антиген в 20 раз, т.е. смешать 1 часть антигена с 19 частями холодного ФСБР.
11. Убедитесь в том, что разведенный антиген содержит 8 ГАЕ на 50 мкл, проведя вторую реакцию гемагглютинации (РГА), как описано выше. Титр вирусного антигена должен равняться 8. Если у Вас получилось другое число, использовать этот рабочий раствор антигена нельзя!
12. Храните рабочее разведение антигена на льду и используйте в тот же день.
Примечание. Стандартное рабочее разведение вирусного антигена должно иметь титр НА, равный 8 ГАЕ в 50 мкл. Это то же самое, что и 4 ГАЕ в 25 мкл. При таком титре наблюдается гемагглютинация в первых четырех лунках при титровании антигена в РГА Если полная гемагглютинация наблюдается в 5 лунках, антиген имеет титр 16 ГАЕ/50 мкл и тестовый антиген должен быть разбавлен в 2 раза. И наоборот, если гемагглютинация наблюдается только в 3 лунках, то антиген имеет титр 4 ГАЕ/50 мкл. В этом случае к рабочему разведению антигена надо добавить такой же объем исходного антигенного раствора, какой был взят вначале. Это удвоит концентрацию антигена в рабочем разведении, чтобы дать титр 8 ГАЕ/50 мкл. Если после 1 - 2 исправлений у вас так и не получился титр 8 ГАЕ/50 мкл, процедуру приготовления рабочего раствора антигена лучше повторить сначала с постановки реакции гемагглютинации.
Реакция торможения гемагглютинации (протокол)
Материалы
1. 0,5 %-я суспензия эритроцитов в ФСБР.
2. Физиологический раствор с ФСБР (0,01 М ФСБР, pH = 7,2). ФСБР необходимо хранить при температуре 4 °С.
3. Диагностикумы гриппозные сухие для РТГА (приметать согласно инструкции изготовителя).
4. Вирус гриппа, инактивированный бета-пропиолактоном (BPL-антиген). Аликвоты аллантоисной или культуральной антигенсодержащей жидкости хранить при -70 °С.
5. Образцы сывороток, обработанные RDE, тестированные на неспецифические агглютинины эритроцитов.
Примечание. Сыворотка должна быть заморожена один раз и храниться при температуре от -20 до -70 °С.
6. Полистироловый 96-луночный микропланшет с V-образным дном. В каждом планшете может быть протестировано 11 образцов сывороток.
7. Стерильные пипетки.
8. Конические центрифужные пробирки для разведения антигена.
9. Одноразовые наконечники для многоканальных пипеток.
Процедура
1. Быстро разморозьте сыворотки на водяной бане при 37 °С. Как только сыворотки растают, держите их на льду во время работы.
2. Пронумеруйте планшеты и подпишите названия двух тестируемых антигенов. Сыворотки тестируются в повторах на двух идентичных планшетах.
3. Добавьте 25 мкл холодного ФСБР в ряды от В до Н (от В1 - В11 до Н1 - Н11).
4. Добавьте 50 мкл каждого образца сывороток в первую лунку (А1 - А10).
5. Внесите 50 мкл положительного контроля в лунку A11 одного планшета и отрицательного контроля в лунку А11 второго планшета.
6. Проведите серию двукратных разведений, перемещая 25 мкл сыворотки из А1 - 11 в лунки последующих рядов. Последние 25 мкл сыворотки из ряда II утилизируйте.
7. Добавьте 25 мкл рабочего раствора антигена, содержащего 4 ГАЕ, в лунки, содержащие сыворотки. Обратите внимание на то, что это то же самое, что 50 мкл, содержащих 8 ГАЕ.
8. Аккуратно постучите по планшету, чтобы перемешать содержимое.
9. Выдержите при комнатной температуре в течение 30 минут.
10. Добавьте 50 мкл ФСБР в колонку 12, что послужит контролем эритроцитов.
11. Добавьте 50 мкл 0,5 %-й суспензии эритроцитов в каждую лунку.
12. Аккуратно постучите по планшету, чтобы перемешать содержимое.
13. Выдержите при комнатной температуре или при 4 °С в течение 30 минут.
14. Результат оценивают через 30 минут инкубирования, наклонив планшет под углом от 45° до 60°. Осевшие эритроциты в колонке 12 должны «потечь» и образовать каплю. Дождитесь, пока эти эритроциты не перестанут течь, после чего отметьте те лунки, в которых эритроциты образовали «пуговки» и потекли так же, как в 12-й колонке. Лунки, где произошло полное торможение гемагглютиналии, будут выглядеть как контрольные.
Если произошло взаимодействие антиген/антитело, гемагглютинация эритроцитов будет ингибирована. Для записи данных следует пользоваться следующими знаками: знак «+» - для полной гемагглютинации («зонтик»), знак «±» - для частичной гемагглютинации и знак «-» - для торможения гемагглютинации («пуговка»). Титр в РТГА соответствует наибольшему разведению сыворотки, которое полностью тормозит гемагглютинацию (последняя «пуговка»). Необходимо внимательно следить за инкубацией. Если реакция проведена при комнатной температуре результат следует прочитать сразу после того, как эритроциты в контроле полностью осядут. Если реакция проведена при температуре 4 °С результат можно прочитать в течение 0,5 - 1 часа после того, как эритроциты в контроле полностью осядут.
15. Титр сыворотки в РТГА - это разведение сыворотки в последней лунке с полным торможением гемагглютинации, например, 1:640. Обратный титр сыворотки - это величина, обратная титру, например, 640.
Расчет среднегеометрических титров антител (СГТ)
Дня проведения расчета СГТ титр антител в РТГА менее 1:10 принимают равным 1:5. Титр антител в РТГА равный или более 1:1280 принимают равным 1:1280. Для определения СГТ обратные титры антител переводят в логарифмы по основанию 2, суммируют и делят на число исследованных сывороток. Полученную в результате деления цифру используют как показатель степени числа 2, а число, получившееся после возведения 2 в эту степень, представляет собой обратный среднегеометрический титр сывороток исследуемой группы добровольцев.
Образец расчета СГТ:
Количество обследованных сывороток |
Количество сывороток с указанными титрами антител |
Доля серонегативных лиц, % |
СГТ |
||||||||
< 1:10 (2,3 log2) |
1:10 (3,3 log2) |
1:20 (4,3 log2) |
1:40 (5,3 log2) |
1:80 (6,3 log2) |
1:160 (7,3 log2) |
1:320 (8,3 log2) |
1:640 (9,3 log2) |
≥ 1:1280 (10,3 log2) |
|||
148 |
10 |
20 |
68 |
40 |
10 |
0 |
0 |
0 |
0 |
66 |
1:22 |
Из 148 исследованных сывороток 10 имели титр менее 1:10; 20 титр 1:10; 68 - титр 1:20; 40 - титр 1:40 и 10 - титр 1:80. Переведя абсолютные значения титров в логарифмы по основанию 2, получим следующую величину среднегеометрического титра (СГТ) антител:
|
Обратный СГТ = 24,5 = 22. СГТ = 1:22.
Оценка иммунологической эффективности вакцин
При оценке иммунологической эффективности вакцин против гриппа пользуются критериями, определенными Европейским медицинским агентством (COMMITTEE FOR PROPRIETARY MEDICINAL PRODUCTS (CPMP); http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2009/09/WC500003945.pdf).
Определяют фактор сероконверсии, уровень сероконверсии и уровень серопротекции.
• Фактор сероконверсии - кратность нарастания среднегеометрического титра (СГТ) антител после вакцинации по сравнению со среднегеометрическим титром до вакцинации;
• Уровень сероконверсии - суммарная доля лиц, выраженная в процентах, с повышением титра от серонегативного (< 1:40) до серопозитивного (≥ 1:40) или с четырехкратным приростом титра антител после вакцинации, если до вакцинации титр был ≥ 1:40;
• Уровень серопротекции - доля лиц, выраженная в процентах, с защитным титром антител ≥ 1:40 через 21 - 28 дней после вакцинации.
Измерение титров антител проводится одновременно в парных сыворотках крови, взятых непосредственно до и через один месяц после вакцинации.
По крайней мере, один из параметров должен отвечать требованиям, представленным в таблице.
Параметры иммуногенности вакцины гриппа |
Возраст |
|
18 - 60 лет |
старше 60 лет |
|
Фактор сероконверсии |
более 2,5 |
более 2,0 |
Уровень сероконверсии |
более 40 % |
более 30 % |
Уровень серопротекции |
более 70 % |
более 60 % |
Оценка профилактической эффективности вакцин
Оценка профилактической эффективности вакцин против гриппа проводится путем расчета индекса Эффективности и коэффициента эффективности.
Индекс эффективности:
|
а - доля заболевших гриппом среди вакцинированных;
b - доля заболевших гриппом среди невакцинированных.
Коэффициент эффективности:
|
а - доля заболевших гриппом среди вакцинированных,
b - доля заболевших гриппом среди невакцинированных.
Таблицы для оформления результатов
Результаты РТГА для серомониторинга гриппа
Субъект Российской Федерации |
№ п/п |
Ф И О или идентификационный код |
Пол |
Возраст |
Наличие вакцинации против гриппа за последние 2 года |
Наличие контакта с животными или птицей |
Дата сбора образца сыворотки |
Титр в РТГА с антигеном (в обратных величинах) |
||
А (Н1N1) |
A (H3N2) |
В |
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
«___» __________20__ г. |
Руководитель лаборатории |
Учет заболеваемости гриппом лиц, вакцинированных против гриппа
Субъект РФ |
Ф И О или идентификационный код |
Наименование вакцины |
Возбудитель (ПЦР) |
Состояние противогриппозного иммунитета после вакцинации (РТГА) |
||||||||||
|
|
|
H1N1 |
H3N2 |
В |
H1N1 |
H3N2 |
В |
||||||
|
|
|
|
|
|
< 1:20 |
1:20 - 1:40 |
> 1:40 |
< 1:20 |
1:20 - 1:40 |
> 1:40 |
< 1:20 |
1:20 - 1:40 |
> 1:40 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
«___» __________20__ г. |
Руководитель лаборатории |
Оценка эффективности вакцинации против гриппа
Субъект РФ |
Наименование вакцины |
Антигенная формула вируса гриппа* |
Количество обследованных сывороток |
Количество сывороток с указанными титрами антител |
Доля** серонегативных лиц, % |
Среднегеометрические титры антител |
||||||||
< 1:10 (2,3 log2) |
1:10 (3,3 log2) |
1:20 (4,3 log2) |
1:40 (5,3 log2) |
1:80 (6,3 log2) |
1:160 (7,3 log2) |
1:320 (8,3 log2) |
1:640 (9,3 log2) |
≥ 1:1280 (10,3 log2) |
||||||
Титр противогриппозных антител в популяции до вакцинации |
||||||||||||||
|
|
A (H1N1) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
А (H3N2) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
B |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
A (H1N1) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
A (H3N2) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
B |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
A (H1N1) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
A (H3N2) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
B |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
Титр противогриппозных антител у привитых через 1 месяц после вакцинации |
||||||||||||||
|
|
A (H1N1) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
А (H3N2) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
B |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
A (H1N1) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
A (H3N2) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
B |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
A (H1N1) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
A (H3N2) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
B |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
Титр противогриппозных антител в популяции после окончания эпидсезона |
||||||||||||||
|
|
A (H1N1) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
А (H3N2) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
B |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
A (H1N1) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
A (H3N2) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
B |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
A (H1N1) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
A (H3N2) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
B |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
________ * Используются только диагностические штаммы, рекомендованные для производства вакцины. ** С титром антител 1:20 и ниже. |
«___» __________20__ г. |
Руководитель лаборатории |