Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей
и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств
хлорантранилипрола в зеленой массе растений,
семенах сои и подсолнечника, в зерне кукурузы
и гороха и в растительных маслах методом
капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания
МУК 4.1.3417-17

Москва 2017

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, О.И. Рыбакова, П.В. Рязанцев, Е.Н. Тестова).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22 декабря 2016 г. № 2).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 14 февраля 2017 г.

4. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

 

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств
хлорантранилипрола в зеленой массе растений,
семенах сои и подсолнечника, в зерне кукурузы и
гороха и в растительных маслах методом
капиллярной газожидкостной хроматографии

Свидетельство о метрологической аттестации МВИ № РОСС RU.0001.310430/0253.12.02.2016 от 12.02.2016 г.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств хлорантранилипрола в зеленой массе растений, семенах сои и подсолнечника, зерне кукурузы и гороха и в растительных маслах в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Хлорантранилипрол

Название по ИЮПАК: 3-бром-4’-хлор-1-(3-хлор-2-пиридил)-2’-метил-6’-(метилкарбамоил) пиразол-5-карбоксанилид.

Эмпирическая формула: C₁₈H₁₄BrC₂N₅O₂.

Молекулярная масса: 483,15.

Агрегатное состояние: мелкий порошок.

Цвет, запах: белого цвета без запаха.

Структурная формула:

Давление насыщенного пара 6,3×10^-9 МПа при 25 °С.

Коэффициент распределения в системе октанол/вода при pH 7 и 20 °С: logP K_ow = 2,76.

Растворимость в воде (мг/дм³): при pH 4 - 0,972; при pH 7 - 0,88; при pH 9 - 0,971.

Растворимость в органических растворителях (мг/дм³): в ацетоне - 3446, в метаноле - 1714, в этилацетате - 1144, в ацетонитриле - 710.

Хлорантранилипрол быстро разлагается на свету. Полураспад при фотолизе в стерильном буфере pH 7 составляет 0,37 дней при постоянном освещении. При естественном освещении фотолиз хлорантранилипрола медленнее, ДТ₅₀ 33 дня.

Вещество долго сохраняется в почве с ДТ₅₀ в лаборатории 200 дней, в поле от 3 до 12 месяцев. Под покровом культур разрушается быстрее.

Стабилен при хранении в течение 2 лет.

Краткая токсикологическая характеристика. Ципросульфамид относится к мало опасным по острой оральной (ЛД₅₀ для крыс более 5000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД₅₀ для крыс более 5000 мг/кг), но к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК₅₀ для крыс (4 часа) более 5100 мг/дм³).

Область применения. Хлорантранилипрол - инсектицид кишечного действия, нарушающий баланс кальция в миофибриллах мускулов насекомых. Высокоэффективен против широкого спектра чешуекрылых, жесткокрылых, двукрылых вредителей (плодожорки, моли, листовертки, колорадский жук, калифорнийская щитовка, хлопковая совка, кукурузный стеблевой мотылек и др.).

Применяется для защиты кукурузы, сои и подсолнечника от вредителей с нормой расхода 0,02 - 0,03 кг д.в./га, с максимальной кратностью обработок 2. Применяется для борьбы с грызущими насекомыми с нормой расхода 0,01 - 0,06 кг д.в./га в зависимости от культуры в посадках картофеля, винограда, яблоневых садах.

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД - 2,0 мг/кг массы тела человека;

ОДК в почве - 0,2 мг/кг;

ПДК в воде водоемов - 0,2 мг/дм³;

ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 1,5 мг/м³;

ОБУВ в атмосферном воздухе - 0,007 мг/м³;

ВМДУ в продукции (мг/кг): зерно хлебных злаков - 0,02.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры для хлорантранилипрола

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный
интервал среднего результата для хлорантранилипрола

2. Метод измерения

Метод основан на определении хлорантранилипрола методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта путем перераспределения между двумя несмешивающимися фазами на колонках с окисью алюминия и концентрирующих патронах № 1, с последующим превращением хлорантранилипрола в его основной метаболит путем дериватизации.

Идентификация проводится по времени удерживания метаболита. Количественное определение - методом абсолютной калибровки, в пересчете на хлорантранилипрол.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные
устройства и материалы

3.1. Средства измерений

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Примечание. Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТу 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТу 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТу 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТу 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТу 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к определению

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с окисью алюминия для очистки экстракта, подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонках с окисью алюминия и концентрирующих патронах № 1, установление градуировочной характеристики.

7.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см³ аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °С, отбрасывают.

7.1.2. Очистка хлористого метилена

Хлористый метилен промывают равным объемом 5 %-го раствора натрия углекислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 12 - 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см³ аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре 40,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 40,0 °С, отбрасывают.

7.1.3. Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм³ и кипятят в течение 6 часов.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.

7.1.4. Очистка ацетона

Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм³.

Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °С отбрасывают.

7.2. Приготовление растворов для проведения анализа

7.2.1. Приготовление рабочих растворов

7.2.1.1. Приготовление 1,0 %-го водного раствора аммиака для дериватизации. Мерной пипеткой отбирают 1 см³ 25 %-го раствора аммиака и переносят в мерную колбу на 25 см³, куда предварительно наливают около 10 см³ бидистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и доводят объем в колбе до метки бидистиллированной водой (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой). Полученный раствор хранят под тягой в течение одного месяца.

7.2.1.2. Приготовление 4 н раствора серной кислоты. Мерным цилиндром отбирают 112 см³ концентрированной серной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 1000 см³, куда предварительно наливают около 300 см³ дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.2. Приготовление градуировочных растворов

7.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией хлорантранлипрола 1,0 мг/см³. Взвешивают 50 мг хлорантранилипрола в мерной колбе объемом 50 см³. Навеску растворяют в ацетоне, помещая колбу в ультразвуковую ванну, и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике не более 4 месяцев.

7.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией хлорантранилипрола 10,0 мкг/см³. Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 100 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией хлорантранилипрола 1,0 мкг/см³. Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 3 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики после его дериватизации. Стандартный раствор № 4 хранится в холодильнике не более 10 суток.

7.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией хлорантранилипрола 0,5 мкг/см³. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 4 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики после его дериватизации. Стандартный раствор № 4 хранится в холодильнике не более 10 суток.

7.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией хлорантранилипрола 0,2 мкг/см³. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 5 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики после его дериватизации. Стандартный раствор № 5 хранится в холодильнике не более 10 суток.

7.2.2.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией хлорантранилипрола 0,1 мкг/см³. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 6 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики после его дериватизации. Стандартный раствор № 6 хранится в холодильнике не более 10 суток.

7.3. Дериватизации (превращение хлорантранилипрола
в метаболит)

7.3.1. Дериватизации стандартных растворов

В четыре виалы объемом 40 см³ помещают по 2 см³ каждого стандартного раствора хлорантранилипрола в ацетоне (№ 3, 4, 5 и 6 соответственно), удаляют растворитель током теплого воздуха.

К сухому остатку в виале добавляют 0,8 см³ ацетона и растворяют, помещая виалу в ультразвуковую ванну на 2 минуты. В виалу добавляют 2 см³ 1,0 %-го водного раствора аммиака и помещают виалу в ультразвуковую ванну еще на 2 минуты. Плотно (!) закрывают виалу крышкой и помещают в нагревательный блок для виал на 2 часа при 75 °С. Далее виалу охлаждают до комнатной температуры, добавляют в нее 10 см³ этилацетата и интенсивно встряхивают смесь. После полного разделения фаз из верхнего этилацетатного слоя аликвоту 5 см³, переносят в концентратор и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.

Сухой остаток растворяют в 10 см³ ацетона и 1 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Получают 4 раствора для установления градуировочной характеристики с концентрациями: 0,1; 0,05; 0,02; 0,01 мкг/см³, в пересчете на хлорантранилипрол.

7.3.2. Дериватизации проб

К сухому остатку в виале добавляют 0,8 см³ ацетона и растворяют, помещая виалу в ультразвуковую ванну на 2 минуты. В виалу добавляют 2 см³ 1,0 %-го водного раствора аммиака и помещают виалу в ультразвуковую ванну еще на 2 минуты. Плотно (!) закрывают виалу крышкой и помещают в нагревательный блок для виал на 2 часа при 75 °С. Далее виалу охлаждают до комнатной температуры, добавляют в нее 10 см³ этилацетата и интенсивно встряхивают смесь. После полного разделения фаз из верхнего этилацетатного слоя аликвоту 5 см³, переносят в концентратор и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.

Сухой остаток растворяют в 5 см³ ацетона и 1 мм³ пробы вводят в хроматограф.

7.4. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации хлорантранилипрола в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,01; 0,02; 0,05 и 0,10 мкг/см³.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

7.5. Подготовка колонки с окисью алюминия
для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения
хлорантранилипрола на ней

7.5.1. Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта

В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 3 г окиси алюминия с зернением 40/250 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 см³ ацетонитрила.

7.5.2. Проверка хроматографического поведения
хлорантранилипрола на колонке с окисью алюминия

В концентратор объемом 100 см³ вносят 1 см³ стандартного раствора хлорантранилипрола в ацетоне с концентрацией 1,0 мкг/см³ и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С. Сухой остаток растворяют в 10 см³ ацетонитрила, помещая виалу в ультразвуковую ванну на 30 с, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³ и упаривают досуха при температуре не выше 35 °С.

Исходную колбу обмывают тремя порциями ацетонитрила объемом 10 см³ каждая и последовательно вносят их на колонку. Каждую порцию собирают отдельно в концентратор объемом 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С.

Сухой остаток каждой фракции переносят тремя порциями ацетона по 2 см³ каждая в виалы объемом 40 см³, удаляют растворитель током теплого воздуха и проводят дериватизацию, как указано в п. 7.3.1.

Определяют фракции, содержащие хлорантранилипрола, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.

Изучение поведения хлорантранилипрола на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии окиси алюминия.

7.6. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки
экстракта и проверка хроматографического поведения
хлорантранилипрола на них

7.6.1. Подготовка концентрирующего патрона № 1
для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см³/мин.

Патрон № 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см³ (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 20 см³ воды. Элюаты отбрасывают.

7.6.2. Проверка хроматографического поведения хлорантранилипрола
на концентрирующем патроне № 1

В концентратор объемом 100 см³ вносят 1 см³ стандартного раствора хлорантранилипрола в ацетоне с концентрацией 1,0 мкг/см³ и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С. Сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора, добавляют 8 см³ воды, перемешивают и наносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³ и выпаривают досуха при температуре не выше 35 °С.

Исходный концентратор обмывают 20 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, элюат собирают в концентратор объемом 100 см³ и выпаривают досуха при температуре не выше 35 °С. Концентрирующий патрон высушивают под вакуумом в течение двух минут. Исходный концентратор последовательно обмывают четырьмя порциями объемом 10 см³ каждая смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:3. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см³, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С.

Сухой остаток каждой фракции переносят тремя порциями ацетона по 2 см³ каждая в виалы объемом 40 см³, удаляют растворитель током теплого воздуха и проводят дериватизацию, как указано в п. 7.3.1.

Определяют фракции, содержащие хлорантранилипрол, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения хлорантранилипрола на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб проводится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», № 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТом 13586.3-83 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТом 6201-68 «Горох шлифованный. ТУ», ГОСТ Р ИСО 6497-11 «Корма для животных. Отбор проб», ГОСТом 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТом 17109-88 «Соя. Требования при заготовках и поставках», ГОСТом 31760-12 «Масло соевое. ТУ», ГОСТом 22391-89 «Подсолнечник. Требования при заготовках и поставках», ГОСТом 1129-13 «Масло подсолнечное, ТУ», ГОСТом 8808-2000 «Масло кукурузное, ТУ», ГОСТом 31760-12 «Масло соевое. ТУ», ГОСТом 32190-13 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб».

Пробы зеленой массы растений хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 - 4 °С не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °С до 2 лет.

Отобранные пробы зерна кукурузы и гороха, а также семян сои и подсолнечника подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Пробы растительных масел хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °С не более 10 суток.

9. Проведение определения

9.1. Зеленая масса растений

9.1.1. Экстракция

Образец измельченной зеленой массы растений массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³. Хлорантранилипрол экстрагируют 80 см³ этилацетата, помещая пробы в ультразвуковую ванну на 5 минут. Экстракты фильтруют через фильтр низкой плотности в концентратор объемом 250 см³. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 см³ этилацетата и помещая на 5 минут в ультразвуковую ванну. Экстракты фильтруют, объединяют в концентратор объемом 250 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С.

9.1.2. Очистка экстракта перераспределением
в системе несмешивающихся растворителей

К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.1, прибавляют 5 см³ ацетона, 50 см³ воды, перемешивают, тщательно обмывая стенки концентратора, и переносят в делительную воронку объемом 250 см³. Водную фазу подкисляют 4 н серной кислотой до pH 2. Добавляют 50 см³ хлористого метилена, перемешивают, дегазируют (обязательно!!!) и интенсивно встряхивают в течение 2 минут. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор объемом 250 см³, пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще два раза, используя каждый раз по 30 см³ хлористого метилена и встряхивая воронку в течение 2 минут. Хлористый метилен объединяют в концентраторе объемом 250 см³ и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.

9.1.3. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия

Сухой остаток в концентраторе, полученный по п. 9.1.2, растворяют в 10 см³ ацетонитрила, помещают на 30 секунд в ультразвуковую ванну, перемешивают и наносят на заранее подготовленную колонку, элюат собирают в концентратор объемом 100 см³. Исходную колбу обмывают 20 см³ ацетонитрила и вносят на колонку. Элюаты объединяют в концентраторе объемом 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С.

9.1.4. Дериватизация

Сухой остаток, полученный в п. 9.1.3, растворяют в 2 см³ ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, переносят в виалу. Процедуру повторят еще два раза, используя по 2 см³ ацетона, удаляют растворитель током теплого воздуха и проводят дериватизацию как указано в п. 7.3.2.

После дериватизации из верхнего слоя (этилацетата) отбирают аликвоту 5 см³, переносят в концентратор объемом 100 см³ и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 см³ ацетона и 1 мм³ пробы вводят в хроматограф.

9.2. Семена сои и подсолнечника, зерно кукурузы и гороха

9.2.1. Экстракция

Образец измельченных семян подсолнечника (сои, зерна кукурузы или гороха) массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см³, прибавляют 80 см³ ацетона и помещают сначала на 10 минут в ультразвуковую ванну, а затем на аппарат для встряхивания проб на 10 минут. Затем пробу центрифугируют в течение 3 минут при скорости 4000 оборотов в минуту. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см³ через фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 см³ ацетона в тех же условиях. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С.

9.2.2. Очистка экстракта перераспределением
в системе несмешивающихся растворителей

К масляному остатку в концентраторе, полученному по п. 9.2.1, прибавляют 50 см³ гексана, перемешивают, тщательно обмывая стенки концентратора, и переносят в делительную воронку объемом 250 см³. Хлорантранилипрол экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 30 см³, каждый раз интенсивно встряхивая воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (ацетонитрил) объединяют в конической колбе объемом 250 см³. Гексан отбрасывают.

Ацетонитрильный экстракт переносят в чистую делительную воронку объемом 250 см³ и промывают двумя порциями гексана по 30 см³, каждый раз интенсивно встряхивая воронку 2 минуты. Ацетонитрил собирают в концентратор объемом 250 см³, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.2 «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей» и по п. 9.1.3 «Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия».

9.2.3. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1

Сухой остаток, полученный после очистки экстракта на колонках с окисью алюминия, растворяют в 2 см³ ацетонитрила, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну, перемешивают, прибавляют 8 см³ воды, перемешивают и вносят на заранее подготовленный патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 20 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4 и вносят на патрон, элюат отбрасывают. Концентрирующий патрон высушивают под вакуумом в течение 2 минут.

Хлорантранилипрол элюируют с патрона 30 см³ смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:3. Элюат собирают в концентраторе объемом 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С.

Далее проводят дериватизацию как указано в п. 7.3.2.

После дериватизации из верхнего слоя (этилацетата) отбирают аликвоту 5 см³, переносят в концентратор объемом 100 см³ и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 см³ ацетона и 1 мм³ пробы вводят в хроматограф.

9.3. Растительные масла

9.3.1. Экстракция и очистка полученного экстракта
в системе несмешивающихся растворителей

Из пробы растительного масла отбирают в стакан навеску массой 10 г и переносят ее в делительную воронку объемом 250 см³ двумя порциями гексана объемом по 25 см³. Хлорантранилипрол экстрагируют тремя порциями ацетонитрила по 50 см³, каждый раз интенсивно встряхивая воронку в течение 2 минут. Гексановый слой отбрасывают, а ацетонитрильный экстракт возвращают в чистую делительную воронку.

Ацетонитрильный экстракт промывают двумя порциями гексана объемом по 30 см³. Гексан отбрасывают, а ацетонитрил собирают в концентратор объемом 250 см³ через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С.

9.3.2. Очистка экстракта перераспределением
в системе несмешивающихся растворителей

К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.3.1, прибавляют 5 см³ ацетона, 50 см³ воды, перемешивают, тщательно обмывая стенки концентратора, и переносят в делительную воронку объемом 250 см³ через фильтр низкой плотности. Водную фазу подкисляют 4 н серной кислотой до pH 2. Добавляют 30 см³ хлористого метилена, перемешивают, дегазируют (обязательно!!!) и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор объемом 250 см³, пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще два раза, используя каждый раз по 30 см³ хлористого метилена и встряхивая воронку в течение 2 мин. Хлористый метилен объединяют в концентраторе объемом 250 см³ и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.3 «Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия» и по п. 9.2.3 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1».

После очистки проводят дериватизацию как указано в п. 7.3.2.

После дериватизации из верхнего слоя (этилацетата) отбирают аликвоту 5 см³, переносят в концентратор объемом 100 см³ и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 см³ ацетона и 1 мм³ пробы вводят в хроматограф.

9.4. Условия хроматографирования

Хроматографическая система, включающая:

- хроматограф газовый с детектором по захвату электронов (ЭЗД), снабженный приспособлениями для капиллярной колонки и с возможностью использования автосамплера на 16 проб с дополнительным лотком на 150 виал, с микрошприцем для газовой хроматографии объемом до 10 мм³ для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему;

- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.

Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла с внутренний диаметром 0,32 мм, длиной 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 5 % фенилсилоксана и 95 % метилсилоксана, толщина пленки 0,25 мкм.

Температура детектора - 320 °С, поток газа поддувки (азот) - 25,0 см³/мин.

Температура испарителя - 300 °С, тип газа гелий, режим Split, давление 17,99 psi, деление потока 20:1, общий поток 57,6 см³/мин, поток обдува септы 3,0 см³/мин.

Программированный нагрев колонки с 180 °С (выдержка 1 мин) по 25 град/мин до 270 °С, с 270 °С по 5 град/мин до 300 °С (выдержка 5 мин), режим постоянный поток, поток колонки 2,6 см³/мин, средняя скорость 48,6 см/с.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,01 - 0,1 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор IN-EQW78 с концентрацией 0,1 мкг/см³ в пересчете на хлорантранилипрол, соответственно разбавляют.

10. Обработка результатов анализа

Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание хлорантранилипрола рассчитывают по формуле, без учета полноты извлечения вещества из проб:

X - содержание хлорантранилипрола в пробе, мг/кг;

S_cm - высота (площадь) пика стандарта, мВ;

S_np - высота (площадь) пика образца, мВ;

А - концентрация стандартного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m - масса анализируемого образца, г;

Р - содержание хлорантранилипрола в аналитическом стандарте, %.

11. Проверка приемлемости результатов
параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

X₁, Х₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8×σ_r.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

 - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг»^*

________

^* 0,01 мг/кг - предел обнаружения.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

Контроль стабильности градуировочной характеристики для IN-EQW78 в пересчете на хлорантранилипрол проводят при смене основного градуировочного раствора № 1 каждые четыре месяца, при смене основного градуировочного раствора № 2 - каждый месяц, при смене основных градуировочных растворов 3, 4, 5 и 6 - каждые 10 суток, а также в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание IN-EQW78 в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,01 до 0,1 мкг/см³ в пересчете на хлорантранилипрол.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

X - концентрация IN-EQW78 контрольного измерения, мкг/см³;

С - известная концентрация градуировочного раствора IN-EQW78 в ацетоне, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

7 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (А) превышает 7 %, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов IN-EQW78, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.4.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

 - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

, С_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

X₁, Х₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Приложение 1

Полнота извлечения хлорантранилипрола из зеленой массы
растений, семян сои и подсолнечника, зерна кукурузы и гороха
и из растительных масел

(5 повторностей для каждой концентрации, Р = 0,95)