МУ 3.3.1.1099-02

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ


3.3.1. ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА

Безопасность работы с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства

     
     
Дата введения 2002-04-01

1. РАЗРАБОТАНЫ Российским научно-исследовательским институтом "Микроб" Министерства здравоохранения Pocсийской Федерации (д.м.н. И.А.Дятловым, к.м.н. А.К.Никифоровым, к.м.н. С.А.Ереминым); Государственным НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича Министерства здравоохранения Российской Федерации (д.м.н. А.А.Мовсесянцем, к.м.н. И.А.Озерецковским, н.с. Г.Б.Агеенко).

2. РЕКОМЕНДОВАНЫ к утверждению комиссией но государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России (прот. N 10 от 13 декабря 2001 г.).

3. УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 15 января 2002 года. Введены в действие 1 апреля 2002 года.

4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

           

1.1. Настоящие методические указания разработаны в соответствии с Федеральным законом "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ, "Положением о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании" и санитарными правилами "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами. СП 1.2.731-99".

1.2. Требования настоящих методических указаний обязательны для органов и учреждений здравоохранения субъектов Российской Федерации.

2. Нормативные ссылки

           

В настоящих методических указаниях использованы ссылки на следующие нормативные документы:

2.1. Федеральный закон "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" N 52-ФЗ от 30 марта 1999 г.

2.2. Санитарные правила "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами. СП 1.2.731-99".

2.3. Санитарные правила "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. СП 1.2.036-95".

2.4. Санитарные правила "Общие требования по профилактике инфекционных и паразитарных заболеваний. СП 3.1/3.2.558-96".

2.5. Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев), утв. Минздравом СССР от 6 апреля 1973 N 1045-73.

2.6. Строительные нормы и правила "Общественные здания и сооружения". СНиП 2.08.02-89 и "Пособие по проектированию учреждений здравоохранения" в 5 томах. - Т.1, 3, 5. Госгражданстрой. - М., 1989.

2.7. ОСТ-42-21-2-85 "Стерилизация и дезинфекция изделий медицинского назначения. Методы, средства. Режимы".

2.8. Приказ "Об утверждении временных перечней вредных, опасных веществ и производственных факторов, а также работ, при выполнении которых проводятся предварительные и периодические медицинские осмотры", утв. Минздравмедпромом и Госкомсанэпиднадзором России от 05.10.95 N 280/88.

2.9. "Инструкция по эксплуатации и контролю эффективности вентиляционных устройств на объектах здравоохранения", утв. Минздравом СССР от 20 марта 1975 г.

2.10. "Методические рекомендации по проектированию вирусологических лабораторий", утв. Минздравом СССР от 28 декабря 1990 N 15-6/51.

2.11. "Методические указания по применению бактерицидных ламп для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях", утв. Минздравмедпромом России oт 28.02.95 N 11-16/03-06.

2.12. "Методические указания по контролю работы паровых и воздушных стерилизаторов", утв. Минздравом СССР от 28 февраля 1991 г. N 15/6-5.

2.13. "Правила техники безопасности, производственной санитарии и санитарно-противоэпидемического режима для предприятий по производству бактерийных и вирусных препаратов", утв. Минздравом СССР от 30 августа 1979 г.

2.14. Методы лабораторных исследований по бешенству. ВОЗ. - Женева,1975.

3. Термины, определения и сокращения

           

Авария - нештатная ситуация, при которой создается реальная или потенциальная возможность выделения патогенного агента в воздух производственной зоны, окружающую среду или заражение персонала.

Биологическая безопасность - система медико-биологических, организационных и инженерно-технических мероприятий и средств, направленных на защиту работающего персонала, населения и окружающей среды от воздействия патогенных биологических агентов.

Бокс биологической безопасности - конструкция, используемая для физической изоляции (удержания и контролируемого удаления из рабочей зоны) микроорганизмов с целью предотвращения возможности заражения персонала и контаминации воздуха рабочей зоны и окружающей среды.

Боксированное помещение (бокс) - изолированное помещение с тамбуром (предбоксником).

Лаборатория - структурное подразделение, выполняющее экспериментальные и /или/ производственные работы с патогенными биологическими агентами.

"Заразная" зона - помещение или группа помещений лаборатории, где осуществляются манипуляции с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства.

"Чистая" зона - помещение или группа помещений лаборатории, где не проводятся манипуляции с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства.

Производственная работа - работа по производству медицинских иммунобиологических препаратов с использованием производственных штаммов фиксированного вируса бешенства.

Фиксированный вирус бешенства* - аттенуированный штамм вируса бешенства, полученный путем длительного пассирования через головной мозг кролика. Производственные штаммы фиксированного вируса бешенства хранятся в ГИСК им. Л.А.Тарасевича и выдаются один раз в год учреждениям, имеющим право на работу с микроорганизмами III-IV группы патогенности.

_______________

* Например, штаммы фиксированного вируса бешенства "Москва" и "CVS".

СИЗ - средства индивидуальной защиты.

4. Требования к организации работы с производственными штаммами
фиксированного вируса бешенства

     

4.1. Общие требования

Работа с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства может проводиться в лабораториях, имеющих разрешение, выданное в установленном порядке Главным государственным санитарным врачом субъекта Российской Федерации сроком на 5 лет. Оно утрачивает силу при передислокации или перепланировке лаборатории, а также может быть аннулировано при нарушениях требований биологической безопасности.

4.2. Требования к производственным штаммам фиксированного вируса бешенства

Комитет экспертов ВОЗ (1972) рекомендовал следующие требования к производственным штаммам фиксированного вируса бешенства:

- тщательная регистрация истории пассажей;

- проведение в производстве не более 10 пассажей с момента последнего контроля его биологических свойств;

- минимальная патогенная активность для лабораторных животных при экстраневральном введении;

- антигенная специфичность и иммуногенная активность;

- изучение свойств производственного штамма фиксированного вируса бешенства после каждых 10 пассажей.

Фиксированный вирус бешенства должен иметь следующие основные признаки:

- короткий инкубационный период (4-5 дней);

- большую патогенность для кроликов при интрацеребральном заражении;

- значительное ослабление способности образовывать тельца Негри;

- вызывать паралитическую форму бешенства без явлений возбуждения;

- накопление в ЦНС мышей до 6,0-7,0 IgLD/0,03 мл;

- высокую тропность к ЦНС и низкую тропность к внутренним органам.

4.3. Требования к помещениям и оборудованию лаборатории

4.3.1. Лаборатории, работающие с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства должны располагаться в отдельно стоящем здании или изолированной части здания с отдельным входом.

4.3.2. Лаборатория должна быть обеспечена водопроводом, канализацией, электричеством, отоплением и вентиляцией. Все помещения лаборатории должны иметь естественное и искусственное освещение в зависимости от вида работ в соответствии с требованиями действующих нормативных документов.

4.3.3. Помещения лаборатории должны быть разделены на "заразную" и "чистую" зоны. Планировочные решения и размещение оборудования должны обеспечивать поточность продвижения производственных штаммов фиксированного вируса бешенства и выполнение требований настоящей инструкции.

4.3.4. Лаборатория должна иметь набор рабочих комнат и других помещений, включая душевую комнату, в соответствии с производственной мощностью и номенклатурой выполняемых технологических операций.

4.3.5. Внутренняя отделка помещений должна быть выполнена в соответствии с функциональным назначением. Поверхность пола, стен, потолка в лабораторных помещениях "заразной" зоны должна быть гладкой, без щелей, легко обрабатываемой, устойчивой к действию моющих и дезинфицирующих средств, полы не должны быть скользкими.

4.3.6. Окна и двери помещений "заразной" зоны лаборатории должны быть герметичными.

4.3.7. Имеющаяся вытяжная вентиляция из "заразной" зоны лаборатории должна быть изолирована от других вентиляционных систем и оборудована фильтрами тонкой очистки воздуха. При использовании боксов биологической безопасности II класса, снабженных системой вытяжной вентиляции с фильтрами тонкой очистки типа "Лайк", система вытяжной вентиляции может быть использована без установки фильтров.

4.3.8. Разрешается установка кондиционеров в рабочих комнатах и боксах. Во время работы с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства кондиционеры должны быть отключены.

4.3.9. Лабораторная мебель в "заразной" зоне должна иметь покрытие, устойчивое к действию моющих и дезинфицирующих средств. Поверхность столов не должна иметь швов и трещин.

4.3.10. Ширина проходов к рабочим местам или между двумя рядами выступающего оборудования должна быть не менее 1,5 м (с учетом выступающих конструкций).

4.3.11. Помещения, где проводится работа с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства, должны быть оборудованы бактерицидными лампами в соответствии с "Методическими указаниями по применению бактерицидных ламп для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях". Лампы включают после проведения влажной уборки. Вход в помещение разрешается только после проветривания не менее 30 мин (при применении безозоновых бактерицидных ламп проветривания не требуется). Необходимо вести учет времени работы каждой лампы с отметкой в журнале.

4.3.12. При ориентации окон на юг необходимо предусмотреть защиту рабочих столов от попадания прямого солнечного света путем использования светозащитных пленок, жалюзи из материала, устойчивого к дезинфектантам.

4.3.13. Помещения лабораторий должны быть непроницаемы для грызунов и насекомых.

4.3.14. Лаборатория должна быть обеспечена средствами пожаротушения.

4.4. Требования к проведению работ в лаборатории

4.4.1. Работу с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства выполняют специалисты с высшим и средним специальным образованием, прошедшие специальную подготовку.

4.4.2. Персонал допускается к работе с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства после проведения инструктажа по соблюдению требований биологической безопасности. Последующие инструктажи проводят не реже 1 раза в год, с записями в соответствующих журналах.

4.4.3. Приборы, оборудование и средства измерений, используемые в работе лаборатории, должны быть аттестованы, технически исправны, подвергаться метрологическому контролю в установленные сроки, иметь технический паспорт. На каждый прибор (установку) должны быть разработаны правила (инструкция) по их эксплуатации с учетом требований биологической безопасности.

4.4.4. В лаборатории должны использоваться дезинфицирующие средства, допущенные к применению (3%-ный хлорамин). Срок хранения готового раствора не должен превышать 15 суток.

4.4.5. В помещениях "заразной" зоны лаборатории проводятся:

- работа с животными (заражение, вскрытие);

- содержание инфицированных животных;

- дезинтеграция, гомогенизация мозговых тканей и другие операции с вероятным образованием аэрозоля;

- заражение культуры клеток;

- приготовление взвесей и суспензий;

- работа с лиофилизированными производственными штаммами фиксированного вируса бешенства.

4.4.6. Во время работы двери рабочих комнат должны быть закрыты. Перед работой включается вентиляция "на отток". Выход из рабочей комнаты во время проведения работы запрещается.

4.4.7. Заражение животных осуществляется не менее чем двумя сотрудниками.

4.4.8. При пипетировании необходимо пользоваться резиновыми грушами или автоматическими устройствами.

4.4.9. Перед использованием посуда, пипетки, оборудование, шприцы и т.д. должны быть проверены на целостность и исправность.

4.4.10. Ампулы с лиофилизированными производственными штаммами фиксированного вируса бешенства вскрывают стерильно над подносом или лотком с марлевой салфеткой, пропитанной дезинфицирующим раствором. Верхний конец ампулы нагревают над пламенем горелки, снимают парафин, затем кусочком стерильной ваты, смоченным в стерильной воде, осторожно прикасаются к оттянутому концу ампулы для образования трещины. Той же влажной ватой обводят вокруг носика ампулы. После образования круговой (или не полностью круговой) трещины конец ампулы накрывают марлевой салфеткой или ватой и обламывают пинцетом.

4.4.11. После вскрытия ампулы в нее добавляют 1,0 мл стерильной дистиллированной воды и осторожно встряхивают. Полученную суспензию, содержащую фиксированный вирус бешенства используют для заражения лабораторных животных.

4.4.12. Для внутримозгового заражения кролика его надежно фиксируют на специальном станке или дают легкий наркоз (2-2,5 мл раствора Рометара внутримышечно за 20-30 мин до заражения). Затем аккуратно выстригают шерсть в зоне предполагаемого введения, обрабатывают 70%-ным раствором этанола и 5%-ным раствором йода и с помощью стерильного шприца емкостью 2 мл и иглы размером N 20: (10х0,90) вводят 0,25 мл суспензии фиксированного вируса бешенства штамм. Прокол делают приблизительно на середине линии, условно соединяющей наружный угол глаза и ухо. При заражении крупных кроликов можно пользоваться шилом из нержавеющей стали или троакаром. Явные признаки паралича появляются у кроликов на 4 день после инокуляции; в редких случаях они развиваются до 7 дня. Извлечение мозга производят у животного только после развития полной картины паралича, характерного для фиксированного вируса бешенства. К числу первых симптомов экспериментального бешенства относятся: повышение температуры тела, пугливость и расширение зрачков. Затем появляются менингеальные явления, парезы, начинающиеся обычно с задних конечностей, быстро прогрессирующие параличи, захватывающие все конечности, шейную и затылочную мускулатуру.

4.4.13. Больных кроликов с картиной полного паралича, но с еще сохранившимся дыханием забивают путем тотального обескровливания. Головной мозг используется для изготовления рабического антигена. После декапитации производят снятие шкурки, отделяют позвоночник вместе со спинным мозгом, которые подвергают автоклавированию (2,0 кГс/см(0,2 МПа). 132±2 °С), как заразный материал.

4.4.14. Для извлечения головного мозга животное укладывают на секционный лоток животом вниз так, чтобы голова оказалась на краю стола. С помощью пинцета, скальпеля и ножниц отделяют голову от туловища. Затем скальпируют кожу головы, удаляя уши и верхние веки. Обнаженную поверхность черепа смачивают 70%-ным спиртом и помещают в кристаллизатор. Кристаллизатор переносят в стерильный бокс для приготовления антигена. Перед вскрытием черепа его двухкратно обрабатывают 70%-ным этиловым спиртом. Затем череп кролика закрепляют в специальное приспособление (прилож.1), обеспечивающее надежную фиксацию головы животного. Удерживая секционный нож в левой руке, правой рукой с помощью молотка вскрывают черепную коробку четырьмя прямоугольными разрезами. Сначала следует сделать разрез по линии соединяющей середины глаз, затем разрез в теменной области, а затем соединить эти два разреза перпендикулярными разрубами. Затем, отложив в сторону секционный нож и молоток, с помощью пинцета и ножниц высвобождают твердую мозговую оболочку и переднюю часть мозга отделяют на уровне обонятельной доли; пересекают продолговатый мозг позади мозжечка, приподнимают мозг, пересекают перекрест зрительных нервов и затем переносят его на стерильную чашку Петри для взвешивания.

4.4.15. Для приготовления антигена головной мозг после взвешивания помещают в стерильную ступку или гомогенизатор и измельчают. К измельченному мозгу добавляют дистиллированную воду, содержащую 0,5% фенола до получения 10%-ной мозговой суспензии. Суспензию мозга фильтруют через тройной слой марли. Стерильность мозговой суспензии проверяют посевом на сахарный бульон, мясопептонный агар и мясопептонный бульон с 0,1% агара и кусочками мяса. Посевы выдерживаются при 37 °С в течении 5 сут. Разрешается для иммунизации лошадей-продуцентов использовать стерильный антиген, сохранившийся при температуре 4 °С не более 14 сут.

4.4.16. Для приготовления исходных культур фиксированного вируса бешенства головной мозг кролика помещают в стерильную ступку или гомогенизатор и измельчают. К измельченному мозгу добавляют дистиллированную воду до получения 10% мозговой суспензии. Стерильность мозговой суспензии проверяют посевом на сахарный бульон, мясопептонный агар и мясопептонный бульон с 0,1% агара и кусочками мяса. Мозговую взвесь разливают стерильно по аликвотам объемом 4-5 мл и замораживают при температуре не выше минус 18 °С. Оптимальной температурой для хранения штаммов фиксированного вируса бешенства является минус 70 °С. Для заражения достают одну аликвоту из морозильника и помещают в холодильник на 4 °С на 18-20 ч. После оттаивания осторожно пастеровской пипеткой отбирают среднюю фазу мозговой суспензии, содержащую максимальное количество вируса.

4.4.17. Для проведения реакции нейтрализации и определения LD штаммов фиксированного вируса бешенства используют беспородных белых мышей или мышей любой инбредной линии в возрасте 6-8 недель и весом 11,0±1,0 г. Пол мышей принципиального значения не имеет. Животные должны быть в хорошем состоянии. Непосредственно перед заражением необходимо тщательно осмотреть всех животных. При обнаружении эктопаразитов, взъерошенной шерсти или признаков диареи животные не используются. Мышь укладывают головой на деревянную подставку толщиной 1 см и надежно, но не сильно, чтобы не вызвать асфиксию, фиксируют пальцами. Экспериментатор берет в левую руку тампон, смоченный 70%-ным этиловым спиртом, и тщательно обрабатывает место предполагаемого введения. Затем, взяв в правую руку шприц, придает ему строго вертикальное положение и быстрым движением прокалывает иглой череп животного в точке, находящейся в вершине воображаемого угла, стороны которого ведут к правому глазу и правому уху животного. Игла легко проникает через кость и погружается далее на 0,1-0,2 см в ткань мозга. При этой манипуляции следует применять иглы N 0416 длиной не более 1,5 см. Продвинув поршень до конца, осторожно извлекают иглу. Объем вводимого материала не более 0,03 мл. Зараженную мышь следует тотчас поместить в предварительно заготовленную банку с этикеткой, на которой указывают название вируса, заражающую дозу и другие необходимые отметки. Если заражают большую группу животных, по окончании эксперимента необходимо точно проконтролировать число живых мышей в каждой группе. При обнаружении погибших животных надо провести дополнительную инокуляцию, добавив в группу недостающее число мышей. После того как инокуляция всех мышей закончена, шприцы с иглами осторожно разбирают и погружают в воду, находящуюся в стерилизаторе. Инструменты стерилизуют кипячением в течение 30 мин. Инкубационный период штаммов фиксированного вируса бешенства равняется 5-6 дням, поэтому экспериментальных животных, павших ранее 5 дня в эксперименте не учитывают. Животных осматривают ежедневно, начиная со следующего дня после заражения. Число нормальных, больных и погибших животных регистрируют на специальной карте, которая служит постоянным протоколом опыта. Период наблюдения составляет 14 сут.

4.4.18. Правила вскрытия мышей. Мышей забивают в состоянии выраженных терминальных симптомов бешенства хлороформом. Труп мыши фиксируют на дощечке спиной кверху. Для этого необходимо две булавки - одной прикалывают основание хвоста, другой - кончик морды. Можно пользоваться и тремя булавками, чтобы фиксировать передние лапы и хвост. После обработки спиртом кожу головы и шеи отпрепаровывают с помощью ножниц и пинцета, открывая череп. Череп зажимают в глазницах хирургическим пинцетом, изогнутыми ножницами отделяют крышку черепа, обнажая мозг. С помощью тех же изогнутых ножниц извлекают мозг и переносят в стерильную чашку Петри, которую заранее взвешивают. Производят взвешивание чашки Петри с мозговой тканью. Затем мозг переносят в стерильную ступку, где с помощью стерильного пестика приготавливают 10%-ную мозговую взвесь с добавлением дистиллированной воды. Взвесь разливают по аликвотам и хранят при температуре не ниже минус 18 °С, Оптимальной температурой для хранения штаммов фиксированного вируса бешенства является минус 70 °С.

4.4.19. По окончании работы все объекты с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства должны быть убраны в хранилища (холодильники, термостаты, шкафы и т.д.); в обязательном порядке проводится дезинфекция рабочих поверхностей столов 3%-ным раствором хлорамина.

4.4.20. Использованные пипетки полностью (вертикально) погружаются в дезинфицирующий раствор (3%-ный хлорамин), избегая образования в каналах пузырьков воздуха. Длительность дезинфекции 60 мин.

4.4.21. Использованная посуда, твердые отходы из "заразной" зоны лаборатории должны собираться в закрывающиеся емкости и передаваться в автоклавную или дезинфицироваться на месте. Слив необеззараженных жидкостей в канализационную сеть запрещается.

4.4.22. Перенос производственных штаммов фиксированного вируса бешенства и использованной посуды для обеззараживания должен осуществляться в закрытых емкостях, исключающих инфицирование персонала во время транспортирования. После завершения работы помещение "заразной" зоны лаборатории запирается и опечатывается. Опечатывание и снятие печатей производят сотрудники лаборатории, имеющие разрешение руководителя лаборатории (подразделения).

4.4.23. Иммунизацию лошадей-продуцентов осуществляют согласно регламента производства "Иммуноглобулина антирабического жидкого из сыворотки крови лошади".

4.4.24. Правила введения антигена. Введение антигена лошади производится в специально оборудованном помещении (операционной). Сотрудники, осуществляющие инъекцию антигена, одеты в противочумный костюм 3-типа с резиновыми перчатками. Для введения антигена используют прибор для массовых прививок ПМП-1, который соединяется посредством силиконового шланга с иглой и флаконом с антигеном. Вся инъекционная система соединяется герметично. Место введения антигена предварительно обрабатывают 70%-ным раствором спирта. Иглу вводят подкожно и под небольшим давлением медленно вводят антиген. После инъекции вентилем перекрывают подачу антигена, кожу на месте введения иглы зажимают кровоостанавливающим пинцетом на 1 мин. Пинцет снимают, место инъекции обрабатывают тампоном, смоченным 70%-ным раствором спирта, и накладывают тампон с коллодием или фурапластом с перхлорвинилом. После использования вся инъекционная система подвергается кипячению в течение 30 мин в 2%-ном содовом растворе. В процессе гипериммунизации постоянно следят за общим состоянием и температурной реакцией продуцентов. В случае повышения температуры очередную инъекцию антигена производят после ее снижения до нормы.

4.4.25. Хранение производственных штаммов фиксированного вируса бешенства осуществляется в помещениях заразной зоны. Хранение, учет, передача, транспортирование и уничтожение производственных штаммов фиксированного вируса бешенства проводятся в соответствии с требованиями СП 1.2.036-95.

4.4.26. Прием посетителей разрешается только в специально отведенных местах в "чистой" зоне лаборатории.

4.4.27. Вынос из лаборатории оборудования, лабораторной или хозяйственной посуды, инструментов и др. производится только после их дезинфекции и с разрешения ее руководителя.

4.4.28. В "заразной" зоне лаборатории запрещается:

- оставлять после окончания работы на рабочих местах посуду с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства "Москва" и "CVS";

- пипетировать ртом, переливать жидкий инфекционный материал через край сосуда (пробирки, колбы, флакона);

- хранить верхнюю одежду, головные уборы, обувь, зонты, хозяйственные сумки, косметику и т.п., а также продукты питания;

- курить, пить воду;

- оставлять без надзора рабочее место во время выполнения любого вида работ с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства;

- сливать жидкие отходы (инфицированные жидкости, исследуемый материал и т.д.) в канализацию без предварительного обеззараживания.

4.4.29. Допускается в одном и том же помещении проведение экспериментальных и производственных работ с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства. Экспериментальная и производственная работа должны быть разнесены по времени. Экспериментальный материал должен храниться отдельно от производственного в специально отведенном для него холодильнике или термостате.

4.4.30. Все сотрудники, работающие с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства, должны находиться на диспансерном наблюдении. Периодические медицинские осмотры проводятся в соответствии с действующими приказами (N 280/88 - Минздравмедпром и Госкомсанэпиднадзор России).

4.5. Требования к порядку использования средств индивидуальной защиты (СИЗ)

4.5.1. Сотрудники лаборатории должны быть обеспечены медицинскими халатами, пижамами (комбинезонами), шапочками, сменной обувью и другими средствами индивидуальной защиты в зависимости от характера выполняемых работ и в соответствии с действующими нормами.

4.5.2. Рабочая одежда и обувь должны быть индивидуальными, соответствовать размерам работающих и храниться отдельно от личной одежды.

4.5.3. При проведении исследований в боксированных помещениях производится смена медицинского халата на противочумный или хирургический, доходящий до нижней трети голени. Дополнительно используются резиновые перчатки, тапочки и, при необходимости, респираторы (маски). Операции, требующие вскрытия черепа и позвоночника необходимо проводить в резиновых перчатках, защитных очках и в противочумных халатах. Необходимо также надевать резиновые или прочные полиэтиленовые фартуки, которые легко дезинфицировать или уничтожить.

4.5.4. Смена рабочей одежды должна проводиться по мере загрязнения, но не реже 1 раза в неделю.

4.5.5. Перед сдачей в стирку защитная одежда должна быть обеззаражена замачиванием в растворе 1%-ного хлорамина.

4.6. Требования к обеззараживанию материала и уборке помещений

4.6.1. Дезинфекцию различных объектов при работе с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства проводят в соответствии с характером объекта, подлежащему обеззараживанию.

Таблица

Примечание: в случае аварии залить зараженные поверхности одним из перечисленных выше растворов на 2 ч.

Методы и средства обеззараживания определяются в каждом отдельном случае в зависимости от характера обеззараживаемого материала.

4.6.2. В лаборатории должен храниться минимум недельный запас дезинфицирующих средств.

4.6.3. Вновь поступающие на склад серии дезинфицирующих средств необходимо контролировать на содержание действующего вещества.

4.6.4. Дезинфицирующие растворы готовит лаборант или дезинфектор. На емкости с дезинфицирующим раствором должно быть указано его название, концентрация и дата приготовления.

4.6.5. Перенос материала для обеззараживания внутри подразделения производится в специальных емкостях (баках, ведрах, биксах с крышками).

4.6.6. Текущая уборка помещений проводится ежедневно влажным способом после окончания рабочего дня: в "чистой" зоне лаборатории с применением моющих средств, в "заразной" зоне с применением 1%-ного раствора хлорамина.

4.6.7. Уборочный инвентарь должен быть промаркирован отдельно для "чистой" и "заразной" зон. Перенос его из зоны в зону не допускается.

4.6.8. В боксовых помещениях должна проводиться еженедельная генеральная уборка с применением 1%-ного раствора хлорамина путем протирания поверхности мебели, приборов, аппаратов, а также стен (на высоту до 2 м). После влажной уборки включают бактерицидные лампы на 30 мин.

4.6.9. Стеклянные поверхности бактерицидных ламп следует протирать ветошью, смоченной 70%-ным спиртом, не реже 1 раза в неделю.

4.7. Требования к порядку содержания животных

4.7.1. Содержание кроликов, зараженных производственными штаммами фиксированного вируса бешенства, можно проводить в клетках открытого типа.

4.7.2. После убоя животного клетки протираются 3%-ным раствором хлорамина.

4.7.3. В виварии осуществляется учет движения животных в специальном журнале с указанием даты заражения, наименование штамма, заражающей дозы, способа аппликации, номера животного.

4.7.4. Клетки с зараженными животными маркируются специальными карточками на которых указывают дату заражения, наименование штамма, заражающую дозу, способ аппликации, номер животного.

5. Мероприятия при локализации и ликвидации последствий аварий

           

5.1. При авариях с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства работу немедленно прекращают, ставят в известность руководителя лаборатории или лицо, его заменяющее, и принимают следующие меры:

- все открытые части тела моют мылом или обрабатывают 70%-ным спиртом;

- при попадании инфекционного материала на слизистые оболочки их немедленно обрабатывают: глаза - 1%-ным раствором борной кислоты, несколькими каплями 1%-ного раствора азотнокислого серебра или струей воды; в нос закапывают, а рот и горло прополаскивают 0,05%-ным раствором марганцовокислого калия или 1%-ным раствором борной кислоты.

5.2. При аварии, связанной с ранением или другим повреждением кожных покровов, перчатки обрабатываются дезраствором, снимаются, из ранки выдавливается кровь, руки обрабатываются 70%-ным спиртом, затем моются водой с мылом, ранка смазывается раствором йода.

5.3. При авариях с ранением или попаданием вирусосодержащей жидкости на слизистые оболочки необходимо проведение профилактической вакцинации (3-кратная вакцинация КОКАВ на 0, 7, 21 день).

5.4. Проводится обеззараживание места аварии. По окончании работ защитная одежда замачивается в дезинфицирующем растворе. Все сотрудники, находившиеся в зоне аварии, должны принять душ.

5.5. О происшедшей аварии и проведенных мероприятиях руководитель лаборатории направляет докладную записку на имя руководителя организации и председателя комиссии по контролю за соблюдением требований биологической безопасности, в которой указывает час и дату происшедшей аварии, ее характер, перечисляет сотрудников, находившихся на месте аварии, в т.ч. лиц, проводивших дезинфекционные мероприятия, а также принятые меры.

5.6. В лабораториях для ликвидации последствий аварии, а также профилактики возможного поражения персонала, необходимо иметь: аптечку для оказания экстренной медицинской помощи, запас дезинфицирующих средств, СИЗ, емкости для замачивания СИЗ. В аптечке экстренной помощи должны находиться: 70%-ный этиловый спирт, раствор йода, сухие навески марганцово-кислого калия, азотно-кислого серебра и борной кислоты, которые в случае аварии можно растворить в мерном объеме дистиллированной воды, стерильная дистиллированная вода, глазные пипетки, ножницы, перевязочные средства, бактерицидный пластырь. Ответственным за комплектование аптечки экстренной медицинской помощи является руководитель подразделения.

5.7. В лаборатории должен быть журнал регистрации аварий, где отмечается: дата, время, место, характер аварии, фамилия, имя и отчество лиц, находившихся непосредственно в зоне ее воздействия, а также проведенные мероприятия.

6. Организация контроля за выполнением требований биологической безопасности

           

6.1. Санитарно-эпидемиологический надзор за выполнением требований настоящих методических указаний в подразделениях, работающих с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства, осуществляют территориальные центры госсанэпиднадзора.

6.2. В организации, работающей с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства, создается комиссия по контролю за соблюдением требований биологической безопасности. Деятельность комиссии определяется положением (прилож.7.8 СП 1.2.731-99).

6.3. Текущий контроль за выполнением требований настоящих методических указаний осуществляется руководителем лаборатории или лицом, назначенным приказом по учреждению.