Государственное санитарно-эпидемиологическое
нормирование 4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Определение остаточных
количеств Методические указания Москва 2015 1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (В.А. Калинин, Т.С. Калинина). 2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 26 июня 2014 г. № 1). 3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 30 июля 2014 г. 4. Введены впервые. СОДЕРЖАНИЕ
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Определение остаточных количеств глюфосината Методические указания Свидетельство о метрологической аттестации № 01.00282-2008/0167.27.05.13 от 27.05.2013. Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств глюфосината аммония и его метаболита, 3-метилфосфино-пропионовой кислоты, в клубнях картофеля в диапазоне 0,25 - 2,5 мг/кг. Методические указания носят рекомендательный характер. Название действующего вещества по ИСО: глюфосинат аммония (I). Название действующего вещества по ИЮПАК: Аммония DL-гомоаланин-4-ил(метил)фосфинат (I). Структурная формула: Эмпирическая формула: C5H15N2O4P. Молекулярная масса: 198,2. Агрегатное состояние: бесцветный кристаллический порошок со слабым специфическим запахом. Температура плавления: 215 °С. Давление паров (при 20 °С): более 0,1 мПа. Коэффициент распределения октанол/вода: Kow logР < 0,1. Растворимость в воде (г/дм3, при 22 °С): 1370. Растворимость (г/дм3, при 20 °С): ацетон - 0,16, этанол - 0,65, этилацетат, толуол - 0,14, н-гексан - 0,2. Вещество стабильно при нормальных условиях хранения, не гидролизуется в умеренно кислых и щелочных средах. Достаточно быстро разрушается в воде и почве: DT50 в воде и почве - 3 - 20 дней. Краткая токсикологическая характеристика. Глюфосинат аммония относится к мало опасным веществам по острой пероральной (ЛД50 для крыс - от 1620 до 2000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД50 для крыс более 4000 мг/кг), но к опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 ч) от 1260 до 2600 мг/м3). Глюфосинат аммония не обладает тератогенным, канцерогенным и мутагенным действием. Малотоксичен для рыб, водорослей, дафний, дождевых червей, пчел, птиц и диких животных. Область применения. Глюфосинат аммония (I) - десикант и неселективный контактный гербицид с ограниченной системностью, передвигающийся только внутри обработанных листьев. В процессе поступления в растение вещество диссоциирует и в клетках присутствует только глюфосинат свободная кислота (II). Гербицид используется для уничтожения однолетних и многолетних широколистных и злаковых сорняков в парах, посадках плодовых и цитрусовых культур, ягодных кустарниках и виноградниках путем направленного опрыскивания в период активного роста сорных растений, а также на овощных культурах при довсходовом применении препарата. Глюфосинат аммония применяется для десикации ботвы картофеля, подсолнечника, клещевины, люцерны и сеникации яровой пшеницы. Используется в России в качестве десиканта на посевах подсолнечника, рапса, клещевины, льна-долгунца, люцерны и клевера лугового (семенные посевы) при норме расхода от 0,225 до 0,45 кг/га (по д.в). Глюфосинат аммония в воде и растениях превращается в глюфосинат свободную кислоту (II), которая подвергается разрушению, результатом чего является образование токсикологически значимого метаболита - 3-метилфосфино-пропионовой кислоты (III). Глюфосинат свободная кислота (II) DL-гомоаланин-4-ил-(метил)-фосфиновая кислота. Структурная формула: Эмпирическая формула: C5H12NO4P. Молекулярная масса: 181,1. Метаболит глюфосината аммония (III) 3-метилфосфино-пропионовая кислота. Структурная формула: Эмпирическая формула: С4Н9О4Р. Молекулярная масса: 152,1. В России установлены следующие гигиенические нормативы для глюфосината аммония: ДСД - 0,02 мг/кг массы человека; МДУ в продукции (мг/кг): плодовые семечковые и косточковые, ягоды и другие мелкие фрукты (кроме смородины), цитрусовые, виноград, морковь - 0,2; картофель - 0,5; подсолнечник (семена), рапс (зерно) - 5,0; гречиха, просо, зерно хлебных злаков - 0,4; растительные масла (кроме нерафинированных рапсового и подсолнечного масла) - 0,4; горох - 3,0; соя (бобы), фасоль - 2,0. 1. Метрологические характеристикиПри соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций. Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2. Метрологические параметры для глюфосината аммония и его метаболита
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение,
доверительный
2. Метод измеренияМетод основан на определении глюфосината аммония и его метаболита 3-метилфосфино-пропионовой кислоты по их дериватам (IV и V соответственно) методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после экстракции веществ из образцов водой, очистки экстрактов на концентрирующих патронах № 2, дериватизации веществ с помощью триметилортоацетата в кислой среде и последующей очистки полученных дериватов на концентрирующих патронах № 1. Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки. В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность метода достигается за счет подбора условий дериватизации анализируемых веществ, подбора капиллярной колонки и условий программирования ее температуры. 3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные
|
Глюфосинат аммония (I), аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,2 % |
CAS 77182-82-2 |
Глюфосинат свободная кислота (II), аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 98,5 % |
CAS 51276-47-2 |
3-метилфосфино-пропионовая кислота (III), аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 97,9 % |
CAS 15090-23-0 |
Метил-4-(метоксиметил)-фосфино-2-ацетамидобутират (IV), аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 97,0 % |
CAS 134932-24-4 |
Метил-3-(метоксиметил)фосфино-пропионат (V), аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 98,8 % |
CAS 134932-24-4 |
Азот, осч |
|
Аммиак водный (28 - 30 % NH3), чда |
|
Ацетон, осч |
ТУ 6-09-3513-86 |
Вода дистиллированная и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости) |
|
Гелий, очищенный |
ТУ-51-940-80 |
Калий марганцово-кислый, чда |
|
Кальций хлористый, ч |
ТУ 6-09-4711-81 |
Кислота муравьиная, чда |
|
Кислота уксусная, ледяная |
|
Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции с гидрофильным слабокислым сорбентом с постоянной активностью с размером частиц 63 - 200 мкм (С) (объем - 1 см3, масса сорбента - 0,6 г) (патрон № 1) |
ТУ 4215-002-05451931-94 |
Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции с сильноосновным сорбентом с размером частиц 63 - 200 мкм с привитыми четвертичными аммониевыми группами (объем - 1 см3, масса сорбента - 0,6 г) (патрон № 2) |
ТУ 4215-002-05451931-94 |
Метилацетат, ч |
ТУ 6-09-300-87 |
Метилен хлористый, хч |
ТУ 6-09-2662-77 |
Натрия гидроокись, хч |
|
Натрий серно-кислый, безводный, хч |
|
Спирт метиловый (метанол), хч |
|
Толуол, химически чистый |
|
Триметилортоацетат |
CAS 1445-45-0 |
Этилацетат, чда |
Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Алонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами |
|
Аппарат для встряхивания проб с возвратно-поступательным направлением колебаний, с максимальной загрузкой 10 кг, с амплитудой колебаний 30 мм и скоростью от 10 до 300 колебаний в минуту |
|
Банки полипропиленовые с крышками для экстракции вместимостью 250 см3 |
|
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная |
|
Виалы (пузырьки) с тефлоновыми прокладками емкостью 40 см3 |
|
Воронки делительные на 250 и 500 см3 |
|
Воронки лабораторные, стеклянные |
|
Испаритель ротационный вакуумный с ручным подъемником, с диагональным конденсором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об./мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом 5 дм3 и с диапазоном температур от 20 до 100 °С |
|
Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 см3 |
|
Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250 и 4000 см3 ТС |
ТУ 92-891.029-91 |
Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла, с внутренним диаметром 0,32 мм, длиной 15 м, с неподвижной фазой, содержащей 50 % фенила и 50 % метилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм |
|
Насос диафрагменный, химически стойкий на 100 %, с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс, с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 дм3/мин |
|
Сито лабораторное с полотном из латуни или нержавеющей стали с размером ячеек 1 мм |
|
Стаканы стеклянные, термостойкие объемом 100 - 2000 см3 |
|
Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3 |
|
Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие, диаметром 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г |
|
Центрифуга лабораторная, настольная с максимальным рабочим числом оборотов 4000 об./мин, с рабочим объемом ротора 200 см3×4 ячейки, выбираемый временной диапазон работы от 0 до 100 мин и с набором полипропиленовых банок емкостью 200 см3 |
ТУ-6-09-1678-86 |
Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4.1 При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-91.
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С, относительной влажности не более 80 % и нормальном атмосферном давлении;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов № 1 и 2 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения веществ на концентрирующих патронах № 1 и 2, установление градуировочной характеристики.
7.1. Подготовка органических растворителей
7.1.1. Очистка ацетона
Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцово-кислый калий из расчета 100 мг/дм3. Ацетон перегоняют при температуре 56,2° С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °С, отбрасывают.
7.1.2. Очистка метанола
Метанол, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный углекислый калий из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем метанол фильтруют через фильтр «красная лента» в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Метанол перегоняют при температуре 64,7 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 64,7 °С, отбрасывают.
7.1.3. Приготовление бидистиллированной воды
Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцово-кислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 ч.
Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.
7.2. Приготовление растворов для проведения анализа
7.2.1. Приготовление рабочих растворов
7.2.1.1. Приготовление 0,015 М раствора водного аммиака.
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 добавляют 500 см3 деионизированной воды и 10 см3 водного аммиака (содержит 28 - 30 % NH3), перемешивают и доводят водой объем в колбе до метки.
7.2.1.2. Приготовление 0,01 М раствора гидроокиси натрия.
В мерную колбу на 500 см3 переносят 0,2 г гидроксида натрия, добавляют 200 - 300 см3 дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
7.2.1.3. Приготовление 40 %-го водного раствора муравьиной кислоты
В мерную колбу объемом 1000 см3 помещают 500 см3 очищенной воды, прибавляют 400 см3 муравьиной кислоты, перемешивают и доводят водой объем в колбе до метки.
7.2.2. Приготовление градуировочных растворов
7.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией деривата глюфосината аммония (IV) 100 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 13,9 мг метил-4-(метоксиметил)-фосфинил-2-ацетамидобутирата (IV, дериват глюфосината аммония), растворяют в 40 - 50 см3 метанола, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Стандартный раствор № 1 хранят в холодильнике в течение 6 месяцев.
7.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией деривата метаболита глюфосината аммония (V) 100 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10 мг метил-3-(метоксиметил)-фосфинил-пропионата (V, дериват метаболита), растворяют в 40 - 0 см3 метанола, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Стандартный раствор № 2 хранят в холодильнике в течение 6 месяцев.
7.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 10,0 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 10 см3, помещают в мерную колбу объемом 100 см3. Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 10 см3 и помещают в ту же колбу объемом 100 см3, доводят объем до метки метилацетатом. Стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 3 хранят в холодильнике в течение 3 месяцев.
7.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 2,0 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки метилацетатом при перемешивании. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.
7.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 1,0 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки метилацетатом при перемешивании. Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.
7.2.2.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 0,4 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).
Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки метилацетатом при перемешивании. Стандартный раствор № 6 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.
7.2.2.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 0,2 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).
Из стандартного раствора № 5 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки метилацетатом при перемешивании. Стандартный раствор № 7 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.
7.2.3.
Приготовление растворов для хроматографического
исследования и внесения в контрольные образцы
7.2.3.1. Стандартный раствор А с концентрацией глюфосината аммония 1 мг/см3.
В мерную колбу вместимостью 50 см3 помещают 50,45 мг глюфосината аммония, добавляют 30 - 35 см3 0,015 М раствора водного аммиака, перемешивают до полного растворения вещества и доводят объем до метки этим же растворителем. Раствор А хранится в холодильнике не более одного месяца.
7.2.3.2 Стандартный раствор В с концентрацией 3-метилфосфино-пропионовой кислоты 1 мг/см3.
В мерную колбу вместимостью 50 см3 помещают 42 мг 3-метил-фосфино-пропионовой кислоты, добавляют 30 - 35 см3 0,015 М раствора водного аммиака, перемешивают до полного растворения вещества и доводят объем до метки этим же растворителем. Раствор В хранится в холодильнике не более одного месяца.
7.2.3.3. Стандартный раствор С с концентрацией глюфосината аммония и его метаболита по 10,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора А отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 100 см3. Из стандартного раствора В отбирают пипеткой 1 см3 и помещают в ту же колбу объемом 100 см3, доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор С используется для хроматографического исследования и внесения в контрольные образцы и хранится в холодильнике не более одного месяца.
7.3. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации дериватов глюфосината аммония и его метаболита в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,2; 0,4; 1,0; 2,0 мкг/см3.
В испаритель хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.2. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
Из стандартного раствора С (п. 7.2.3.3), содержащего по 10 мкг/см3 глюфосината аммония и его метаболита, отбирают 0,5 см3, помещают в концентратор объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
К сухому остатку в концентраторе приливают 3 см3 ледяной уксусной кислоты, перемешивают содержимое и помещают концентратор на 1 мин в ультразвуковую ванну. Затем в колбу добавляют 12 см3 триметилортоацетата и снова помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 4,5 ч.
К охлажденной реакционной смеси добавляют три порции по 15 см3 каждая толуола и каждый раз выпаривают содержимое на ротационном вакуумном испарителе (для полного удаления реакционной смеси) при температуре не выше 40 °С до объема 1 - 2 см3. Содержимое концентратора переносят в мерную пробирку и доводят объем до 4 см3 толуолом. Пробу возвращают в концентратор объемом 100 см3, добавляют 4 см3 метилацетата, перемешивают содержимое и помещают концентратор в ультразвуковую ванну на 1 мин. Затем 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.
Примечание: При проведении дериватизации посуда и реактивы должны быть сухими.
7.5. Подготовка концентрирующих патронов № 2 для очистки
экстрактов и проверка хроматографического поведения
глюфосината аммония и его метаболита на них
7.5.1.
Подготовка концентрирующих патронов № 2
для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин (1 - 2 кап./с).
Патрон № 2 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см3 0,01 М раствора гидроокиси натрия, 10 см3 воды. Элюаты отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
7.5.2.
Проверка хроматографического поведения глюфосината аммония
и его метаболита на концентрирующих патронах № 2
Из стандартного раствора С (п. 7.2.3.3), содержащего 10 мкг/см3, отбирают 0,5 см3, помещают в концентратор объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 20 см3 воды, тщательно обмывая стенки концентратора, выдерживают 1 - 2 мин в ультразвуковой ванне и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 50 °С. Патрон промывают четырьмя - пятью порциями по 10 см3 каждая 40 %-го водного раствора муравьиной кислоты. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 50 °С.
Патрон промывают 20 см3 воды, элюат отбрасывают. Затем патрон промывают четырьмя-пятью порциями по 10 см3 каждая 0,015 М раствора водного аммиака. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 50 °С.
Пробы подвергают дериватизации (п. 7.4) и анализируют на содержание дериватов глюфосината аммония и метаболита по п. 9.2.
Определяют фракции, содержащие дериваты глюфосината аммония и его метаболита, полноту смывания с патрона и необходимый объём элюента.
Изучение поведения дериватов глюфосината аммония и его метаболита на концентрирующих патронах № 2 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.
7.6.
Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки
экстрактов и проверка хроматографического поведения дериватов
глюфосината аммония и его метаболита на них
7.6.1. Подготовка концентрирующих патронов № 1
для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин (1 - 2 кап./с).
Патрон № 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см3 смеси метилацетата с толуолом в соотношении 1:1, элюат отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
7.6.2.
Проверка хроматографического поведения дериватов глюфосината
аммония и его метаболита на концентрирующих патронах № 1
Из стандартного раствора № 3 (п. 7.2.2.3), содержащего 10 мкг/см3, отбирают 0,5 см3, помещают в концентратор объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре, не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 4 см3 толуола, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 4 см3 метилацетата, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3. Промывают патрон последовательно 5 см3 метилацетата, затем четырьмя-пятью порциями по 5 см3 каждая смеси метилацетата с метанолом в соотношении 1:1. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см3, упаривают до объема 0,5 - 1 см3 на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С.
Содержимое концентраторов переносят в мерную пробирку. Концентратор обмывают двумя порциями по 1,5 см3 метилацетата, смывы объединяют в пробирке. Доводят объем в пробирке до 5 см3 и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.
Определяют фракции, содержащие дериваты глюфосината аммония и его метаболита, полноту смывания с патрона и необходимый объём элюента.
Изучение поведения дериватов глюфосината аммония и его метаболита на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», № 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 27853-88 «Овощи соленые и квашеные, плоды и ягоды моченые. Приемка, отбор проб», ГОСТ 13341-77 «Свежие и свежемороженые овощи, картофель, бахчевые, фрукты, ягоды, грибы. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ 7176-85 «Картофель свежий продовольственный, заготовляемый и поставляемый. Технические условия».
Пробы клубней картофеля хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °С.
9.1. Клубни картофеля
Образец измельченных клубней картофеля массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см3, приливают 50 см3 дистиллированной воды и помещают на 15 мин на аппарат для встряхивания проб. По окончании экстракции пробу центрифугируют в течение 10 мин на скорости 3000 оборотов в минуту. Экстракт фильтруют через фильтр низкой плотности в коническую колбу объемом 250 см3. Экстракцию повторяют еще один раз, используя 50 см3 дистиллированной воды и помещая на 15 мин на аппарат для встряхивания проб, центрифугируют и фильтруют в ту же коническую колбу.
9.1.2. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 2
Из экстракта, полученного по п. 9.1.1, отбирают аликвоту объемом 20 см3, наносят на подготовленный концентрирующий патрон № 2.
Метаболит глюфосината аммония элюируют с патрона 40 см3 40 %-го водного раствора муравьиной кислоты. Элюат собирают в концентратор объемом 250 см3.
Патрон промывают 20 см3 воды, элюат отбрасывают. Элюируют глюфосинат аммония 40 см3 0,015 М раствора водного аммиака, элюат объединяют с предыдущим в тот же концентратор объемом 100 см3. Объединенные элюаты выпаривают досуха при температуре 55 - 60 °С. Для удаления остатков воды в концентратор добавляют 5 - 10 мл этил-ацетата.
К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.2, приливают 3 см3 ледяной уксусной кислоты, перемешивают содержимое и проводят дериватизацию как указано в п. 7.4.
9.1.4. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1
Раствор, полученный в п. 9.1.3, наносят на заранее подготовленный концентрирующий патрон № 1, элюат отбрасывают. Патрон промывают 5 см3 метилацетата, элюат отбрасывают.
Дериваты глюфосината аммония и его метаболита элюируют с патрона 15 см3 смеси метилацетата с метанолом в соотношении 1:1. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3 и упаривают до объема 0,5 - 1,0 см3 на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С.
Содержимое концентратора переносят в мерную пробирку. Концентратор обмывают двумя порциями по 1,5 см3 метилацетата, смывы объединяют в пробирке. Доводят объем в пробирке до 5 см3 и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.
9.2. Условия хроматографирования
Хроматографическая система, включающая:
- хроматограф газовый с термоионным детектором (ТИД) с пределом детектирования по фосфору в Паратион-метиле 3×10-14 г/см3 и снабженный приспособлениями для капиллярной колонки;
- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.
Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла, с внутренний диаметром 0,32 мм, длиной 15 м, с неподвижной фазой, содержащей 50 % фенила и 50 % метилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм.
Температура термостата колонки программированная: начальная температура - 130 °С, выдержка 2 мин, нагрев колонки по 25 °С в минуту до 270 °С, выдержка 5 мин. Температура испарителя - 230 °С, детектора - 300 °С.
Газ 1 - гелий (газ-носитель), регулятор расхода гелия - РРГ-10; давление на входе - 80 кПа, линейная скорость - 34,352 см/с, давление на выходе - 101,3 кПа; поток через колонку - 1,756 см3/мин; мертвое время - 1,46 мин.
Газ 2 - гелий (сброс пробы), регулятор расхода гелия - РРГ-11, режим - сплитлесс, расход во время анализа - 10 см3/мин, деление потока - 1:30, начало сброса 1 мин, длительность сброса - 2 мин.
Газ 4 - азот (поддув в детектор), расход во время анализа - 25 см3/мин.
Газ 5 - водород, расход во время анализа - 11,5 см3/мин.
Газ 6 - воздух, расход - 200 см3/мин.
Продувка детектора и испарителя азотом после анализа - по 35 см3/мин в течение 3 мин при температуре колонки 270 °С.
Время удерживания: первым с колонки выходит дериват метаболита (V), а затем дериват глюфосината аммония (IV).
Объем вводимой пробы: 1 мм3.
Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,2 - 2,0 нг.
Содержание глюфосината аммония или его метаболита в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота в пробах клубней картофеля по пикам дериватов рассчитывают отдельно по формуле:
|
X - содержание глюфосината аммония или его метаболита в пробе, мг/кг;
Scm - высота (площадь) пика стандартов дериватов глюфосината аммония или его метаболита, мВ;
Snp - высота (площадь) пика образца, мВ;
А - концентрация стандартных растворов дериватов глюфосината аммония или его метаболита, мкг/см3;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
m - масса анализируемого образца, г (см3);
Р - содержание дериватов глюфосината аммония или его метаболита в аналитическом стандарте, %.
Общее содержание глюфосината аммония определяют путем простого суммирования полученных результатов.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:
X1, Х2 - результаты параллельных определений, мг/кг или мг/дм3;
r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8×σr. При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
Результат анализа представляют в виде:
( ± Δ) мг/кг при вероятности P = 0,95, где |
- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
|
δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,25 мг/кг».*
* - 0,25 мг/кг - предел обнаружения.
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
Контроль стабильности градуировочной характеристики для дериватов глюфосината аммония и его метаболита проводят при смене основных градуировочных растворов № 1 и 2 каждые 6 месяцев, при смене основных градуировочных растворов № 3 - каждые 3 месяца, при смене основных градуировочных растворов № 4, 5, 6 и 7 - каждый месяц, а также в начале и окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание дериватов глюфосината аммония и его метаболита в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,2 до 2,0 мкг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:
|
для глюфосината аммония и 2,90 - для его метаболита;
X - концентрация глюфосината аммония и его метаболита (по дериватам) контрольного измерения, мкг/см3;
С - известная концентрация градуировочных растворов дериватов глюфосината аммония и его метаболита в метилацетате, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
10,38 или 2,90 - погрешность градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения (А) превышает 10,38 % (или 2,90 %), делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов дериватов глюфосината аммония и его метаболита, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки С𝜕 должна удовлетворять условию:
|
- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
Δл = ±0,84Δ, где |
Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
|
δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры Kk рассчитывают по формуле:
|
, С𝜕 - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
|
Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Kk) с нормативом контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
(2) |
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):
|
(3) |
X1, Х2 - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Среда |
Внесено, мг/кг |
Обнаружено, мг/кг |
Полнота определения, % |
Клубни картофеля |
0,25 |
0,219 ± 0,009 |
87,4 |
0,50 |
0,422 ± 0,020 |
84,5 |
|
1,25 |
1,029 ± 0,026 |
82,3 |
|
2,50 |
1,987 ± 0,070 |
79,3 |
Среда |
Внесено, мг/кг |
Обнаружено, мг/кг |
Полнота определения, % |
Клубни картофеля |
0,25 |
0,219 ± 0,004 |
87,5 |
0,50 |
0,425 ± 0,010 |
85,0 |
|
1,25 |
1,007 ± 0,024 |
80,6 |
|
2,50 |
1,920 ± 0,074 |
76,8 |