4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств
тау-флувалината в луке-перо, луке-репке,
ботве и клубнях картофеля методом
газожидкостной хроматографии

Методические указания

МУК 4.1.3131-13

Москва 2014

1. Разработаны ГНУ «Всероссийский НИИ защиты растений Россельхозакадемии» (И.А. Цибульская, Л.М. Карпова, О.В. Долженко); ГБОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Минздрава России (М.С. Орлов).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 29 октября 2013 г. № 3).

3 Утверждены врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главного государственного санитарного врача Российской Федерации А.Ю. Поповой 12 ноября 2013 г.

4. Введены впервые

СОДЕРЖАНИЕ

 

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств
тау-флувалината в луке-перо, луке-репке,
ботве и клубнях картофеля методом
газожидкостной хроматографии

Свидетельство о метрологической аттестации № 01.5.04.131/01.00043/2013.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации тау-флувалината в луке-перо, луке-репке, ботве и клубнях картофеля в диапазоне концентраций 0,05 - 0,5 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: тау-флувалинат.

Название действующего вещества по ИЮПАК: (118)-(3-феноксифенил)цианометиловый эфир (2R-3-метил-2-{[4-(трифторметил)-2-хлорфенил]амино}бутановой кислоты.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₂₆H₂₂ClF₃N₂O₃.

Молекулярная масса: 502,9.

Химически чистый препарат - вязкая жидкость с температурой кипения выше 450 °С.

Давление паров при 20 °С - 9×10^-8 mРа.

Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_ow logР = 4,26 (25 °С).

Растворимость: в воде практически не растворим (1,03ppb), хорошо растворим в органических растворителях.

Вещество стабильно на свету, стабильно при хранении в течение 2 лет при температуре 20 - 28 °С.

Препарат малотоксичен для пчел и птиц, высокотоксичен для рыб. Слабо раздражает глаза и кожу. ЛД₅₀ (крысы) - 261 мг/кг.

Гигиенические нормативы: МДУ тау-флувалината в картофеле 0,1 мг/кг, в луке не установлен.

Область применения: инсектоакарицид широкого спектра действия из группы пиретроидов, эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов жесткокрылых, чешуекрылых, двукрылых и плодовых клещей; применяется на хлопчатнике, картофеле, сое, томатах и других культурах.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный
интервал среднего результата для полного диапазона концентраций
(n = 20, Р = 0,95)

2. Метод измерений

Методика основана на извлечении тау-флувалината из лука и картофеля водно-ацетоновым раствором с последующей очисткой перераспределением между двумя несмешивающимися жидкостями и на колонке с флорисилом. Количественное определение проводят на газовом хроматографе с электронозахватным детектором методом абсолютной калибровки, идентификация - по времени удерживания.

Избирательность определения достигается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства,
реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.007-76).

При выполнении измерений с использованием газового хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-09 и инструкциями по эксплуатации приборов.

4.2. Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 мПа (150 кгс/см²), необходимо соблюдать «Правила устройства и безопасной эксплуатации стационарных компрессорных установок, воздуховодов и газопроводов под давлением» ПБ-03-576-03. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

5. Требования к квалификации оператора

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 11.

6. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051-79 от 21.08.79), а также отбор проб картофеля производится в соответствии с ГОСТ 26832-86 «Картофель свежий для переработки на продукты питания»; отбор проб лука - по ГОСТ 1723-86 «Лук репчатый свежий, заготовляемый и поставляемый». Пробы картофеля и лука для определения остатков в урожае хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при -18 °С.

7. Подготовка к определению

7.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 ° С до объема 1,0 см³ и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

7.2. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа аналитическую колонку, не присоединяя к детектору, кондиционируют в токе инертного газа (азот) при температуре 250 °С до стабилизации нулевой линии.

7.3. Приготовление стандартного и градуировочных растворов

7.3.1. Основной раствор с концентрацией 1,0 мг/см³: точную навеску тау-флувалината (50 ± 0,5) мг помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³, растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном.

Градуировочные растворы с концентрациями тау-флувалината 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 мкг/см³ готовят методом последовательного разбавления по объему.

7.3.2. Раствор № 1 с концентрацией 10,0 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 1 см³ основного раствора и доводят до метки ацетоном.

7.3.3. Раствор № 2 с концентрацией 5 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 5,0 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки ацетоном.

7.3.4. Раствор № 3 с концентрацией 2 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 2 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки ацетоном.

7.3.5. Раствор № 4 с концентрацией 1 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1,0 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки ацетоном.

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 4 месяцев, градуировочные растворы - в течение 12 дней.

Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют градуировочные растворы соответствующей концентрации.

7.4. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация тау-флувалината в растворе) в хроматограф вводят по 2 мм³ градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты (площади) пика от концентрации тау-флувалината в градуировочном растворе (мкг/см³).

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (K) в уравнении линейной регрессии:

S - площадь пика градуировочного раствора.

Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

С - аттестованное значение массовой концентрации тау-флувалината в градуировочном растворе;

С_k - результат контрольного измерения массовой концентрации тау-флувалината в градуировочном растворе;

λ_контр., - норматив контроля градуировочного коэффициента, % (λ_контр. = 10 % при Р = 0,95).

7.5. Подготовка колонки с флорисилом для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты и вносят суспензию 4,5 г флорисила в 20 см³ гексана, дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку промывают 10 см³ гексана со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

7.6. Проверка хроматографического поведения тау-флувалината
на колонке с флорисилом

В круглодонную колбу емкостью 10 см³ отбирают 0,5 см³ стандартного раствора тау-флувалината с концентрацией 1 мкг/см³. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 2 см³ гексана и вносят в колонку. Колбу обмывают еще 2 см³ гексана и также вносят в колонку. Затем промывают колонку 20 см³ гексана и 10 см³ смеси гексан-этилацетат (10:1 по объему), элюаты отбрасывают. Тау-флувалинат элюируют последовательно 3 порциями по 5 см³ той же смеси гексан-этилацетат (10:1). Отбирают каждую фракцию отдельно, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 см³ ацетона и анализируют на содержание тау-флувалинат по п. 8.3. Фракции, содержащие тау-флувалинат, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 см³ ацетона и анализируют по п. 8.3. Рассчитывают содержание тау-флувалината в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.

Примечание. Профиль вымывания тау-флувалината может меняться при использовании новой партии сорбента.

7.7. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.

8. Проведение определения

8.1. Экстракция тау-флувалината из лука и картофеля

Навеску измельченных проб лука-перо, лука-репки, ботвы или клубней картофеля массой 20 г помещают в коническую колбу на 250 см³, заливают 50 см³ смеси ацетон-вода (в соотношении 70:30) и экстрагируют тау-флувалинат на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр быстрой фильтрации. Экстракцию повторяют дважды 30 см³ той же смеси. Объединенный фильтрат упаривают до водного остатка на роторном испарителе при температуре не выше 35 °С. Водный остаток помещают в делительную воронку, добавляют 200 см³ дистиллированной воды, 15 - 20 см³ насыщенного раствора хлорида натрия и переэкстрагируют тау-флувалинат гексаном трижды порциями по 30 см³. Водный слой возвращают в воронку, а гексановые экстракты фильтруют в колбу-концентратор через слой безводного серно-кислого натрия. Полученный раствор выпаривают на ротационном испарителе при температуре бани не выше 35 °С до полного удаления гексана. Далее проводят очистку экстрактов по п. 8.2.

8.2. Очистка экстрактов на колонке с флорисилом

Сухой остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п. 8.1 экстрактов лука или картофеля, растворяют в 4 см³ гексана и вносят двумя порциями по 2 см³ гексана в кондиционированную хроматографическую колонку (п. 7.5). Промывают колонку последовательно 20 см³ гексана и 10 см³ смеси гексан-этилацетат (10:1 по объему), элюат отбрасывают. Тау-флувалинат элюируют 15 см³ смеси гексан-этилацетат (10:1 по объему) в колбу-концентратор емкостью 100 см³. Раствор выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 35 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см³ ацетона и 1 мм³ раствора вводят в хроматограф.

8.3. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф с электронозахватным детектором.

Колонка стеклянная 2 м×3 мм, заполненная насадкой с зернением 0,16 - 0,20 мм с 5 % неподвижной фазы средней полярности. Температура колонки 270 °С, испарителя 300 °С, детектора 320 °С. Скорость газа-носителя (азот) через колонку 51 см³/мин. Объем экстракта, подготовленного для хроматографирования - 1 см³, дозируемый объем - 2 мм³. Линейный диапазон детектирования 1 - 10 нг.

8.4. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание тау-флувалината в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

S_x - площадь пика тау-флувалината на хроматограмме испытуемого образца, мм² (AU);

K - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;

V - объём пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см³;

Р - навеска анализируемого образца, г;

f - полнота извлечения тау-флувалината, приведенная в табл. 2, %.

Содержание остаточных количеств тау-флувалината в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор тау-флувалината с концентрацией 1 мкг/см³, разбавляют ацетоном.

9. Проверка приемлемости результатов
параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предел повторяемости:

X₁ и Х₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (r = 2,8σ_r).

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

10. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

() мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

 - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее нижней границы определения» (например: менее 0,05 мг/кг*, где * - 0,05 мг/кг - предел обнаружения тау-флувалината в клубнях картофеля).

11. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

11.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

11.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки С_∂ должна удовлетворять условию:

±Δ_{л, Х}, (Δ_{л, Хʹ}) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг;

при этом:

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Результат контроля процедуры K_k рассчитывают по формуле:

Хʹ X, С_∂ - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 4) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K_k) с нормативом контроля (K).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

11.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предел воспроизводимости (R)

X₁, Х₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.