Государственное санитарно-эпидемиологическое
нормирование 4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Определение остаточных количеств Сборник МУК 4.1.2859 - 4.1.2866-11 Москва 2011 1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (В.А. Калинин, профессор, канд. с-х. наук., Е.В. Довгилевич, ст.н.сотр., канд. биол. наук, А. В. Довгилевич, ст.н.сотр., канд. хим. наук, Н.В. Устименко, ст.н.сотр., канд. биол. наук, Е.Н. Щербинкина, инженер). 2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 28 12.2010 № 3). 3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31 марта 2011 г. 4. Введены в действие с момента утверждения. 5. Введены впервые. СОДЕРЖАНИЕ
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Определение остаточных количеств Пропизахлора Методические указания МУК 4.1.2863-11 Общие положения и область примененияСвидетельство об аттестации методики от 25.06.2010 № 01 5.04.685. Настоящий документ устанавливает методику определения остаточных количеств Пропизахлора в воде в диапазоне концентраций 0,002 - 0,02 мг/кг, в почве, зеленой массе и зерне кукурузы, семенах подсолнечника и рапса в диапазоне концентраций 0,025 - 0,25 мг/кг, в растительном масле 0,05 - 0,5 мг/кг. 1. Краткая характеристика препаратаДействующее вещество: Пропизахлор. Структурная формула: Название действующего вещества по ИЮПАК: 2-хлор-6'-этил-N-изопропоксиметилацето-о-толуидин. Эмпирическая формула: С15Н22СlNО2. Молекулярная масса: 283,8. Химически чистое вещество: маслянистая жидкость от светло-коричневого до пурпурного цвета с характерным запахом. Температура плавления: 21,6 °С. Давление пара при 20 °С: 4 мПа. KowlogP = 3,50 (20 °С). Растворимость в воде 184 мг/дм3. Растворим в большинстве органических растворителей. Гидролитически стабилен. Через 5 дней хранения при 50 °С (рН 4, 7, 9) степень разложения составляет менее 10 %. Краткая токсикологическая характеристика: острая оральная токсичность LD50 для крыс 3433 мг/кг (мужские особи) и 2088 мг/кг (женские особи). Дермальная токсичность LD50 превышает 2000 мг/кг, а ингаляционная LC50 - 5000 мг/м3 для животных обоих полов (крысы). Область применения: Пропизахлор - селективный гербицид для регулирования роста однолетних трав и некоторых широколистных сорняков на почвах кукурузы, подсолнечника, сои, картофеля и гороха. Механизм действия заключается в ингибировании деления клеток посредством блокирования белкового синтеза при адсорбции гербицида на корнях прорастающих растений. Гигиенические нормативы для Пропизахлора в России не установлены. 2. Методика определения Пропизахлора в воде, почве, зеленой массе, зерне кукурузы, семенах подсолнечника, рапса и растительном масле методом ВЭЖХ2.1. Основные положения 2.1.1. Область применения и принцип метода Настоящие методические указания устанавливают метод определения остаточных количеств Пропизахлора в воде водоемов в диапазоне концентраций 0,002 - 0,01 мг/кг, в почве, зеленой массе, зерне кукурузы, семенах подсолнечника и рапса в диапазоне концентраций 0,025 - 0,25 мг/кг и в растительном масле - 0,05 - 0,5 мг/кг. Методика основана на определении Пропизахлора методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его извлечения из образцов водным ацетоном или ацетонитрилом с последующей очисткой на концентрирующих патронах. 2.1.2. Метрологические характеристики При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2. Полнота извлечения Пропизахлора, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для n = 20, Р = 0.95
2.1.3. Избирательность метода Избирательность метода определения Пропизахлора достигается сочетанием условий подготовки проб и хроматографического анализа. 2.2. Реактивы и материалы
Допускается использование реактивов и материалов с характеристиками не хуже указанных. 2.3. Приборы и посуда
Допускается использование средств измерения и вспомогательного оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. 2.4. Отбор и хранение проб Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ 29168-89 «Почвы. Отбор проб», ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб». Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву доводят до стандартной влажности, просеивают через сито с отверстиями 1 мм. Зеленую массу замораживают при температуре - 18 °С и хранят в морозильной камере в полиэтиленовой упаковке в течение года. Отбор проб семян подсолнечника и рапса производится в соответствии с ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб». Семена хранят при комнатной температуре в полотняных мешочках, перед анализом доводят до стандартной влажности и измельчают. Растительное масло хранят в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в герметично закрытой стеклянной таре в течение 6 месяцев. 2.5. Подготовка к определению 2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей Органические растворители при необходимости перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания свежей порции кислоты, затем промывают водой, 2 %-м раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют. Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 дм3 ацетона 10 г КМnО4 и 2 г К2СО3). Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием. Диэтиловый эфир перед употреблением высушивают над едким кали. 2.5.2. Кондиционирование колонки Перед началом анализа аналитические колонки кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 - 0,2 мл/мин) до стабилизации нулевой линии в течение 1 ч. 2.5.3. Приготовление растворов Для приготовления 0,005 М раствора ортофосфорной кислоты 0,5 г 98 % ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм3, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки. 2.5.3.1. Приготовление стандартного и градуировочных растворов. Точную навеску Пропизахлора (50 мг) помещают в мерную колбу объемом 100 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят до метки (стандартный раствор с концентрацией 0,5 мг/см3). Градуировочные растворы с концентрациями 2,5, 5,0, 10,0, 20,0 и 25,0 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя подвижную фазу. Стандартный раствор можно хранить в холодильнике в силанизированном или тефлоновом флаконе при температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы используют в течение рабочего дня. При изучении полноты извлечения Пропизахлора используют ацетонитрильные растворы вещества. 2.5.4. Построение градуировочного графика Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация Пропизахлора в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации Пропизахлора в градуировочном растворе. Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (К) в уравнении линейной регрессии: С = KS, где S - площадь пика градуировочного раствора. Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99. Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента. Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:
С - аттестованное значение массовой концентрации Пропизахлора в градуировочном растворе; Ск - результат контрольного измерения массовой концентрации Пропизахлора в градуировочном раствор; λконтр. - норматив контроля градуировочного коэффициента, % λконтр. = 10 % при Р = 0,95). 2.5.5. Подготовка приборов и средств измерения Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации. 2.5.6. Подготовка концентрирующих патронов для очистки экстракта 2.5.6.1. Кондиционирование патронов, заполненных гексадецилсиликагелем, - Диапак С16 (0,4 г), осуществляют, пропуская через патрон последовательно по 1 см3 ацетонитрила и воды. Элюат отбрасывают. 2.5.6.2. Кондиционирование патронов, заполненных силикагелем 60 (0,5 г), осуществляют пропусканием 2,5 см3 гексана. 2.6. Проведение определения 2.6.1. Определение Пропизахлора в пробах воды Аликвоту предварительно отфильтрованной воды (50 см3) пропускают через откондиционированный патрон Диапак С16 (0,4 г). Фильтрат отбрасывают. Пропизахлор элюируют 5 см3 ацетонитрила. Элюат упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 0,4 см3 подвижной фазы. 10 мм3 вводят в жидкостный хроматограф. 2.6.2. Определение Пропизахлора в пробах почвы Образец просеянной через сито почвы массой 10 г помещают в коническую колбу вместимостью 100 см3 с притертой пробкой, прибавляют 5 см3 воды и 35 см3 ацетона и экстрагируют в УЗ-бане в течение 15 мин. Суспензию фильтруют в вакууме через воронку Бюхнера (фильтр «красная лента»), осадок на фильтре промывают 5 см3 ацетона. Экстракцию повторяют и объединенные фильтраты упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С до полного удаления ацетона. Водный остаток пропускают через два соединенных последовательно и откондиционированных патрона Диапак С16, промывают двумя порциями воды по 2 см3. Фильтрат и промывки отбрасывают. Пропизахлор элюируют 4 см3 ацетонитрила. Элюат упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы и 10 мм3 полученного раствора вводят в жидкостный хроматограф. 2.6.3. Определение Пропизахлора в зерне кукурузы, семенах подсолнечника и рапса, зеленой массе рапса и кукурузы Навеску размолотых на лабораторной мельнице семян или измельченной зеленой массы (20 г) помещают в коническую колбу вместимостью 250 см3, прибавляют 50 см3 80 % водного ацетона* и экстрагируют в УЗ-бане в течение 15 мин при температуре 30 °С. Экстракцию повторяют еще два раза. Экстракт упаривают на ротационном испарителе до полного удаления ацетона при температуре водяной бани 40 °С. Водный остаток фильтруют через бумажный фильтр и пропускают через два соединенных последовательно и откондиционированных патрона Диапак С16. Фильтрат и промывки отбрасывают. Пропизахлор элюируют 4 см3 ацетонитрила. Элюат упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см3 гексана и количественно вносят в откондиционированный патрон с силикагелем 60. Патрон промывают дважды 2,5 см3 гексана. Фильтрат и промывки отбрасывают. Пропизахлор элюируют 3 см3 смеси гексан-эфир в соотношении 7:3. Элюат упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 2 см3 подвижной фазы и 10 мм3 образца вводят в жидкостный хроматограф. _____________ * При определении Пропизахлора в зеленой массе прибавляют 50 см3 ацетона, не содержащего воды. 2.6.4. Определение Пропизахлора в растительном масле К 5 г масла прибавляют 40 см3 ацетонитрила и экстрагируют в УЗ-бане в течение 15 мин при 30 °С. Экстракцию повторяют с двумя свежими порциями ацетонитрила по 40 см3. Объединенный экстракт центрифугируют в течение 10 мин при скорости 8000 об/мин. Супернатант промывают тремя порциями гексана по 20 см3. Гексановые промывки отбрасывают. Ацетонитрильный раствор упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см3 гексана и далее пробу чистят на патроне с силикагелем 60 так, как это описано в п. 2.6.1. После очистки сухой остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы и 10 мм3 образца вводят в жидкостный хроматограф. 2.6.5. Условия хроматографировант Ультраэффективный жидкостной хроматограф «ACQUITY» фирмы «Waters» с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Для анализа проб масла, зеленой массы и семян подсолнечника используют колонку 1. Пробы рапса и зерна кукурузы анализируют на колонке 2. Температура колонки (30 ± 1) °С. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 53:47 (колонка 1) и 60:40 (колонка 2). Скорость потока элюента 0,2 см3/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 220 нм. Объем вводимой пробы 10 мм3. Время удерживания Пропизахлора на колонках 1 и 2 составляет 5,1 ± 0,2 мин. 3. Обработка результатов анализаСодержание Пропизахлора в воде, почве, зерне кукурузы, семенах подсолнечника и рапса, зеленой массе, растительном масле (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
S1 - площадь пика Пропизахлора в стандартном растворе (мВ сек); S2 - площадь пика Пропизахлора в анализируемой пробе (мВ сек); V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3; Р - навеска анализируемого образца, г; С - концентрация стандартного раствора Пропизахлора, мкг/см3. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор Пропизахлора 1 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ. 4. Проверка приемлемости результатов параллельных определенийЗа результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает придела повторяемости (1): X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг; r - значение предела повторяемости (r = 2,8 σr). При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ. 5. Оформление результатовРезультат анализа представляют в виде: ( ± Δ) мг/кг при вероятности Р = 0,95, где - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг; Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг; Δ = δ∙X/100, где δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %. В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание вещества в пробе менее нижней границы определения» (например: менее 0,025 мг/кг*, где * - 0,025 мг/кг - предел обнаружения Пропизахлора в почве). 6. Контроль качества результатов измеренийОперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений». 6.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. 6.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок. Величина добавки Cд должна удовлетворять условию: Cд = Δл,Х + Δл,Х', где ±Δл,Х (±Δл,Х') - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг; при этом: Δл = ± 0,84Δ, где Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг: Δ = δ∙Х/100, где δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %. Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле: Кк = Х' - Х - Cд, где X', X, Cд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 4) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг. Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К). Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной. При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению. 6.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости. Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
X1, X2 - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг; R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %. 7. Требования безопасности7.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов. 7.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». 8. Требования к квалификации операторовИзмерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 6. 9. РазработчикиДолженко В.И., Цибульская И.А., Журкович И.К., Луговкина Н.В., Ковров Н.Г. ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, г. Санкт-Петербург. Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации № 01.5.04.693 от 23.11.2010).
|