Государственное санитарно-эпидемиологическое 4.2.
МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И Метод микробиологического измерения Методические указания Москва • 2011 1. Разработаны ФГУН Научно-исследовательский центр токсикологии и гигиенической регламентации биопрепаратов (д.б.н. Н.И. Шеина); ГОУ ВПО Российский государственный медицинский университет (к.б.н. С.Н. Успенская, к.б.н. В.И. Сигаев, к.б.н. А.В. Воробьев). 2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 № 1). 3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 4 августа 2010 г. 4. Введены в действие с 4 октября 2010 г. 5. Введены впервые. СОДЕРЖАНИЕ
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И Метод микробиологического измерения Методические указания МУК 4.2.2716-10 1. Общие положения и область примененияНастоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации штамма-продуцента бутанола Cl. acetobutylicum 3108 в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 500000 клеток в 1 м3 воздуха. Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования» и ГОСТ Р 8.563-96 «Методики выполнения измерений». Методические указания предназначены для применения в учреждениях Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также в лабораториях других предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований. Методические указания одобрены и рекомендованы секцией «Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязнения окружающей среды» Проблемной комиссии «Научные основы гигиены окружающей среды». 2. Биологическая характеристика штамма Cl. acetobutylicum 3108 и его гигиенический нормативСистематическое положение микроорганизма.
Штамм Clostridium acetobutylicum 3108 выделен из почвы, строгий анаэроб, представлен грамположительными спорообразующими прямыми палочками. Палочки размером 0,6 - 0,9´2,4 - 4,7 мкм подвижны за счет перитрихиальных жгутиков. Образуют центрально расположенные эндоспоры, обычно растягивающие клетку. Обладают сахаролитическими и протеолитическими свойствами. Желатин и глюкозу гидролизуют, ферментируют молоко. Не редуцируют сульфаты. Каталазоотрицательные. Штамм растет на жидких и агаризованных средах. Оптимальная температура роста 36 - 37 °C. На твердой питательной среде (картофельно-глюкозный агар) на 2 - 3-и сутки роста в анаэростате образует очень мелкие (0,7 - 1,5 мм), светлые, непигментированные, полупрозрачные круглые колонии однородной структуры, блестящие, с выпуклой гладкой поверхностью. Предельно допустимая концентрация (ПДК) штамма в воздухе рабочей зоны - 5000 кл/м3, пометка А. 3. Пределы измеренийМетодика обеспечивает выполнения измерений количества клеток микроорганизма Cl. acetobutylicum 3108 в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 500000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительной вероятности 0,95. 4. Метод измеренийМетод основан на аспирации из воздуха производственных помещений клеток микроорганизма на плотную картофельно-глюкозную среду, выращивании в анаэростате в течение 2 - 3 суток при температуре 36 - 37 °C и подсчете количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам. 5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалыПри выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы. 5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы
5.2. Реактивы, растворы
6. Требования безопасностиПри выполнении измерений концентрации клеток штамма-продуцента в воздухе рабочей зоны соблюдают следующие требования. 6.1. Санитарные правила СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 6.2. Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88. 6.3. Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора. 6.4. Руководство «Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности» (1980), «Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977). 6.5. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами. 7. Требования к квалификации операторовК выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований. 8. Условия измеренийПроцессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5) °C, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %. 9. Проведение измерения9.1. Условия отбора проб воздухаДля определения концентрации клеток микроорганизма воздух аспирируют при помощи пробоотборника со скоростью 100 л/мин на поверхность плотной питательной картофельно-глюкозной среды. Время аспирации воздуха (1 - 5 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма. Аппарат перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы. 9.2. Выполнение анализаПри выполнении анализа воздуха картофельно-глюкозную среду расплавляют, остужают до 50 - 60 °C, тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °C, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха. После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в анаэростат и термостатируют при температуре 36 - 37 °C. Через 48 - 72 ч производят подсчет выросших колоний по культурально-морфологическим признакам. Ростовые свойства используемой питательной среды должны быть проверены в соответствии с «Требованиями к ростовым свойствам питательных сред» (Государственная Фармакопея СССР, изд. XI, вып. 2, с. 208), что позволит более полно оценить пределы ошибки метода. Для этого эталонный музейный штамм-продуцент высевается на 2 - 3 чашки используемой среды, термостатируется в анаэростате и на 2 - 3-и сутки производится подсчет выросших колоний. Лиофилизованную культуру музейного штамма необходимо использовать в 2 - 3 пассажа во избежание потери им заданных ростовых свойств. 10. Вычисление результатов измеренияРасчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 м3 воздуха производят по формуле: где Х - концентрация клеток продуцента в воздухе; N - количество зон вокруг колоний продуцента, выросших на чашке; 1000 - коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха; V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации). 11. Оформление результатов измеренийРезультаты измерений оформляют протоколом по форме: Протокол № 1. Наименование и адрес испытательной лаборатории (центра), проводящей измерения, аттестат аккредитации лаборатории. 2. Юридический и фактический адрес организации-заказчика. 3. Идентификация используемого метода, методики, ссылки на методы, используемые испытательной лабораторией. 4. Описание состояния объекта исследования. 5. Дата получения объекта измерений и дата проведения анализа. 6. Место отбора пробы. 7. Результаты микробиологического анализа
Ответственный исполнитель: Научный руководитель: Список литературы1. ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования». 2. ГОСТ Р 8.563-96 ГСИ «Методики выполнения измерений». 3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности. М., 1980. 27 с. 4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности. М., 1977. 7 с. |