Государственное
санитарно-эпидемиологическое нормирование Федеральная
служба по надзору в сфере защиты прав потребителей 4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Определение химических соединений и Сборник методических указаний Выпуск 2 Москва 2018 1. Подготовлены коллективом авторов ФГБНУ «Восточно-Сибирский институт медико-экологических исследований», Федеральным бюджетным учреждением науки ФНЦ «Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения», ФБУН «Нижегородский НИИ гигиены и профпатологии» Роспотребнадзора, ФБУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора. 2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22 декабря 2016 г. № 2). 3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 15 июня 2017 г. 4. Введены впервые. СОДЕРЖАНИЕ Введение Включенные в сборник 9 методических указаний по определению химических соединений в биологических средах, объектах окружающей среды и молочной продукции предназначены для использования в химико-аналитических исследованиях при проведении биомониторинга состояния здоровья населения, для практического использования в рамках социально-гигиенического мониторинга на территориях с высокой антропогенной нагрузкой, а также могут быть использованы для диагностических целей в рамках осуществления государственного санитарного надзора, контроля, экспертизы, расследований. Методические указания предназначены для специалистов химико-аналитических лабораторий системы Роспотребнадзора, научно-исследовательских институтов, работающих в области экологии человека, гигиены окружающей среды и защиты прав потребителей. Методические указания, включенные в сборник, разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений», ГОСТ Р 1.5-92 «ГСС. Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов», МИ 2335-95 «Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа», МИ 2336-95 «Характеристики погрешности результатов количественного химического анализа. Алгоритм оценивания». Все методики измерения прошли метрологическую аттестацию в соответствии с правилами ПР 50.2.002-94 «ГСИ. Порядок осуществления государственного метрологического надзора за выпуском, состоянием и применением средств измерений, аттестованными методиками выполнения измерений, эталонами и соблюдением метрологических правил и норм». В методических указаниях, включенных в сборник, приведены методы определения 6 органических соединений в биологических средах (моча, кровь) и молочной продукции, 4 тяжелых металлов в молочной продукции и 20 тяжелых металлов и элементов в атмосферном воздухе. Определение токсичных веществ и элементов основано на использовании современных высокочувствительных методов физико-химического анализа - капиллярной газожидкостной хроматографии, хромато-масс-спектрометрии, масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой, высокоэффективной жидкостной хроматографии, потенциометрии с применением ионселективного электрода. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Измерение массовой
концентрации витамина К1 Методические указания Свидетельство о метрологической аттестации № РОСС RU.0001. 310430/0200.10.07.14 от 10.07.2014. Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для измерения массовой концентрации витамина К1 в сыворотке крови в диапазоне 2,5 - 44,0 нг/см3. Методические указания носят рекомендательный характер. Витамин К1 - витамин коагуляции, антигеморрагаческий витамин, 2-метил-3-фитил-1,4-нафтохинон. Структурная формула: Эмпирическая формула: С31Н46O2 Молекулярная масса: 450,7. Регистрационный номер СAS: 84-80-0. Физико-химические свойства. Светло-желтое маслянистое вещество, липофильно (жирорастворимо), гидрофобно, растворимо в хлороформе, диэтиловом эфире, этиловом спирте и других органических растворителях. Тпл = -20 °С, Ткип = 115 - 145 °С (в вакууме). Растворы поглощают УФ-лучи. Метаболическая роль витамина К. Витамин К необходим, прежде всего, для механизмов свертывания и регуляции крови. Также витамин К играет важную роль в формировании и восстановлении костей, обеспечивает синтез белка костной ткани (остеокальцина), на котором кристаллизуется кальций. Он способствует предупреждению остеопороза, участвует в регуляции окислительно-восстановительных процессов в организме. Дефицит витамина К в организме приводит к развитию геморрагического синдрома, который проявляется внутрикожными и подкожными кровоизлияниями, кровоточивостью десен, носовыми и желудочно-кишечными кровотечениями. Витамин К представлен в природе двумя формами: растительным филлохиноном (К1) и менахиноном (К2), синтезируемым бактериями и образующимся из формы К1. Биомаркерами витамина К являются концентрация филлохинона (витамина К1) в плазме крови и процент некарбоксилированного остеокальцина в плазме крови. Физиологическая функция витамина К заключается в образовании дополнительных карбоксильных групп в протромбине, проконвертине и других белковых факторов, которые вместе с ионами кальция инициируют процесс образования тромбина. Ферментативное действие тромбина на первом этапе способствует превращению растворимого в плазме белка фибриногена в мономерную форму белка фибрина, на следующем этапе образованию регулярной структуры растворимого фибрин-полимера. Образованный рыхлый сгусток под воздействием фибринстабилизирующего фактора свертывания крови, тромбина и ионов кальция превращается в нерастворимый фибрин, стабилизирующий структуру сгустка, необходимого для прекращения кровотечения. Нормальный уровень содержания витамина К1 в сыворотке крови составляет 5,0 - 30,0 нг/см3. Содержание в продуктах питания. Витамин К1 содержится в большом перечне пищевых источников растительной природы, включая зеленые овощи (брокколи, шпинат, капуста белокочанная, фасоль и др.), в которых он находиться в комплексе с хлорофиллом, и некоторые растительные масла (соевое, хлопковое, оливковое, рапсовое). Гидрогенизация масел приводит к снижению биодоступности и биоэффективности витамина. В молоке, яйцах, рыбе, мясе и зерновых продуктах его содержание не превышает 7 мкг в 100 г съедобной части. Кулинарные потери при тепловой обработке продуктов незначительны. Нормы потребления. Установленный уровень потребления витамина К в разных странах варьируется от 55 до 120 мкг/сутки, а физиологическая потребность для взрослых - 120 мкг/сутки, для детей - от 30 до 75 мкг/сутки. 1. Погрешность измерений1.1. Нормы погрешности измеренийНормы погрешности измерений массовой концентрации витамина К1 в сыворотке крови в нормативной документации не регламентированы. 1.2. Приписанные характеристики погрешности
измерений и
|
Диапазон определяемых концентраций, нг/см3 |
Показатель точности (границы относительной погрешности, p = 0,95), ±δ, % |
Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), σr, нг/см3 |
Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), σR, нг/см3 |
Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, нг/см3 |
Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в одной лаборатории), R, нг/см3 (p = 0,95) |
Средняя степень извлечения, % |
От 2,5 до 44,0 вкл. |
19 |
0,018· |
0,036· |
0,051· |
0,101· |
81,69 |
Значения показателя точности используют:
- при оформлении результатов измерений, выдаваемых лабораторией;
- при оценке деятельности лабораторий по вопросу качества проведения измерений;
- при оценке возможности использования результатов измерений при реализации методики измерений в конкретной лаборатории.
Выполнение измерений массовой концентрации витамина К1 в сыворотке крови проводят методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием спектрофотометрического детектора и предварительным проведением экстракции витамина из сыворотки гексаном, высушивания гексанового экстракта, растворения высушенного остатка в элюенте. Идентификация витамина осуществляется по времени удерживания. Количественное определение витамина К1 проводится методом абсолютной градуировки.
Измерению не мешают другие компоненты матрицы сыворотки, в частности, витамины А и Е.
При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.
Хроматограф жидкостный: ОСКО выходных сигналов не более 3 %; относительное отклонение выходного сигнала от первоначального значения через 8 часов работы не более 6 %; время выхода на режим не более 1 часа |
|
Спектрофотометрический детектор: диапазон длин волн 190 - 600 нм; точность установки ±1 нм; воспроизводимость ±0,5 нм; источник света - дейгеривая лампа |
|
Насос для ВЭЖХ изократический; диапазон производительности 0,01 - 10 см3/мин, максимальное рабочее давление 40 МПа, точность поддерживаемой скорости подачи растворителя 1 см3/мин ±1 % |
|
Аналитический инжекторный клапан: максимальное операционное давление - 35 МПа; управление - ручное; инжекторная петля объемом 100 мм3; материал - нержавеющая сталь; игла 22/51/3 |
|
Весы лабораторные электронные специального класса точности: дискретностью не более 0,1 мг; наименьший предел взвешивания - 0,01 г; наибольший предел взвешивания - 200 г |
|
Одноканальные дозаторы пипеточные переменного объема 5 - 50, 20 - 200, 500 - 5000 мм3 |
ТУ 9452-002-33189998-06 ТУ 9446-005-33189998-07 ТУ 9443-008-33189998-09 |
Цилиндры 3-50-1, 3-100-1,3-250-1 |
|
Пробирки со шлифом П-2-5-0,1; П-1-10-0,1 |
|
Колбы мерные, 2-10-2, 2-25-2, 2-500-2 |
|
Микропробирки полиэтиленовые конические с колпачком типа Эппендорф, объем 1,5 см3 |
|
Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.
Вода дистиллированная |
|
Метанол, осч, для хроматографии |
ТУ 6-09-2192-85 |
Ацетонитрил, осч, доя жидкостной хроматографии |
ТУ 6-09-14-2167-84 |
Метилен хлористый, осч |
ТУ 6-09-14-2149-83 |
Гексан, хч, для хроматографии |
ТУ 6-00-4521 |
Спирт этиловый ректификованный |
|
Витамин К1 (количественное содержание, включая Z и Е изомеры, - 97,69 %) |
|
Подвижная фаза (элюент) доя хроматографии - метанол:ацетонитрил:хлористый метилен (45:50:5 об.%) |
|
Примечание. Допускается использование других реактивов с аналогичной, или более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.
Аналитическая хроматографическая колонка из нержавеющей стали С18, 250×4,60 mm ×5 μм |
|
Картриджная защитная система С18 4×3,0 mm |
|
Вакуумный насос |
|
Колба Бунзена 1-1000-45 |
|
Воронка фильтрующая Шотта, пористость - S4, диаметр - 60 мм, высота - 191 мм |
|
Центрифуга лабораторная: |
|
Скорость центрифигурирования - от 100 до 3000 об./мин; максимальная центрифугальная сила - до 1900 g |
|
Перемешивающее устройство: регулируемая частота колебаний платформы 0 - 250 кол./мин; максимальное перемещение платформы - 25 мм; максимальная регулируемая температура нагрева платформы - 80 °С |
ТУ 64-1-1081-73 |
Встряхиватель: скорость вращения гнезда - 50 - 4000 об./мин; орбитальное вращение |
|
Шкаф сушильный: диапазон рабочих температур - от 50 до 320 °С; точность измерения температуры - ±0,5 °С |
|
Микрошприц объемом 500 мкл |
|
Азот газообразный |
Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4.1. При выполнении измерений соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88 и по ГОСТ 12.1.007-76.
4.2. При работе с легковоспламеняющимися веществами необходимо соблюдать меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91. Должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83.
4.3. При выполнении измерений на жидкостном хроматографе необходимо соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ Р 12.1.019-09 и инструкцией по эксплуатации прибора.
4.4. При работе со сжатыми газами необходимо соблюдать Федеральные нормы и правила в области промышленной безопасности «Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением» (утв. Ростехнадзором приказом от 25.03.2014 № 116) и ГОСТ 12.2.085-02. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.
4.5. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 (ГН 2.2.5.2308-07).
4.6. Необходимо провести обучение работающих безопасности труда согласно ГОСТ 12.0.004-90.
Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
6.1. При выполнении измерений в лаборатории должны быть выполнены следующие условия:
- температура воздуха: (20 ± 5) °С;
- атмосферное давление: 84 - 106 кПа (630 - 800 мм рт. ст.);
- относительная влажность воздуха: не более 80 %.
6.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят при следующих условиях:
- напряжение питания: (220 ± 10) В;
- частота переменного тока: (50 ± 10) Гц.
6.3. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в соответствии с руководством по эксплуатации используемого оборудования.
6.4. Для предотвращения разрушения витамина К1 анализ сыворотки и стандартов проводят, предохраняя пробы от попадания прямого солнечного света и воздействия повышенных температур. Анализ сыворотки крови необходимо проводить в течение 2 - 6 часов после забора крови.
При подготовке к выполнению измерений проводят следующие работы: подготовка хроматографических колонок, приготовление растворов, установление градуировочной характеристики, отбор и подготовку крови для анализа.
На хроматограф последовательно устанавливают предколонку, колонку.
Перед проведением измерения необходимо установить скорость подачи элюента 1 см3/мин до установления равновесия в колонке, которое определяется по стабильности нулевой линии детектора.
Элюент для хроматографии - метанол:ацетонитрил:хлористый метилен (45:50:5). В мерную колбу вместимостью 500 см3 помещают 250 см3 ацетонитрила, 25 см3 хлористого метилена и доводят объем смеси до метки метанолом. Раствор тщательно перемешивают, дегазируют фильтрованием через воронку Шотта в колбу Бунзена, присоединенную к вакуумному насосу (или дегазируют с помощью блока автоматической дегазации и фильтрации растворителя). Срок хранения полученного раствора в холодильнике при температуре 2 - 8 °С в темной посуде 1 год.
Растворы витамина К1.
Раствор А - основной раствор с массовой концентрацией витамина К1 220 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 25 см3 вносят около 1/3 объема этилового спирта, закрывают пробкой и взвешивают, затем иглой вносят каплю (0,0038 г) витамина К1 и снова взвешивают. Тщательно перемешивают до полного растворения витамина, доводят до метки этиловым спиртом, затем содержимое вновь перемешивают. Полученный раствор хранят в холодильнике при температуре 2 - 8 °С в темной посуде не более 6 месяцев.
Раствор Б с массовой концентрацией витамина К1 0,22 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 25 см3 с помощью дозатора вносят 0,025 см3 раствора А, доводят этиловым спиртом до метки и содержимое тщательно перемешивают. Полученный раствор хранят в холодильнике при температуре 2 - 8 °С не более 2 месяцев.
Рабочие градуировочные растворы. В мерные колбы вместимостью 10 см3 сначала вносят 2 - 3 см3 этилового спирта, затем с помощью дозатора вносят определенный объем раствора Б, в соответствии с табл. 2, и добавляют этиловый спирт до метки, содержимое тщательно перемешивают. Срок хранения в холодильнике при температуре 2 - 8 °С не более 2 недель.
Приготовление градуировочных растворов витамина К1
№ градуировочного раствора |
Объем раствора Б (V), см3 |
Концентрация витамина К1 в градуировочном растворе (С), нг/см3 |
1 |
2,000 |
44,0 |
2 |
1,000 |
22,0 |
3 |
0,500 |
11,0 |
4 |
0,200 |
4,4 |
5 |
0,057 |
2,5 |
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость величины аналитического сигнала от массовой концентрации витамина К1 (нг/см3), устанавливают путем измерения высот пиков витамина К1 в градуировочных растворах, приготовленных по п. 7.2.
Каждый из градуировочных растворов в количестве 0,5 см3 шприцем вводят в хроматографическую систему, с помощью петлевого дозатора отсекается по 0,1 см3, которые анализируются без термостатирования колонки в следующих условиях:
- скорость движения элюента 1 см3/мин
- длина волны спектрофотометрического детектора 248 нм
- время удерживания витамина К1 17 - 18 мин
Для каждого анализируемого раствора проводят 5 параллельных измерений. По средним арифметическим значениям из пяти результатов измерения высот пиков в программе сбора и обработки хроматографических данных строится градуировочный график в координатах: «концентрация витамина (Спр), нг/см3» - «высота пика витамина (Н), мВ». Различие между измеренными значениями аналитических сигналов и времен удерживания не должно превышать 5 % от средних значений. Линейная зависимость должна соблюдаться во всем диапазоне определяемых концентраций.
Венозную кровь отбирают в количестве 5 см3 утром натощак. Для получения сыворотки кровь термостатируют в течение 30 мин при 37 °С, затем аккуратно обводят по всему радиусу пробирки стеклянной палочкой и центрифугируют в течение 15 мин со скоростью 3000 об./мин. Далее сыворотку (верхний слой) отделяют в пробирки типа Эппендорф и используют для анализа.
В центрифужные стеклянные пробирки с притертой пробкой помещают по 0,8 см3 сыворотки, добавляют равное количество этилового спирта (для осаждения белка), встряхивают в течение 2 - 3 с на встряхивателе со скоростью вращения гнезда 2000 об./мин. Затем к смеси добавляют 0,8 см3 гексана, пробирки плотно закрывают пробкой и перемешивают в течение 15 мин на перемешивающем устройстве, при этом пробирки закрывают черной бумагой для предотвращения прямого воздействия света. Далее пробы центрифугируют в течение 10 мин со скоростью 3000 об./мин. Аликвоты гексановых экстрактов в количестве 0,5 см3 переносят в пробирки типа Эппендорф и упаривают в токе азота досуха. Остатки растворяют в 0,5 см3 элюента. Для каждой пробы выполняют два параллельных измерения.
Примечание. Процедуры перемешивания и центрифугирования необходимо проводить в темноте, при охлаждении.
После выхода хроматографа на режим в дозирующее устройство прибора микрошприцем вводят 0,5 см3 одного из градуировочных растворов (обычно с концентрацией, лежащей в середине рабочего диапазона) и анализируют в условиях, указанных в п. 7.3. По окончании хроматографического анализа определяют время удерживания витамина К1 и высоту пика. Далее величина высоты полученного пика наносится на градуировочный график (с целью корректировки градуировочной характеристики).
Затем в дозирующее устройство вводят 0,5 см3 анализируемого раствора и так же анализируют в условиях, указанных в п. 7.3. По окончании хроматографического анализа проводят ручную разметку пиков и идентификацию обнаруженных пиков. Витамин К1 идентифицируют по времени удерживания: совпадение времени удерживания витамина К1 в пробе с временем удерживания витамина К1 в градуировочном растворе (с ошибкой не более 5 %) свидетельствует о правильной идентификации.
Количественный расчет массовой концентрации витамина К1 осуществляют с помощью программы сбора и обработки хроматографических данных. Используют метод абсолютной градуировки. При этом концентрация витамина 1 ч в пробе (Спр, нг/см3) считается автоматически.
Вычисляют среднее арифметическое двух параллельных измерений Спр1, Спр2, расхождение между которыми не должно превышать 5 % от среднего значения:
|
Спр - массовая концентрация витамина К1 в сыворотке крови, нг/см3.
Результат считают удовлетворительным, если выполняется следующее неравенство:
|
(4) |
Cmax и Сmin - максимальный и минимальный результат единичных измерений;
r - предел повторяемости (допускаемое расхождение между результатами единичных измерений), %.
Значения предела повторяемости r представлены в табл. 1.
При превышении предела повторяемости определение повторяют. При повторном превышении норматива повторяемости выясняют причины, приводящие к получению неудовлетворительных результатов, и устраняют их.
Результат количественного анализа «С», нг/см3 представляют в виде:
|
С - среднее арифметическое результатов параллельных определений, признанных приемлемыми, нг/см3,
δ - относительная погрешность определения массовой концентрации витамина К1, %, приведенная в табл. 1.
Примечание. Числовые значения результата измерений оканчиваются цифрой того же разряда, что и значение показателя точности методики измерений (абсолютной погрешности измерений массовой доли определяемого компонента).
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводится каждый раз перед началом анализа и через каждые пять проб по раствору стандартного образца. Рекомендуется, чтобы концентрация уточняющего стандарта находилась примерно в середине диапазона концентраций, в котором предполагается проводить измерения, в случае же если он заранее неизвестен, то в середине диапазона градуировочного графика.
Контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется путем сравнения данных о содержании витамина К1 полученных с помощью градуировочной характеристики, с реальным содержанием витамина К1 в контрольном растворе.
Стабильность градуировочной характеристики считают удовлетворительной, если для контрольной точки выполняется следующее условие:
|
С0 - Сг - расхождение между аттестованным значением массовой концентрации раствора стандартного образца и концентрацией, определенной с помощью градуировочной характеристики, нг/см3;
С0 - концентрация раствора, приготовленного из ГСО, нг/см3;
Сг - массовая концентрация витамина К1, определенная по градуировочной характеристике, нг/см3;
Кг - норматив контроля стабильности градуировочной характеристики: Кг = 1,96·σR, где
σR - показатель воспроизводимости, приведен в табл. 1.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если отклонение не превышает ±Кг. Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. Если результат повторного сравнения неудовлетворителен, то выясняют причины, приводящие к получению неудовлетворительных результатов контроля, и устраняют их. В случае невозможности устранения причин, приводящих к превышению норматива контроля стабильности градуировочной характеристики, градуировку проводят заново.
Для контроля внутрилабораторной прецизионности используют рабочие пробы. Две параллельные пробы анализируют в соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. в разное время, разными исполнителями, с использованием разных наборов посуды.
Внутрилабораторную прецизионность результатов измерений считают удовлетворительной, если расхождение между результатами анализа, полученными в одной лаборатории (в разное время, разными исполнителями, с использованием разных партий средств измерений) не превышает предела внутрилабораторной прецизионности Rл = 0,84R:
|
Сmax, Сmin - максимальный и минимальный результаты анализа при контроле внутрилабораторной прецизионности, нг/см3;
Сmax - Сmin - фактическое расхождение между результатами анализа, нг/см3;
R - предел прецизионности, приведенный в табл. 1.
При удовлетворительных результатах контроля внутрилабораторной прецизионности приемлемы оба результата анализа, а в качестве окончательного может быть использовано их среднее арифметическое значение.
При превышении предела внутрилабораторной прецизионности Rл могут быть использованы методы оценки приемлемости результатов анализа согласно раздела 5 ГОСТ Р ИСО 5725-6.
Контроль точности результатов измерений проводят методом добавок в рабочие сыворотки крови.
Отобранную сыворотку крови делят на две части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат определения витамина К1 в пробе (C), нг/см3. Во вторую часть вносят добавку (Сд) определяемого элемента, используя стандартные растворы. Содержание добавки должно составлять 50 - 150 % от содержания витамина К1 в пробе.
Результат контроля считается удовлетворительным при выполнении условия:
Кк = |(С′ - С) - Сд| ≤ Кд, где |
С′ - результат определения массовой концентрации витамина К1 в пробе с добавкой, нг/см3;
С - результат определения массовой концентрации витамина К1 в рабочей пробе без добавки, нг/см3;
Сд - действительное содержание элемента в добавке к пробе, рассчитанное исходя из значения его содержания в стандартном образце, нг/см3.
Кд - норматив оперативного контроля точности.
Норматив оперативного контроля точности рассчитывают по формуле:
|
Δ1 и Δ2 - абсолютные погрешности определения массовой концентрации витамина К1 в пробе (С) и в пробе с добавкой (С′) соответственно. Значения Δ1 и Δ2 рассчитывают по формулам:
Δ1 = 0,01·δ·С; Δ2 = 0,01·δ·С′, где |
δ - относительная погрешность определения массовой концентрации витамина К1, приведенная в табл. 1.
Методические указания разработаны ФБУН «Нижегородский НИИ гигиены и профпатологии» Роспотребнадзора (Соколова О.В., Потапова И.А.).