Государственное санитарно-эпидемиологическое 4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Определение химических соединений Сборник
методических указаний Минздрав
России 1. Разработаны под редакцией академика РАЕН, д.м.н., проф. Зайцевой Н.В., к.б.н. Улановой Т.С., к.б.н. Нурисламовой Т.В., Карнажицкой Т.Д., Суетиной Г.Н., Поповой Н.В., Митрофановой В.М., Плаховой Л.В., Рудаковой Е.А. (ПНИКИ детской экопатологии). 2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 6 июля 1999 г. СОДЕРЖАНИЕ
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Газохроматографический
метод количественного определения ароматических Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТа 8.563-96 «Методики выполнения измерений» и ГОСТа Р 1.5-92 «Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов». Методика анализа метрологически аттестована и обеспечивает определение ароматических аминосоединений в моче в диапазоне концентраций:
Сущность методаМетодика основана на предварительном концентрировании анализируемых соединений из биологического материала экстракцией хлороформом и последующего газохроматографического анализа хлороформенного экстракта. Измерение концентрации ароматических аминосоединений выполняют методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектированием. Нижний предел измерения в объеме пробы:
Определению не мешают ацетон, ароматические углеводороды и алифатические спирты. Длительность анализа, включая экстракцию пробы, - 40 мин. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивыПри выполнении применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными метрологическими характеристиками. Средства измерений
Вспомогательные устройства
Материалы
Реактивы
Требования к безопасностиПомещение для проведения измерений должно соответствовать требованиям «Пожарных норм проектирования зданий и сооружений» (СНиП IIА-5-700) и «Санитарных норм проектирования промышленных предприятий» (СН-245-71) и СНиП-74. При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76. При работе необходимо соблюдать «Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях», утверждены МЗ СССР 20.12.82 (М., 1981), и «Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением», утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра, 1989). При работе с реактивом соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88. При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора. Требования к квалификации оператораК выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и опыт работы на газовом хроматографе. Условия измеренийПри проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия: - температура воздуха - (20 ± 5) °С; - атмосферное давление 630 - 800 мм рт. ст.; - влажность воздуха - не более 80 % при температуре 25 °С. Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору. Подготовка к выполнению измеренийПеред выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка хроматографической колонки, приготовление стандартных смесей, установление градуировочной характеристики. Приготовление стандартных смесей Для построения градуировочного графика собирают мочу, не содержащую исследуемых компонентов, и готовят серию рабочих стандартных растворов. Стандартные растворы аминосоединений и внутреннего стандарта готовят в мерных колбах вместимостью 100 см3 с содержанием этих веществ 20, 30, 50, 60, 70 мг и дифенила с содержанием 100, 90, 70, 60, 50 мг в хлороформе. Подготовка хроматографической колонки Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают дистиллированной водой, ацетоном, гексаном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (гелия) с расходом 55 см3/мин при температуре 300 °С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору, записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе. Установление градуировочной характеристики Градуировочную характеристику устанавливают методом внутреннего стандарта (в качестве внутреннего стандарта - дифенил). Она выражает зависимость калибровочных коэффициентов (Ki/cm) от отношения площадей пиков на хроматограмме (Si/Sст) и строится по 5 сериям стандартных растворов для градуировки. Для этого в каждую колбу вместимостью 100 см3 вносят небольшое количество хлороформа и взвешивают, затем прибавляют аминосоединения и внутренний стандарт и взвешивают колбу повторно. Объем доводят до метки хлороформом и по разности результатов первого и второго взвешиваний вычисляют массу аминосоединений и внутреннего стандарта. Срок хранения - 3 ч. Таблица Стандартные растворы для установления градуировочной характеристики при определении концентрации аминосоединений (фрагмент шкалы)
В хроматографическую колонку через испаритель вводят по 10 мм3 каждого стандартного раствора и анализируют в условиях:
На хроматограмме находят значения площадей пиков и внутреннего стандарта и вычисляют калибровочные коэффициенты на основании анализа бинарных смесей: анилин-дифенил, N-метиланилин-дифенил, о-толуидин-дифенил, N,N-диметиланилин-дифенил, N-этиланилин-дифенил и N,N-диэтиланилин-дифенил. Значение калибровочного коэффициента вычисляют по формуле:
Si, Scm - площади пиков исследуемого компонента и стандарта, мм2; Qi, Qcm - количество исследуемого компонента и стандарта, мг. По результатам 5 измерений определяется среднее значение калибровочного коэффициента Ki/cm и строится градуировочный график в координатах калибровочный коэффициент - отношение площадей пиков Si/Scm. Градуировку проверяют 1 раз в неделю и при смене партии реактивов. Отбор проб Отбор проб мочи в объеме 100 см3 производится в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после отбора пробы. Выполнение измеренийАнализируемую пробу мочи в количестве 100 см3 помещают в делительную воронку, добавляют 30 г (хлорид натрия) и 10 см3 хлороформа. Содержимое воронки интенсивно встряхивают 15 мин, после отстаивания хлороформенный экстракт сливают в пробирку и центрифугируют для денатурации белка 20 мин. Полученный центрифугат упаривают на ротационном испарителе и проводят газохроматографический анализ. Вычисление результатов измеренийРасчет концентрации анилина, N-метиланилина, о-толуидина, N,N-диметиланилина, N-этиланилина, N,N-диэтиланилина (мкг/см3) в биопробе вычисляют по формуле:
С - концентрация анализируемых соединений в биопробе, мкг/см3; Si, Scm - площади пиков компонентов и стандарта, мм2; Ki/cm - калибровочный коэффициент; mcm - навеска стандарта, мг; V - объем пробы, см3. Внутренний оперативный контрольВнутренний оперативный контроль качества результатов контрольного химического анализа (сходимость, воспроизводимость, точность) осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве анализов и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению (МИ 2335-95). Контроль сходимости выходных сигналов Контролируемым параметром является относительный размах выходных сигналов хроматографа при вводах трех параллельных проб градуировочного раствора. Контроль осуществляется при проведении градуировки, при периодическом контроле градуировочных коэффициентов, а также при выполнении измерений. Результат контроля признается положительным при выполнении условия:
S - площадь пика, мм2; - среднее арифметическое значение площади пиков при вводе 3 параллельных проб градуировочного раствора. Оперативный контроль точности Периодичность контроля погрешности измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля. Образцами для контроля являются представительные пробы биосред, к которым делаются добавки в виде раствора. Отбирают 2 пробы и к одной из них делают добавку в виде раствора таким образом, чтобы их содержание увеличилось по сравнению с исходным на 50 - 150 %. Каждую пробу анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы X и рабочей пробы с добавкой X'. Результаты анализа исходной рабочей пробы X и рабочей пробы с добавкой X' получают не по возможности, а в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д. Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:
С - добавка к пробе в виде раствора с концентрацией, мкг/см3; Кд - норматив оперативного контроля погрешности, мкг/см3. При внешнем контроле (Р = 0,95) принимают
- характеристики погрешностей для исходной пробы и пробы с добавкой, мкг/см3.
При внутрилабораторном контроле (Р = 0,90) принимают, что
При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и их устраняют. Приложение АРис. 1. Установка для создания равновесной паровой фазы. 1 - термометр; 2 - накидная гайка; 3 - шприц; 4 -
резиновая мембрана; 5 - равновесный сосуд; Рис. 2. Стакан с навинчивающейся крышкой для фиксации пробки на флаконе. Приложение БПрибор для анализа равновесной паровой фазы: 1 - термометр; 2 - накидная гайка; 3 - шприц; 4 -
резиновая мембрана; Приложение ВУстановка для перегонки с водяным паром
|