На главную | База 1 | База 2 | База 3

Государственное санитарно-эпидемиологическое
нормирование Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение химических соединений
в биологических средах

Сборник методических указаний
МУК 4.1.763 - 4.1.779-99

Минздрав России
Москва 2000

1. Разработаны под редакцией академика РАЕН, д.м.н., проф. Зайцевой Н.В., к.б.н. Улановой Т.С., к.б.н. Нурисламовой Т.В., Карнажицкой Т.Д., Суетиной Г.Н., Поповой Н.В., Митрофановой В.М., Плаховой Л.В., Рудаковой Е.А. (ПНИКИ детской экопатологии).

2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 6 июля 1999 г.

СОДЕРЖАНИЕ

 

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

6 июля 1999 г.

МУК 4.1.764-99

Дата введения: 6 сентября 1999 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Газохроматографический метод количественного определения
предельных (гексан, гептан) и ароматических (бензол, толуол,
этилбензол, о-, м-, п-ксилол) углеводородов в биосредах (моча)

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТа 8.563-96 «Методики выполнения измерений» и ГОСТа Р 1.5-92. Методика анализа метрологически аттестована и обеспечивает определение предельных и ароматических углеводородов в моче в диапазоне концентраций:

гексан - 0,030 - 1,0 мкг/см3;

гептан - 0,030 - 4,1 мкг/см3;

бензол - 0,005 - 0,5 мкг/см3;

толуол - 0,050 - 1,0 мкг/см3;

этилбензол - 0,005 - 0,1 мкг/см3;

п-, м-ксилол - 0,050 - 1,7 мкг/см3;

о-ксилол - 0,050 - 1,7 мкг/см3.

ГЕКСАН

СН3(СН2)4СН3

Мол. масса - 86,18

Гексан - бесцветная жидкость со специфическим запахом. Ткип - 68,72 °С, Тплавл - минус 95,34 °С. Гексан растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. Гексан - сильнейший наркотик, относится к 4 классу опасности.

ГЕПТАН

СН3(СН2)5СН3

Мол. масса - 100,20

Гептан - бесцветная жидкость со специфическим запахом. Ткип - 98,42 °С, Тплавл - минус 90,61 °С. Гептан растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. Гептан - сильнейший наркотик, относится к 4 классу опасности.

БЕНЗОЛ

С6Н6

Мол. масса - 78,12

Бензол - бесцветная жидкость со специфическим запахом. Ткип - 80,103 °С, Тплавл - минус 5,533 °С. Бензол растворим в неполярных органических растворителях и малорастворим в воде. Бензол в высоких концентрациях обладает выраженным наркотическим действием, относится ко 2 классу опасности.

ТОЛУОЛ

С6Н5СН3

Мол. масса - 92,14

Толуол - бесцветная жидкость со специфическим запахом. Толуол растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. Толуол в высокоих концентрациях обладает выраженным наркотическим действием, относится к 4 классу опасности.

ЭТИЛБЕНЗОЛ

С6Н5С2Н5

Мол. масса - 106,17

Этилбензол - бесцветная жидкость со специфическим запахом. Ткип - 136,19 °С, Тплавл - минус 94,98 °С. Этилбензол растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. Этилбензол в высоких концентрациях обладает ярко выраженным наркотическим действием, относится к 3 классу опасности.

КСИЛОЛ (О-, М-, П-)

С6Н4(СН3)2

Мол. масса - 106,17

О-ксилол - бесцветная жидкость со специфическим запахом. Ткип - 144,41 °С, Тплавл - минус 25,175 °С. О-ксилол растворим в органических растворителях и не растворим в воде. О-ксилол в высоких концентрациях обладает наркотическим действием, относится к 3 классу опасности.

М-ксилол - бесцветная жидкость со специфическим запахом. Ткип - 139,1 °С, Тплавл - минус 47,872 °С. М-ксилол растворим в органических растворителях и не растворим в воде. М-ксилол в высоких концентрациях обладает наркотическим действием, относится к 3 классу опасности.

П-ксилол - бесцветная жидкость со специфическим запахом. Ткип - 138,35 °С, Тплавл - минус 13,26 °С. П-ксилол растворим в органических растворителях и не растворим в воде. П-ксилол в высоких концентрациях обладает наркотическим действием, относится к 3 классу опасности.

Общая погрешность метода определения:

гексана - 13,4 %,

гептана - 12,7 %,

бензола - 10,0 %,

толуола - 12,6 %,

этилбензола - 20,9 %,

п-, м-ксилола - 11,3 %,

о-ксилола - 23,0 %.

Сущность метода

Методика основана на предварительном выделении предельных и ароматических углеводородов из биологического материала путем нагревания объекта и последующего газохроматографического анализа парогазовой фазы.

Измерение концентрации предельных и ароматических углеводородов выполняют методом газовой хроматографии с пламенноионизационным детектированием.

Определению не мешают ацетон, этанол и другие спирты.

Длительность анализа - 15 мин.

Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы

При выполнении применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными метрологическими характеристиками.

Средства измерений

Хроматограф газовый с пламенно-ионизационным детектором

 

Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические

ГОСТ 24104-80Е

Секундомер «Агат»

ГОСТ 5072-79Е

Микрошприцы МШ-10

ТУ 5Е2.833.106

Шприцы медицинские стеклянные вместимостью 5 см3

ТУ 64-1-378-83

Колбы мерные вместимостью 100, 1000 см3

ГОСТ 1770-74Е

Пипетки вместимостью 1, 5, 10 см3

ГОСТ 20292-74

Вспомогательные устройства

Хроматографическая колонка стальная длиной 3 м и внутренним диаметром 3 мм

 

Бидистилятор

ГОСТ 15150-69

Редуктор кислородный

ТУ 26-05-235-70

Материалы

Гелий в баллоне

ТУ 51-940-80

Водород технический

ГОСТ 3022-80

Воздух в баллоне

ГОСТ 11882-73

Реактивы

Apiezon L на хроматоне N-супер фракции 0,16 - 0,20 мм - неподвижная фаза для заполнения хроматографической колонки

 

Гексан ч.

ТУ 6-09-3375-78

Гептан ч.

ГОСТ 25828-83

Бензол х. ч.

ТУ 6-09-787-76

Толуол х. ч.

ТУ 6-09-787-76

Этилбензол х. ч.

ТУ 6-09-787-76

П-, м-ксилол х. ч.

ТУ 6-09-915-76

О-ксилол

ГСО 2913-84

Вода дистиллированная

ГОСТ 6709-72

Требования к безопасности

Помещение для проведения измерений должно соответствовать требованиям «Пожарных норм проектирования зданий и сооружений» (СНиП IIА-5-700) и «Санитарных норм проектирования промышленных предприятий» (СН-245-71) и СНиП-74.

При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76.

При работе необходимо соблюдать «Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях», утверждены МЗ СССР 20.12.82 (М., 1981), и «Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением», утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра, 1989).

При работе с реактивом соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.

При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.

Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений допускаются лица, прошедшие специализацию по работе на газовом хроматографе.

Условия измерений

При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:

- температура воздуха - (20 ± 5) °С;

- атмосферное давление 630 - 800 мм рт. ст.;

- влажность воздуха - не более 80 % при температуре 25 °С.

Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.

Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка хроматографической колонки, приготовление стандартных смесей, установление градуировочной характеристики.

Приготовление стандартных смесей

Для построения градуировочного графика собирают мочу, не содержащую определяемые компоненты, и готовят серию рабочих стандартных растворов.

Исходный стандартный раствор для градуировки: в колбу вместимостью 1000 см3 с дистиллированной водой вводят микрошприцем 2 мкл бензола, по 10 мм3 гексана, гептана, толуола и этилбензола, по 20 мм3 п-, м-ксилола и о-ксилола. Весовое содержание компонентов в исходной стандартной смеси составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): гексан - 6,55 мкг/см3, гептан - 6,84 мкг/см3, бензол - 1,76 мкг/см3, толуол - 8,66 мкг/см3, этилбензол - 8,67 мкг/см3, п-, м-ксилол - 17,60 мкг/см3, о-ксилол - 17,60 мкг/см3. Срок хранения - 3 ч.

Подготовка хроматографической колонки

Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают дистиллированной водой, ацетоном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (гелия) с расходом 30 см3/мин при температуре 200 °С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору, записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.

Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной градуировки на градуировочных смесях предельных и ароматических углеводородов. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (мм2) от массы компонента (мкг) и строится по 5 сериям стандартных растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из 5 стандартных растворов, готовят в мерных колбах объемом 100 см3. Для этого в каждую колбу вносят исходное вещество в соответствии с таблицей. Срок хранения - 3 ч.

Таблица

Стандартные смеси для установления градуировочной характеристики при определении концентрации предельных и ароматических углеводородов (фрагмент шкалы)

Номер смеси для градуировки

1

2

3

4

5

ГЕКСАН Объем исходной стандартной смеси (6,548 мкг/см3), см3

0,5

1,0

2,0

5,0

10,0

Содержание гексана, мкг/см3

0,033

0,065

0,130

0,330

0,650

ГЕПТАН Объем исходной стандартной смеси (6,84 мкг/см3), см3

0,5

1,0

2,0

5,0

10,0

Содержание гептана, мкг/см3

0,034

0,068

0,140

0,340

0,680

БЕНЗОЛ Объем исходной стандартной смеси (1,76 мкг/см3), см3

0,5

1,0

2,0

5,0

10,0

Содержание бензола, мкг/см3

0,009

0,018

0,035

0,090

0,180

ТОЛУОЛ Объем исходной стандартной смеси (8,66 мкг/см3), см3

0,5

1,0

2,0

5,0

10,0

Содержание толуола, мкг/см3

0,04

0,09

0,17

0,43

0,87

ЭТИЛБЕНЗОЛ Объем исходной стандартной смеси (8,67 мкг/см3), см3

0,5

1,0

2,0

5,0

10,0

Содержание этилбензола, мкг/см3

0,04

0,09

0,17

0,43

0,87

П-, М-КСИЛОЛ Объем исходной стандартной смеси (17,6 мкг/см3), см3

0,5

1,0

2,0

5,0

10,0

Содержание п-,м-ксилола, мкг/см3

0,09

0,18

0,35

0,90

1,80

О-КСИЛОЛ Объем исходной стандартной смеси (17,6 мкг/см3), см3

0,5

1,0

2,0

5,0

10,0

Содержание о-ксилола, мкг/см3

0,09

0,18

0,35

0,90

1,80

В хроматографическую колонку через испаритель вводят по 5 см3 парогазовой пробы каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях:

температура термостата колонок

95 °С;

температура испарителя

150 °С;

температура детектора

100 °С;

расход газа-носителя (гелия)

30 см3/мин;

расход водорода

30 см3/мин;

расход воздуха

300 см3/мин;

шкала измерителя тока

10×10-12 А;

скорость диаграммной ленты

240 мм/ч;

время удерживания: гексана

1 мин 35 с;

бензола

2 мин 10 с;

гептана

2 мин 40 с;

толуола

3 мин 45 с;

этилбензола

7 мин 00 с;

п-, м-ксилола

7 мин 50 с;

о-ксипола

8 мин 30 с.

На полученной хроматограмме определяют площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам из 5 серий строят градуировочную характеристику. Градуировку проверяют 1 раз в неделю и при смене партии реактивов.

Отбор проб

Отбор проб мочи в объеме 100 см3 производится в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после отбора пробы.

Выполнение измерений

Во флакон из-под пенициллина помещают 5 см3 исследуемой биопробы. Флакон закрывают резиновой пробкой и ставят в металлический цилиндр с просверленными в стенках отверстиями и навинчивающейся крышкой. Цилиндр с флаконом погружают на 2/3 высоты в кипящую водяную баню (прилож. А). По истечении 5 мин отбирают шприцем из флакона 5 см3 парогазовой фазы и вводят ее в колонку хроматографа. На хроматограмме рассчитывают площадь пика и по грдуировочной характеристике определяют концентрацию предельных и ароматических углеводородов в биопробе.

Вычисление результатов измерений

На хроматограмме рассчитывают площадь пика и по градуировочной характеристике определяют концентрацию гексана, гептана, бензола, толуола, этилбензола, п-, м-ксилола, о-ксилола в биопробе.

Результат измерения содержания компонента в биопробе определяется путем трехкратного замера с учетом среднего квадратичного отклонения.

Результат анализа представляют в виде:

Xср ± 0,165∙Xср, где

Хср - среднее значение замеренных концентраций, мкг/см3.

Внутренний оперативный контроль

Внутренний оперативный контроль качества результатов контрольного химического анализа (сходимость, воспроизводимость, точность) осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве анализов и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению (МИ 2335-95).

Оперативный контроль сходимости

Контролируемым параметром является относительный размах выходных сигналов хроматографа при вводах трех параллельных проб градуировочного раствора. Контроль осуществляется при проведении градуировки, при периодическом контроле градуировочных коэффициентов, а также при выполнении измерений.

Результат контроля признается положительным при выполнении условия:

S - площадь пика, мм2;

 - среднее арифметическое значение площади пиков при вводе 3 параллельных проб градуировочного раствора.

Оперативный контроль точности

Периодичность контроля погрешности измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.

Образцами для контроля являются представительные пробы биосред, к которым делаются добавки в виде раствора. Отбирают 2 пробы и к одной из них делают добавку в виде раствора таким образом, чтобы их содержание увеличилось по сравнению с исходным на 50 - 150 %. Каждую пробу анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы X и рабочей пробы с добавкой X'. Результаты анализа исходной рабочей пробы X и рабочей пробы с добавкой X' получают не по возможности, а в одинаковых условиях, т. е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.

Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:

|X' - X - С| < Кд, где

С - добавка к пробе в виде раствора с концентрацией, мкг/см3;

Кд - норматив оперативного контроля погрешности, мкг/см3.

При внешнем контроле (Р = 0,95) принимают

, где

 - характеристики погрешностей для исходной пробы и пробы с добавкой, мкг/см3.

При внутрилабораторном контроле (Р = 0,90) принимают, что

К'д = 0,84∙Кд

При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и их устраняют.

Приложение А

Рис. 1. Установка для создания равновесной паровой фазы.

1 - термометр; 2 - накидная гайка; 3 - шприц; 4 - резиновая мембрана; 5 - равновесный сосуд;
6 - проба; 7 - термостатируемая жидкостная баня.

Рис. 2. Стакан с навинчивающейся крышкой для фиксации пробки на флаконе.

Приложение Б

Прибор для анализа равновесной паровой фазы:

1 - термометр; 2 - накидная гайка; 3 - шприц; 4 - резиновая мембрана;
5 - равновесный сосуд; 6 - проба; 7 - термостатируемая жидкостная баня

Приложение В

Установка для перегонки с водяным паром