Государственное санитарно-эпидемиологическое 4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Определение химических соединений Сборник
методических указаний Минздрав
России 1. Разработаны под редакцией академика РАЕН, д.м.н., проф. Зайцевой Н.В., к.б.н. Улановой Т.С., к.б.н. Нурисламовой Т.В., Карнажицкой Т.Д., Суетиной Г.Н., Поповой Н.В., Митрофановой В.М., Плаховой Л.В., Рудаковой Е.А. (ПНИКИ детской экопатологии). 2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 6 июля 1999 г. СОДЕРЖАНИЕ
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Газохроматографический метод количественного
определения Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТа 8.563-96 «Методики выполнения измерений» и ГОСТа Р 1.5-92. Методика анализа метрологически аттестована и обеспечивает определение предельных и ароматических углеводородов в моче в диапазоне концентраций:
Общая погрешность метода определения: гексана - 13,4 %, гептана - 12,7 %, бензола - 10,0 %, толуола - 12,6 %, этилбензола - 20,9 %, п-, м-ксилола - 11,3 %, о-ксилола - 23,0 %. Сущность методаМетодика основана на предварительном выделении предельных и ароматических углеводородов из биологического материала путем нагревания объекта и последующего газохроматографического анализа парогазовой фазы. Измерение концентрации предельных и ароматических углеводородов выполняют методом газовой хроматографии с пламенноионизационным детектированием. Определению не мешают ацетон, этанол и другие спирты. Длительность анализа - 15 мин. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивыПри выполнении применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными метрологическими характеристиками. Средства измерений
Вспомогательные устройства
Материалы
Реактивы
Требования к безопасностиПомещение для проведения измерений должно соответствовать требованиям «Пожарных норм проектирования зданий и сооружений» (СНиП IIА-5-700) и «Санитарных норм проектирования промышленных предприятий» (СН-245-71) и СНиП-74. При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76. При работе необходимо соблюдать «Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях», утверждены МЗ СССР 20.12.82 (М., 1981), и «Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением», утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра, 1989). При работе с реактивом соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88. При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора. Требования к квалификации оператораК выполнению измерений допускаются лица, прошедшие специализацию по работе на газовом хроматографе. Условия измеренийПри проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия: - температура воздуха - (20 ± 5) °С; - атмосферное давление 630 - 800 мм рт. ст.; - влажность воздуха - не более 80 % при температуре 25 °С. Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору. Подготовка к выполнению измеренийПеред выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка хроматографической колонки, приготовление стандартных смесей, установление градуировочной характеристики. Приготовление стандартных смесей Для построения градуировочного графика собирают мочу, не содержащую определяемые компоненты, и готовят серию рабочих стандартных растворов. Исходный стандартный раствор для градуировки: в колбу вместимостью 1000 см3 с дистиллированной водой вводят микрошприцем 2 мкл бензола, по 10 мм3 гексана, гептана, толуола и этилбензола, по 20 мм3 п-, м-ксилола и о-ксилола. Весовое содержание компонентов в исходной стандартной смеси составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): гексан - 6,55 мкг/см3, гептан - 6,84 мкг/см3, бензол - 1,76 мкг/см3, толуол - 8,66 мкг/см3, этилбензол - 8,67 мкг/см3, п-, м-ксилол - 17,60 мкг/см3, о-ксилол - 17,60 мкг/см3. Срок хранения - 3 ч. Подготовка хроматографической колонки Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают дистиллированной водой, ацетоном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (гелия) с расходом 30 см3/мин при температуре 200 °С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору, записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе. Установление градуировочной характеристики Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной градуировки на градуировочных смесях предельных и ароматических углеводородов. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (мм2) от массы компонента (мкг) и строится по 5 сериям стандартных растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из 5 стандартных растворов, готовят в мерных колбах объемом 100 см3. Для этого в каждую колбу вносят исходное вещество в соответствии с таблицей. Срок хранения - 3 ч. Таблица Стандартные смеси для установления градуировочной характеристики при определении концентрации предельных и ароматических углеводородов (фрагмент шкалы)
В хроматографическую колонку через испаритель вводят по 5 см3 парогазовой пробы каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях:
На полученной хроматограмме определяют площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам из 5 серий строят градуировочную характеристику. Градуировку проверяют 1 раз в неделю и при смене партии реактивов. Отбор проб Отбор проб мочи в объеме 100 см3 производится в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после отбора пробы. Выполнение измеренийВо флакон из-под пенициллина помещают 5 см3 исследуемой биопробы. Флакон закрывают резиновой пробкой и ставят в металлический цилиндр с просверленными в стенках отверстиями и навинчивающейся крышкой. Цилиндр с флаконом погружают на 2/3 высоты в кипящую водяную баню (прилож. А). По истечении 5 мин отбирают шприцем из флакона 5 см3 парогазовой фазы и вводят ее в колонку хроматографа. На хроматограмме рассчитывают площадь пика и по грдуировочной характеристике определяют концентрацию предельных и ароматических углеводородов в биопробе. Вычисление результатов измеренийНа хроматограмме рассчитывают площадь пика и по градуировочной характеристике определяют концентрацию гексана, гептана, бензола, толуола, этилбензола, п-, м-ксилола, о-ксилола в биопробе. Результат измерения содержания компонента в биопробе определяется путем трехкратного замера с учетом среднего квадратичного отклонения. Результат анализа представляют в виде:
Хср - среднее значение замеренных концентраций, мкг/см3. Внутренний оперативный контрольВнутренний оперативный контроль качества результатов контрольного химического анализа (сходимость, воспроизводимость, точность) осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве анализов и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению (МИ 2335-95). Оперативный контроль сходимости Контролируемым параметром является относительный размах выходных сигналов хроматографа при вводах трех параллельных проб градуировочного раствора. Контроль осуществляется при проведении градуировки, при периодическом контроле градуировочных коэффициентов, а также при выполнении измерений. Результат контроля признается положительным при выполнении условия:
S - площадь пика, мм2; - среднее арифметическое значение площади пиков при вводе 3 параллельных проб градуировочного раствора. Оперативный контроль точности Периодичность контроля погрешности измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля. Образцами для контроля являются представительные пробы биосред, к которым делаются добавки в виде раствора. Отбирают 2 пробы и к одной из них делают добавку в виде раствора таким образом, чтобы их содержание увеличилось по сравнению с исходным на 50 - 150 %. Каждую пробу анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы X и рабочей пробы с добавкой X'. Результаты анализа исходной рабочей пробы X и рабочей пробы с добавкой X' получают не по возможности, а в одинаковых условиях, т. е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д. Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:
С - добавка к пробе в виде раствора с концентрацией, мкг/см3; Кд - норматив оперативного контроля погрешности, мкг/см3. При внешнем контроле (Р = 0,95) принимают
- характеристики погрешностей для исходной пробы и пробы с добавкой, мкг/см3.
При внутрилабораторном контроле (Р = 0,90) принимают, что
При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и их устраняют. Приложение АРис. 1. Установка для создания равновесной паровой фазы. 1 - термометр; 2 - накидная гайка; 3 - шприц; 4 -
резиновая мембрана; 5 - равновесный сосуд; Рис. 2. Стакан с навинчивающейся крышкой для фиксации пробки на флаконе. Приложение БПрибор для анализа равновесной паровой фазы: 1 - термометр; 2 - накидная гайка; 3 - шприц; 4 -
резиновая мембрана; Приложение ВУстановка для перегонки с водяным паром
|