4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств
действующих веществ пестицидов
в овощах, цитрусовых, плодовых,
ягодах и орехах

Сборник методических указаний
по методам контроля
МУК 4.1.2986-12; 4.1.2989-12; 4.1.2993-12;
4.1.2996-12; 4.1.3006-12

Москва 2012

1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22.12.2012 № 2).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы но надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 19 марта 2012 г.

3. Введены в действие с момента утверждения.

4. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

 

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств ципродинила
в томатах методом капиллярной газожидкостной
хроматографии

Свидетельство о метрологической аттестации от 16.08.2011 № 0094.02.08.11.

Введение

Ципродинил - системный фунгицид из класса анилинопиримидинов. Эффективен против возбудителей парши, альтернариоза, мучнистой росы, кластероспориоза, коккомикоза, плодовой гнили, монилиального ожога на зерновых злаках, винограде, семечковых и косточковых культурах, землянике, овощных и декоративных культурах. Подавляет рост мицелия различных патогенов, в том числе устойчивых к фунгицидам из групп триазолов, карбаматов, имидазолов, стробилуринов и др. Хорошо проникает в растения через листья и передвигается преимущественно по ксилеме.

Применяется в России в качестве фунгицида для борьбы с болезнями семечковых и косточковых плодовых культур при норме расхода от 150 до 260 г д.в./га и двукратной обработке за сезон.

1. Общие положения

Настоящий документ устанавливает процедуру измерений массовой концентрации ципродинила в томатах в диапазоне 0,5 - 5,0 мг/кг методом капиллярной газожидкостной хроматографии.

Название вещества по ИСО: ципродинил.

Название вещества по ИЮПАК: 4-циклопропил-6-метил-N-фенил-пиримидин-2-амин.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₁₄H₁₅N₃.

Молекулярная масса: 225,3.

Кремовое кристаллическое вещество со слабым запахом. Температура плавления: 75,9 °С. Давление паров при 25 °С: 5,1×10^-4 Па (модификация А) и 4,7×10^-1 Па (модификация В). Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_OW log P = 3,9 (рН 5), 4,0 (рН 7 и 9). Растворимость (г/дм³) при 25 °С: ацетон - 610, толуол - 460, этанол - 160, гексан - 30, вода - 0,02 (рН 5). Величина рК_а 4,44.

Вещество устойчиво к гидролизу (DT₅₀ > 1 года при рН 4 - 9), фотолитически быстро разрушается в воде (DT₅₀ = 0,4 - 13,5 дней).

В биологически активных почвах в аэробных условиях ципродинил достаточно быстро исчезает, переходя главным образом в прочносвязанное состояние: DT₅₀ = 20 - 60 дней.

MRL ципродинила в томатах, установленный в странах ЕС, составляет 1,0 мг/кг.

2. Метрологические характеристики метода

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений не превышает значений, приведенных в табл. 1.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 1

Таблица 2

3. Метод измерений

Методика основана на экстракции ципродинила из томатов ацетоном, очистке экстракта, содержащего фунгицид, от коэкстрактивных компонентов перераспределением их в системе несмешивающихся растворителей с последующим измерением содержания ципродинила в очищенном экстракте методом капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) при программировании температуры с термоионным детектором (ТИД) и обработкой хроматограмм методом абсолютной калибровки. Идентификация вещества проводится по времени удерживания.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.

4. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы^*

4.1. Средства измерений

______________

^* Допускается применение средств измерений, вспомогательных устройств, материалов и реактивов иных производителей с аналогичными техническими и метрологическими характеристиками, приведенными в разделе 4.

4.2. Реактивы

4.3. Вспомогательные устройства, материалы

5. Требования безопасности

5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88.

5.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83.

5.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ Р 12.1.019-2009 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.

6. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

7. Требования к условиям измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия.

7.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу

7.2. Условия хроматографического анализа

8. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.

8.1. Очистка органических растворителей

8.1.1. Очистка н-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом. Срок хранения - 1 неделя.

8.1.2. Очистка ацетона

Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 дм³ ацетона 10 г KMnO₄ и 2 г К₂СО₃). Срок хранения - 1 неделя.

8.1.3. Очистка этилацетата

Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5 %.

Навеску (5 ± 0,1) г натрия углекислого в конической колбе растворяют в (40 - 60) см³ дистиллированной воды. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Срок хранения раствора - 1 неделя.

Этилацетат промывают последовательно раствором натрия углекислого с массовой долей 5 %, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют. Срок хранения - 1 неделя.

8.2. Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки

Капиллярную кварцевую колонку VF-5ms (типа SE-52) устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 280 °С и скорости газа-носителя 2 см³/мин в течение 8 - 10 ч.

8.3. Приготовление градуировочных растворов

8.3.1. Исходный градуировочный раствор ципродинила с массовой концентрацией 200 мкг/см³. В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают (0,010 ± 0,0001) г ципродинила, растворяют в 20 - 30 см³ этилацетата, доводят объем раствора этим же растворителем до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят при температуре не выше минус 18 °С в течение 3 месяцев.

8.3.2. Градуировочный раствор ципродинила с массовой концентрацией 10 мкг/см³ (раствор № 1). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 5 см³ исходного градуировочного раствора ципродинила с концентрацией 200 мкг/см³ (п. 8.3.1), разбавляют смесью гексан-этилацетат (8:2, по объему) до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов № 2 - 5.

При оценке полноты извлечения ципродинила для внесения в образцы используют ацетоновые растворы вещества с концентрациями 10 и 50 мкг/см³.

Градуировочный раствор № 1 и ацетоновые растворы ципродинила хранят при температуре не выше минус 18 °С в течение месяца.

8.3.3. Градуировочный раствор ципродинила с массовой концентрацией (0,1 - 1,0) мкг/см³ (растворы № 2 - 5). В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают 1, 2, 5 и 10 см³ градуировочного раствора № 1 с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 8.3.2), доводят объем раствора до метки смесью гексан-этилацетат (8:2, по объему), тщательно перемешивают, получают градуировочные растворы № 2 - 5 с массовой концентрацией ципродинила 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/см³ соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

8.4. Градуировка хроматографа

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мкВ) от концентрации ципродинила в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 градуировочным растворам (п. 8.3.3).

В инжектор хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора (п. 8.3.3) и анализируют при условиях хроматографирования по п. 7.2. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предел повторяемости r. По полученным данным строят градуировочную характеристику.

Градуировочную характеристику проверяют перед проведением измерения по анализу одного из градуировочных растворов. Если значение площади отличается более чем на 10 % от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

9. Отбор, хранение и подготовка проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (от 21.08.79 № 2051-79) и правилами, определенными ГОСТ 1725-85 «Томаты свежие. Требования при заготовках и поставках».

Образцы томатов хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 4 °С не более суток; для длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре не выше минус 18 °С. Перед проведением анализа плоды измельчают.

9.1. Экстракция и очистка

Навеску измельченного растительного материала массой 25 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 см³, добавляют 100 см³ ацетона и гомогенизируют 3 мин при 10000 об./мин. Гомогенат фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена. Осадок на фильтре промывают 50 см³ ацетона. Экстракт и промывную жидкость объединяют в мерном цилиндре, перемешивают, измеряют объем раствора. Отбирают ¹/₂₅ объема экстракта (эквивалентную 1 г образца), переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 см³ и добавляют 30 см³ дистиллированной воды. Раствор упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С до водной фазы объемом 15 - 20 см³. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³, круглодонную колбу обмывают 10 см³ дистиллированной воды, которые также вносят в воронку. В воронку приливают 30 см³ смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему) и содержимое интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз верхний органический слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 см³. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 20 см³ смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему). Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток экстракта томатов растворяют в 5 см³ смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, и анализируют на содержание ципродинила по п. 10.

10. Выполнение измерений

10.1. В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ очищенного экстракта анализируемой пробы (п. 9.1), анализируют при условиях п. 7.2 и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.

10.2. Для каждого образца томатов повторяют операции по пп. 9.1 и 10.1.

11. Обработка результатов измерений

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программа сбора и обработки хроматографической информации «Galaxie» версия 1.9.3.2.

Альтернативная обработка результатов

Содержание ципродинила рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

 где

Х - содержание ципродинила в пробе, мг/кг;

H₁ - площадь пика образца, мкВ;

H₀ - площадь пика стандарта, мкВ;

А - концентрация стандартного раствора ципродинила, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

т - масса анализируемой части образца, соответствующая доле экстракта, использованной для очистки и последующего хроматографического определения, г.

12. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

 где                                                  (1)

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8σ_r.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

13. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

 мг/кг, при вероятности Р = 0,95, где

 - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

 где

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае, если полученный результат измерений ниже нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее 0,5 мг/кг»^*.

______________

^* - 0,5 мг/кг - предел обнаружения ципродинила в анализируемом объекте.

14. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

14.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

14.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

 где

 - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

Δ_л = ± 0,84Δ, где

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

 где

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

 где

, , С_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

|К_к| ≤ К,                                                                     (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

14.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предел воспроизводимости (R):

 где                                                 (3)

X₁, Х₂ - результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

15. Разработчики

Дубовая Л.В., Талалакина Т.Н., Макеев А.М. (ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии Россельхозакадемии).

Полнота определения ципродинила в модельной матрице (n = 5)