Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование 4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Определение
остаточных количеств Сборник
методических указаний Москва 2012 1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22.12.2012 № 2). 2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 19 марта 2012 г. 3. Введены в действие с момента утверждения. 4. Введены впервые. СОДЕРЖАНИЕ
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Определение остаточных количеств кломазона в капусте Методические
указания Свидетельство о метрологической аттестации от 23.09.2011 № 01.5.04.032/01.00043/2011. 1. Общие положенияНастоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в капусте массовой концентрации кломазона в диапазоне концентраций 0,01 - 1,0 мг/кг. Название вещества по ИСО: кломазон. Название вещества по ИЮПАК: 2-(2-хлоробензил)-4,4-диметил-1,2-оксазолидин-3-он. Структурная формула:
Эмпирическая формула: C12H14ClNO2. Молекулярная масса: 239,7. Химически чистый кломазон представляет собой вязкую светло-коричневую жидкость. Плотность - 1,192 при 20 °С. Давление паров при 25 °С - 19,2 мПа. Растворимость в воде - 1,1 г/л. Растворимость в органических растворителях: хорошо растворим в ацетоне, ацетонитриле, хлороформе, циклогексаноне, гексане, гептане, хлористом метилене, метаноле, диметилформамиде, толуоле, диоксане и других органических растворителях. Коэффициент распределения в системе октанол-вода при 20 °С lgP = 2,5. Кломазон устойчив при хранении. При комнатной температуре может храниться без потерь в течение года, при 50 °С в течение 3 месяцев. В водных растворах период полураспада при солнечном свете более 30 дней, в почве - 30 - 135 дней (в зависимости от почвенно-климатических условий). Краткая токсикологическая характеристика ЛД50 для крыс - 1369 - 2077 мг/кг. ЛД50 для мышей 2350 мг/кг. Гигиенические нормативы. МДУ кломазона в капусте не установлен. Область применения Селективный системный гербицид, используемый для борьбы со злаковыми и некоторыми двудольными сорными растениями на посевах сои, кукурузы, рапса, гороха и ряде овощных культур при довсходовом и послевсходовом внесении. Он хорошо проникает в растение через корни и листья и подавляет рост и развитие двудольных и злаковых сорняков. 2. Методика определения кломазона в капусте методом капиллярной газожидкостной хроматографии 2.1. Принцип метода Метод определения кломазона в капусте основан на экстракции пестицида органическим растворителем и очистке на патроне Диапак С. Количественное определение кломазона проводят методом газожидкостной хроматографии с капиллярной колонкой и использованием термоионного детектора. Идентификация кломазона проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки. 2.2. Метрологическая характеристика метода Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и 2. Таблица 1 Метрологическая характеристика метода
Таблица 2 Полнота извлечения кломазона, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для n = 20, Р = 0,95
2.3. Избирательность метода Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования. 3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы3.1. Средства измерений
Примечание. Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными характеристиками. 3.2. Реактивы
Примечание. Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных. 3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Примечание. Допускается использование другого вспомогательного оборудования иных производителей с аналогичными техническими характеристиками. 4. Требования безопасности4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф. 4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90. 4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), необходимо соблюдать «Правила устройства и безопасной эксплуатации стационарных компрессорных установок, воздухопроводов и газопроводов под давлением», ПБ-03-576-03. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор. 5. Требования к квалификации операторовИзмерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13. 6. Условия измеренийПри выполнении измерений выполняют следующие условия: · процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %; · выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору. 7. Отбор проб и хранениеОтбор проб капусты проводят в соответствии с ГОСТ 1724-85 «Капуста белокочанная свежая. Заготовка и поставка» или ГОСТ 7967-87 «Капуста краснокочанная свежая. Заготовка и поставка». Для длительного хранения аналитические пробы капусты помещают в герметично закрытый двойной полиэтиленовый пакет и хранят в морозильной камере с температурой -18 °С. 8. Подготовка к определению8.1. Кондиционирование колонки Капиллярную или насадочную колонку перед анализом кондиционируют в токе азота при температуре 250 °С до установления нулевой линии. 8.2. Подготовка и очистка реактивов и растворителей Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 см3 растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С до объема 1,0 см3 и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с типовыми методиками. 8.3. Приготовление элюента № 1 Для приготовления раствора гексан/этилацетат в соотношении 9/1 в мерную колбу на 100 см3 вносят 10 см3 этилацетата и доводят до метки гексаном. 8.4. Приготовление стандартного и градуировочных растворов 8.4.1. Основной раствор с концентрацией 100 мкг/см3. Точную навеску кломазона (10 ± 0,1) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в гексане и доводят объем до метки гексаном. Градуировочные растворы кломазона с концентрациями 10,0, 5,0, 1,0, 0,2 и 0,1 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления основного раствора, используя гексан. 8.4.2. Раствор № 1 с концентрацией кломазона 10 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 1 см3 основного раствора и доводят объем до метки гексаном. 8.4.3. Раствор № 2 с концентрацией кломазона 5 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки гексаном. 8.4.4. Раствор № 3 с концентрацией кломазона 1 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки гексаном. 8.4.5. Раствор № 4 с концентрацией кломазона 0,2 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2 см3 раствора № 3 и доводят объем до метки гексаном. 8.4.6. Раствор № 5 с концентрацией кломазона 0,1 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора № 3 и доводят объем до метки гексаном. Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток. Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют основной раствор кломазона, разбавленный гексаном до соответствующей концентрации. 8.5. Построение градуированного графика Для построения градуировочного графика в хроматограф вводят по 1 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты (площади) пика от концентрации кломазона в градуировочном растворе (мкг/см3). Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента. Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия: где С - аттестованное значение массовой концентрации кломазона в градуировочном растворе; Ск - результат контрольного измерения массовой концентрации кломазона в градуировочном растворе; λконтр. - норматив контроля градуировочного коэффициента, % (λконтр. = 10 % при Р = 0,95). 8.6. Проверка хроматографического поведения кломазона на патронах Диапак С Перед употреблением патрон промывают 10 - 15 см3 гексана. Затем в патрон вносят 3 см3 градуировочного раствора кломазона № 3 (1 мкг/см3 кломазона в гексане) и промывают 5 см3 гексана. Элюат отбрасывают. Для определения фракции, содержащей кломазон, используют элюент № 1 (гексан/этилацетат - 9/1 по объему). В патрон вносят 6 см элюента № 1 и отбирают фракции элюата по 1 см3 в мерные пробирки на 5 см3. Элюаты выпаривают досуха с помощью установки для упаривания растворителей в токе азота. Сухие остатки растворяют в 1 см3 гексана и последовательно вводят в хроматограф. Фракции, содержащие кломазон, объединяют. 8.7. Подготовка приборов и средств измерения Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводятся в соответствии с требованиями технической документации. 9. Проведение определения9.1. Экстракция кломазона из капусты Капусту измельчают, берут навеску (10 ± 0,1) г, помещают в коническую колбу на 250 см3, проводят экстракцию 70 см3 гексана на ультразвуковой бане в течение 10 мин, экстракцию повторяют дважды порциями по 40 см3. Объединенный экстракт фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» и упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С до объема 1 - 2 см3. Дальнейшую очистку проводят на патронах Диапак С по п. 9.2. 9.2. Очистка экстрактов на патронах Диапак С Количественно переносят в патрон 1 - 2 см3 полученного по п. 9.1 экстракта и промывают 3 см3 гексана, фильтрат отбрасывают. Кломазон элюируют 4 см3 элюента № 1 (гексан/этилацетат - 9/1), собирая в колбу-концентратор на 10 см3, выпаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см3 гексана и хроматографируют. 9.3. Условия хроматографирования Хроматограф газовый «Кристалл 2000М» с ДТИ. Колонка капиллярная кварцевая длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм с неподвижной фазой НР-35, толщина слоя 0,25 мкм. Температура колонки программируется от 170 °С (1 мин) до 250 °С (5 мин) со скоростью 25 °С/мин, температура испарителя 280 °С, детектора 380 °С. Расход газа-носителя (азот) через колонку Г1 - 3,8 см3/мин (давление на входе 100 кПа), Г2 - 22 см3/мин (сброс пробы), Г4 - 20 см3/мин (поддув ТИД), Г5 - 13,5 см3/мин (водород к ТИД), Г6 - 200 см3/мин (воздух к ТИД). Деление потока 1:1. Объем вводимой пробы - 1 мм3. Время удерживания кломазона 5 мин (35 ± 5) с. 10. Обработка результатов анализаКоличественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание кломазона в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле: где Н1 - высота (площадь) пика кломазона в стандартном растворе, мм (мв ∙ с); Н2 - высота (площадь) пика кломазона в анализируемой пробе, мм (мв ∙ с); V - объём экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3; Р - навеска анализируемого образца, г; С - концентрация кломазона в стандартном растворе, мкг/см3. Содержание остаточных количеств кломазона в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2 параллельных определений. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор кломазона 10 мкг/см3, разбавляют гексаном. 11. Проверка приемлемости результатов параллельных определенийЗа результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости: где (1) X1, Х2 - результаты параллельных определений, мг/кг; r - значение предела повторяемости (r = 2,8σr). При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ. 12. Оформление результатовРезультат анализа представляют в виде: мг/кг при вероятности Р = 0,95, где - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг; Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг; где δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %. В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения» (например: менее 0,01*, где * - 0,01 мг/кг - предел определения кломазона в капусте). 13. Контроль качества результатов измеренийОперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений». 13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. 13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок. Величина добавки Сд должна удовлетворять условию: Сд = Δл,Х + Δл,Х', где ± Δл,Х (± Δл,Х') - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг; при этом: Δл = ± 0,84Δ, где Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг: где δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %. Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле: Кк = Х' - Х - Сд, где Х', Х, Сд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг (мг/дм3). Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К). Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию |Кк| ≤ К, (2) процедуру анализа признают удовлетворительной. При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению. 13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости. Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R): где (3) X1 и X2 - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг (мг/дм3); R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %. 14. РазработчикиДолженко В.И., Цибульская И.А., Остроухова О.К. (ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений Россельхозакадемии, г. Санкт-Петербург). Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации № 01.5.04.032/01.00043/2011) и внесена в Федеральный реестр (ФР.1.31.2011.10797). |