Государственная система санитарно-эпидемиологического нормирования Российской Федерации 4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Фотометрическое измерение концентраций глюкозооксидазы в воздухе рабочей зоны МУК 4.1.0.358-96 Минздрав России Москва · 1999 1. Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочно безопасным уровням воздействия (ОБУВ) - санитарно-гигиеническим нормативам и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля. 2. Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны (выпуск 32) утверждены и. о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России - заместителем Главного государственного санитарного врача Российской Федерации 8 июня 1996 г. 3. Введены впервые. 4. Включенные в данный выпуск методики контроля разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.005-88 ССБТ «Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования», ГОСТа 12.1.016-79 ССБТ «Воздух рабочей зоны. Требования к методикам измерения концентраций вредных веществ», ГОСТа Р 1.5-92 п. 7.3, ГОСТа 8.101-90 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений». Методические указания одобрены комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Госкомсанэпиднадзора России и Проблемной комиссией «Научные основы гигиены труда и профпатологии». Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны (выпуск 32) предназначены для центров Госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также заинтересованных министерств и ведомств. Ответственный исполнитель: Г.А. Дьякова Исполнители: Г.А. Дьякова, Л.Г. Макеева, Е.М. Малинина, С.М. Попова, Н.С. Горячев, М.И. Аржанова, Т.В. Рязанцева, Е.Н. Грицун. УТВЕРЖДЕНО И. о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России - заместителем Главного государственного санитарного врача Российской Федерации Г.Г. Онищенко 8 июня 1996 г. МУК 4.1.0.358-96 Дата введения: с момента утверждения 4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Фотометрическое измерение концентраций глюкозооксидазы в воздухе рабочей зоны Ферментный препарат глюкозооксидазы (К. Ф. 1.1.3.4. b, a-глюкоза: О2-оксидо-редуктаза) М. м. 154000 Глюкозооксидаза представляет собой желтый кристаллический порошок. Оптимальные условия проявления ферментативной активности. Т - 30 - 35 °С; рН - 5,8 - 6,0. Хорошо растворим в воде. В воздухе находится в виде аэрозоля. Является малоопасным веществом, обладает умеренным кумулятивным и слабым раздражающим действием. ПДК в воздухе - 2,0 мг/м3. Характеристика метода Метод основан на реакции взаимодействия остаточных количеств пероксида водорода (после воздействия фермента на глюкозу) с молибдатом аммония и последующим фотометрическим измерением окрашенного продукта реакции при длине волны l = 415 нм. Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр. Нижний предел измерения в анализируемом объеме - 0,5 мкг. Нижний предел измерения в воздухе - 0,2 мг/м3 (при отборе 2,5 л воздуха). Диапазон измеряемых концентраций от 0,2 до 20 мг/м3. Измерению мешают: неорганические вещества, содержащие фосфор, а также азид, гидроксиламин, цианистый водород. Суммарная погрешность измерения не превышает ± 10 %. Время выполнения измерения, включая отбор проб - 50 мин. Приборы, аппаратура, посуда Фотоэлектроколориметр или спектрофотометр Весы лабораторные аналитические Фильтры «синяя лента» Фильтродержатели ТУ 95-72-05-77 Аспирационное устройство Пробирки, вместимостью 15 мл, с пришлифованной пробкой ГОСТ 10515-75 Пипетки, вместимостью 1, 2 и 5 мл ГОСТ 20292-74 Колбы мерные, вместимостью 50 и 100 мл ГОСТ 1770-74 Цилиндр измерительный, вместимостью 10 мл ГОСТ 23932-79 Бюксы ГОСТ 7148-70 Секундомер Реактивы, растворы, материалы Стандартный раствор глюкозооксидазы. 10 мг каждого стандартного образца препарата с различной активностью растворяют в 100 мл дистиллированной воды. При отсутствии набора стандартов глюкозооксидазы различной активности стандартные растворы соответствующей активности готовят из раствора фермента в 1000 единиц активности, разводя этот раствор в 200; 40; 20; 10; 5; 2,5; 2,0 раза. Для анализа берут по 0,1 мл каждого раствора, что соответствует 0,5; 2,5; 5,0; 10; 20; 40 и 50 ед. активности. Натрий-ацетатный буферный раствор готовят смешиванием 0,5 мл 1 н уксусной кислоты и 9,5 мл ацетата натрия - 1 г в 100 мл. Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72 Глюкоза, 33 %-ный раствор ГОСТ 6038-51 Кислота серная, 10 н раствор ГОСТ 4204-77 Молибдат аммония, 0,02 М раствор ГОСТ 3765-78 Фильтры «синяя лента» ТУ 6-09-1678-77 Отбор проб воздуха Воздух с объемным расходом 1 л/мин аспирируют через фильтр «синяя лента», закрепленный в фильтродержателе. Для измерения 1/2 ПДК достаточно отобрать 2,5 л воздуха. Пробы могут сохраняться в течение 7 дней в холодильнике. Подготовка к измерению Градуировочные растворы (устойчивы 2 часа) готовят согласно таблице. Таблица Шкала градуировочных растворов
Для построения градуировочного графика исходные растворы смешивают и прогревают 1 мин при 30 °С, затем добавляют 1 мл 33 %-ного раствора глюкозы и инкубируют 3 - 5 мин при 30 °С (рН 5,8). Реакцию останавливают внесением 1,0 мл 10 н серной кислоты, затем добавляют 1,0 мл 0,02 М раствора молибдата аммония. После каждого добавления растворы перемешивают. Через 20 мин измеряют оптическую плотность на фотоэлектроколориметре при длине волны 415 нм. Измерение оптической плотности растворов проводят в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм по отношению к раствору сравнения не содержащего глюкозооксидазу. Строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им концентрации препарата (в мкг) с известной активностью. Проверку градуировочного графика проводят 1 раз в месяц или в случае использования новой партии реактивов. Проведение измерения Фильтр с отобранной пробой переносят в бюкс, заливают 5 мл дистиллированной воды и оставляют на 10 мин, периодически перемешивая. Отжимают фильтр стеклянной палочкой, фильтрат переносят в пробирку, доводят объем до 5 мл. Полученный раствор прогревают при 30 °С в течение 1 мин. Затем добавляют 1 мл 33 %-ного раствора глюкозы и инкубируют 3 - 5 мин при 30 °С (рН 5,8). Останавливают реакцию внесением 1,0 мл 10 н серной кислоты. Затем добавляют 1,0 мл 0,02 М раствора молибдата аммония. После каждого добавления реактива следует хорошо перемешать смесь. Через 20 мин измеряют оптическую плотность полученного анализируемого раствора, по сравнению с контрольным раствором, которым является вытяжка с чистого фильтра, обработанная одновременно и аналогично пробе. Количественное определение концентрации глюкозооксидазы в анализируемой пробе проводят по предварительно построенному градуировочному графику. При определении активности глюкозооксидазы в присутствии каталазы, последнюю инактивируют. Для этого к 4,5 см3 испытуемого комплексного ферментного раствора, содержащего не более 50 ед/см3 каталазы, прибавляют 0,5 см3 1 н раствора муравьиной кислоты (в конечной концентрации 0,1 н) и определяют активность глюкозооксидазы описанным выше методом. Расчет концентрации Концентрацию вещества (С) в воздухе (мг/м3) вычисляют по формуле:
а - содержание глюкозооксидазы в анализируемом объеме пробы, мкг; V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. приложение 1). Методические указания разработаны Киевским госуниверситетом, Украина. Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и давление 760 мм рт. ст.) проводят по формуле:
Vt - объем воздуха, отобранный для анализа, л; Р - барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.); t - температура воздуха в месте отбора пробы, °С. Для удобства расчета V20 следует пользоваться таблицей коэффициентов (приложение 2). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить Vt на соответствующий коэффициент. Коэффициенты для приведения объема воздуха к стандартным условиям
Вещества, определяемые по ранее утвержденным методическим указаниям по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны
Рис. 1 Ловушка-концентратор. Общий вид Рис. 2 Ловушка-концентратор |