Государственное
санитарно-эпидемиологическое УТВЕРЖДЕНО Председатель Госкомсанэпиднадзора России Главный государственный санитарный врач Российской Федерации Е.Н. Беляев 8 июня 1996 г. МУК 4.1.0.442-96 Дата введения: с момента утверждения 4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Измерение концентраций метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоныМ. м. 171,15 Метронидазол - [1-(-оксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазол] - кристаллическое вещество белого цвета. Хорошо растворим в уксусной кислоте. Мало растворим в воде, этиловом и метиловом спиртах, хлороформе. Тпл - 160 - 161 °С. М. м. 127,10 2-метил-4(5)-нитроимидазол - кристаллическое вещество белого цвета. Мало растворим в воде, метиловом и этиловом спиртах. Умеренно растворим в изопропиловом спирте и дихлорэтане. Тплавл. - 250 - 253 °С. В воздухе находятся в виде аэрозолей. Обладают общетоксическим действием. ОБУВ в воздухе 1 мг/м3. Характеристика метода Определение основано на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора. Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр. Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме пробы (50 мкл) метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола - 0,05 мкг. Нижний предел измерения в воздухе метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола - 0,5 мг/м (при отборе 20 л воздуха). Диапазон измеряемых концентраций в воздухе метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола - от 0,5 до 8 мг/м3. Определению не мешает присутствие аденозинтрифосфата, 2-метилимидазола, мешает присутствие этадена. Суммарная погрешность измерения не превышает ± 20 %. Время выполнения измерения, включая отбор пробы, - около 40 мин. Приборы, аппаратура, посуда Микроколоночный жидкостной хроматограф «Милихром» или другие модели с УФ-детектором Хроматографическая колонка длиной 120 мм, внутренним диаметром 2 мм, заполненная сорбентом «Силасорб С18» с размером зерен 9,0 мкм (ЧСФР) Аспирационное устройство Фильтродержатель Микроскоп отсчетный типа МПБ-2 ТУ 3.3-824-78 Стеклянная ректификационная колонна длиной 550 мм, внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5 (или другая такого же типа) Колбы мерные, вместимостью 25, 100 мл и 1 л ГОСТ 1770-74 Пипетки, вместимостью 10 мл ГОСТ 20292-74 Пробирки с пришлифованными пробками, вместимостью 10 мл ГОСТ 10515-75 Реактивы, растворы и материалы Метронидазол, % чистоты согласно паспорту 2-метил-4(5)-нитроимидазол, % чистоты согласно паспорту Метанол (спирт метиловый) очищенный ТУ 2222-78Е Метанол очищенный получают из метанола путем ректификации. Ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5. Насадка - спиральки Левина из нержавеющей стали (2 ´ 2 ´ 0,2 мм). Основную фракцию отбирают при температуре 64,5 °С (атмосферное давление) в пределах колебаний ± 0,1 °С. Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный, Na2HPО4 12Н2О (динатрийфосфат) ТУ 4172-76 Калий фосфорнокислый однозамещенный КН2НРО4 (калий фосфат) ТУ 4198-75 0,067 М раствор динатрийфосфата готовят растворением 23,986 г натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного в воде в мерной колбе, вместимостью 1 л. 0,067 М раствор калийфосфата готовят растворением 9,078 г калия фосфорнокислого однозамещенного в воде в мерной колбе, вместимостью 1 л. 0,067 М фосфатный буфер (рН 6,4) готовят, смешивая 262 мл 0,067 М раствора динатрийфосфата и 738 мл 0,067 М раствора калийфосфата. 0,01 М фосфатный буфер (рН 6,4) готовят соответствующим разбавлением 0,067М фосфатного буфера (рН 6,4) дистиллированной водой. Фосфатный буфер устойчив при хранении в холодильнике в течение месяца. Элюент: 0,01 М фосфатный буфер (рН 6,4) - метанол (6:1) Стандартный раствор № 1 с концентрацией метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола по 100 мкг/мл каждого готовят растворением смеси 0,01 г метронидазола и 0,01 и 2-метил-4(5)-нитроимидазола в элюенте в мерной колбе, вместимостью 100 мл Стандартный раствор № 2 с концентрацией метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола по 20 мкг/мл каждый готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора № 1 элюентом. Растворы устойчивы в течение суток Фильтры АФА-ВП-10 ТУ 85-743-80 Отбор пробы воздуха Воздух с объемным расходом 5 л/мин аспирируют через фильтр типа АФА-ВП-10. Для определения 1/2 ОБУВ достаточно отобрать 20 л воздуха. Пробы можно хранить в закрытых сосудах в холодильнике в течение месяца. Подготовка к измерению Хроматографическая колонка промышленного изготовления. Инжектируют в хроматограф от 0,05 до 0,8 мкг метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола из стандартного раствора № 2. Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб: скорость подачи элюента (0,01 М фосфатный буфер (рН 6,4) - метанол, 6:1) 100 мкл/мин; слина волны УФ-детектора 310 нм; скорость движения диаграммной ленты 1,8 мм/мин; диапазон чувствительности детектора 0,4 - 0,8; диапазон измерения самопишущего потенциометра 100 мВ; максимальный объем вводимой пробы 50 мкл; время удерживания метронидазола 2-метил-4(5)-нитроимидазола 11 мин 48 с; 7 мин 15 с; элюирующий объем для метронидазола 2-метил-4(5)-нитроимидазола 1100 мкл; 730 мкл; эффективность колонки по метронидазолу 2-метил-4(5)-нитроимидазолу 1240 тт; 555 тт. На полученной хроматограмме измеряют площади пиков и строят градуировочные графики, выражающие зависимость площади пиков (мм2) от содержания метронидазола или 2-метил-4(5)-нитроимидазола в хроматографируемом объеме пробы (мкг) соответственно. Построение градуировочных графиков необходимо проводить не менее чем по 6 точкам, выполняя по 5 параллельных измерений для каждого инжектируемого объема. Проверку градуировочных графиков следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц. Проведение измерения Фильтр с отобранной пробой помещают в пробирку с пришлифованной крышкой, добавляют 10 мл элюента и оставляют на 15 мин при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Степень десорбции с фильтра составляет 97,5 %. Хроматографирование анализируемого раствора проводят в тех же условиях по отношению к тем же элюентам, что и при построении градуировочных графиков. Количественное определение содержания метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола в хроматографируемом объеме проводят по соответствующим предварительно построенным градуировочным графикам. Расчет концентрации Концентрацию метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола (С) в воздухе (мг/м3) вычисляют по формуле:
а - содержание метронидазола или 2-метил-4(5)-нитроимидазола в хроматографируемом объеме пробы, найденное по соответствующему градуировочному графику, мкг; б - объем пробы, взятой на хроматографирование, мл; в - общий объем анализируемого раствора, мл; V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. приложение 1). Методическиеуказания разработаны НИО «Экотокс», г. Москва. Приложение 1Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и давление 760 мм рт. ст.)проводят по формуле
Vt - объем воздуха, отобранный для анализа, л; Р - барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.); t - температура воздуха в месте отбора пробы, °С. Для удобства расчета V20 следует пользоваться таблицей коэффициентов (приложение 2). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить Vt на соответствующий коэффициент. Приложение 2Коэффициенты для приведения объема воздуха к стандартным условиям
Приложение 3
Рис. 1 Ловушка-концентратор. Общий вид.
Рис. 2 Ловушка-концентратор. Приложение 4Вещества, определяемые по ранее утвержденным методическим указаниям
|