4.1. Методы контроля. Химические факторы.

МЕТОДИКА ИЗМЕРЕНИЙ
МАССОВОЙ ДОЛИ 4-АМИНОБЕНЗОЙНОЙ КИСЛОТЫ
В ПРОБАХ ПОЧВЫ ФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

Методические указания по методам контроля
МУК 4.1.013-18

Регистрационный номер по Федеральному реестру в Федеральном
информационном фонде по обеспечению единства измерений ВНИИМС
ФР.1.31.2017.28327

Федеральное медико-биологическое агентство
Москва 2017

Предисловие

1. Методические указания разработаны Федеральным государственным унитарным предприятием «Научно-исследовательский институт гигиены, токсикологии и профпатологии» Федерального медико-биологического агентства» (ФГУП «НИИ ГТП» ФМБА России, г. Волгоград). Разработчики: Горкина И.К., Пухова С.Ю., Щербакова О.В.

2. Методика измерений массовой доли 4-аминобензойной кислоты в пробах почвы фотометрическим методом аттестована в соответствии с Федеральным законом от 26 июня 2008 года № 102-ФЗ «Об обеспечении единства измерений» и ГОСТ Р 8.563-2009 Федеральным государственным унитарным предприятием «Уральский научно-исследовательский институт метрологии», Государственным научным метрологическим центром Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии. Свидетельство об аттестации методики измерений № 222.0205/RA.RU.311866/2017.

3. Рекомендованы к утверждению подкомиссией по специальному нормированию Федерального медико-биологического агентства (протокол от 4 апреля 2018 г. № 03/2018).

4. Утверждены и введены в действие Заместителем руководителя ФМБА России, Главным государственным санитарным врачом по обслуживаемым организациям и обслуживаемым территориям В.В. Романовым 4 апреля 2018 г.

5. Введены впервые.

Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ
«О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения»

«Санитарно-эпидемиологические требования - обязательные требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания, условий деятельности юридических лиц и граждан, в том числе индивидуальных предпринимателей, используемых ими территорий, зданий, строений, сооружений, помещений, оборудования, транспортных средств, несоблюдение которых создаёт угрозу жизни или здоровью человека, угрозу возникновения и распространения заболеваний и которые устанавливаются государственными санитарно-эпидемиологическими правилами и гигиеническими нормативами (далее - санитарные правила), а в отношении безопасности продукции и связанных с требованиями к продукции процессов её производства, хранения, перевозки, реализации, эксплуатации, применения (использования) и утилизации, которые устанавливаются документами, принятыми в соответствии с международными договорами Российской Федерации, и техническими регламентами» (статья 1).

«Соблюдение санитарных правил является обязательным для граждан, индивидуальных предпринимателей и юридических лиц» (статья 39).

«За нарушение санитарного законодательства устанавливается дисциплинарная, административная и уголовная ответственность в соответствии с законодательством Российской Федерации» (статья 55).

СОДЕРЖАНИЕ

 

4.1. Методы контроля. Химические факторы

МЕТОДИКА ИЗМЕРЕНИЙ
МАССОВОЙ ДОЛИ 4-АМИНОБЕНЗОЙНОЙ КИСЛОТЫ
В ПРОБАХ ПОЧВЫ ФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

Методические указания по методам контроля
МУК 4.1.013-18

1. Назначение и область применения

Настоящий документ устанавливает методику измерений массовой доли 4-аминобензойной кислоты в пробах почвы фотометрическим методом в диапазоне измерений от 1,0 до 20,0 мг/кг.

Методика разработана и предназначена для специалистов промышленно-санитарных лабораторий и центров гигиены и эпидемиологии, осуществляющих санитарно-химический контроль загрязнения 4-аминобензойной кислотой почвы в районах производства и использования 4-аминобензойной кислоты.

Методика может быть использована в других аккредитованных лабораториях, специализирующихся на проведении аналогичных исследований, после подтверждения соответствия процедуры измерений при реализации методики установленным требованиям согласно Р 50.2.060-2008 [1].

4-АМИНОБЕНЗОЙНАЯ КИСЛОТА - аминокислота, производное бензойной кислоты.

Эмпирическая формула: C₇H₇NO₂.

Структурная формула:

Относительная молекулярная масса - 137,14 а.е.м.

Внешний вид - кристаллический порошок или паста белого, кремового или желтоватого цвета.

Температура плавления: 186 - 187 °С.

Растворимость в воде 0,3 г/100 г при 13 °С. Растворяется в этиловом спирте и этиловом эфире.

Стабильна при нормальных условиях. Проявляет реакционную способность при взаимодействии со щелочами и сильными кислотами [2].

Нижний предел измерений массовой доли 4-аминобензойной кислоты в пробах почвы составляет 1,0 мг/кг.

Диапазон измерений массовой доли 4-аминобензойной кислоты в пробах почвы составляет от 1,0 до 20,0 мг/кг.

Продолжительность анализа 3 часа 30 минут. При проведении серийных анализов время выполнения измерения одной пробы значительно сокращается.

2. Нормативные ссылки

В настоящей методике использованы ссылки на следующие нормативные документы:

Федеральный Закон Российской Федерации от 10.01.2002 г. № 7-ФЗ «Об охране окружающей среды».

Приказ Минздравсоцразвития России от 12.04.2011 № 302н «Об утверждении перечней вредных и (или) опасных производственных факторов и работ, при выполнении которых проводятся предварительные и периодические медицинские осмотры (обследования), и Порядка проведения предварительных и периодических осмотров (обследований) работников, занятых на тяжелых работах и на работах с вредными и (или) опасными условиями труда».

ГОСТ 6709-72. Вода дистиллированная. Технические условия.

ГОСТ 1770-74. Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия.

ГОСТ 61-75. Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия.

ГОСТ 21400-75. Стекло химико-лабораторное. Технические требования. Методы испытаний.

ГОСТ 3118-77. Реактивы. Кислота соляная. Технические условия.

ГОСТ 199-78. Реактивы. Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия.

ГОСТ 83-79. Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия.

ГОСТ 25336-82. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры.

ГОСТ 17.4.3.01-83. Охрана природы. Почва. Общие требования к отбору проб.

ГОСТ 12.4.009-83. Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание.

ГОСТ 14919-83. Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия.

ГОСТ 17.4.4.02-84. Охрана природы. Почва. Методы отбора и подготовки проб для химического, бактериологического, гельминтологического анализа.

ГОСТ 6613-86. Сетки проволочные тканые с квадратными ячейками. Технические условия.

ГОСТ 12.1.005-88. Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны.

ГОСТ 28311-89. Межгосударственный стандарт. Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний.

ГОСТ 12.1.004-91. Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования.

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81). Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования.

ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике.

ГОСТ Р 53228-2008. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания.

ГОСТ OIML R 111-1-2009. Государственная система обеспечения единства измерений. Гири классов точности Е₁, Е₂, F₁, F₂, М₁; М _{1 - 2}, М₂, М_{2 - 3} и М₃. Часть 1. Метрологические и технические требования.

ГОСТ Р 8.563-2009. Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений.

ГОСТ Р 12.1.019-2009. Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты.

ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009. Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий.

ГОСТ 5962-2013. Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия.

ГОСТ 12.0.004-2015. Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения.

Примечание - При пользовании настоящей методикой целесообразно проверить действие ссылочных стандартов и других документов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный документ заменён (изменен), то при пользовании настоящей методикой следует руководствоваться заменяющим (изменённым) документом. Если ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3. Требования к показателям точности измерений

3.1. Нормы погрешности измерений

В соответствии с «Перечнем измерений, относящихся к сфере государственного регулирования обеспечения единства измерений и выполняемых при осуществлении деятельности в области охраны окружающей среды и обязательных метрологических требований к ним, в том числе показателей точности» (утвержденным Приказом Минприроды России от 7 декабря 2012 года № 425) предельно допустимая погрешность измерений массовой доли органических и неорганических веществ в почвах δ_н = ± (5...80) %.

3.2. Приписанные характеристики погрешности измерений и ее составляющих

Методика измерений обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведённых в таблице 1.

Таблица 1 - Диапазон измерений, значение характеристики погрешности методики и ее составляющих

Значения показателя точности методики используют при:

- оформлении результатов измерений, выдаваемых лабораторией;

- оценке возможности использования результатов измерений при реализации методики измерений в конкретной лаборатории;

- проверке квалификации лаборатории.

__________

¹ значение среднеквадратического отклонения воспроизводимости установлено на основе результатов межлабораторного эксперимента (L = 2)

4. Требования к средствам измерений, вспомогательному оборудованию, реактивам и материалам

При выполнении измерений массовой доли 4-аминобензойной кислоты в пробах почвы применяют следующие средства измерений (СИ), вспомогательное оборудование, реактивы и материалы:

4.1. Требования к средствам измерений

1. Колориметр фотоэлектрический концентрационный КФК - 2МП, № 9301-83 в Госреестре СИ, предел допускаемой погрешности при измерении коэффициента пропускания ±1,0 %, с кюветами с толщиной поглощающего слоя 50 мм, ТУ 3-3.2164-89.

2. Весы лабораторные общего назначения утвержденного типа, класс точности - специальный (I), наибольший предел взвешивания 220 г, предел допускаемой погрешности ±0,5 мг, ГОСТ Р 53228-2008.

3. Набор гирь от 1 до 100 г, класс точности F1, ГОСТ OIML R 111-1-2009.

4. Дозатор ДПОП-1-10-100 № 43129-15 в Госреестре СИ, предел допускаемой погрешности для 100 мкл ± 2,0 %, для 10 мкл ± 3,0 %, ТУ 9443-009-33189998-2009.

5. Дозатор ДПОП-1-100-1000 № 43129-15 в Госреестре СИ, предел допускаемой погрешности для 1000 мкл ± 1,0 %, для 100 мкл ± 1,5 %, ТУ 9443-007-33189998-2007.

6. Дозатор ДПОП-1-500-5000 № 43129-15 в Госреестре СИ, предел допускаемой погрешности ±1,0 %, ТУ 9443-008-33189998-2009.

7. Колбы, цилиндры, ГОСТ 1770-74:

колба мерная 2а-25-2;

колба мерная 2а-50-2;

колба мерная 2-100-2;

цилиндр мерный 1-25-2;

цилиндр мерный 1-50-2.

8. Пипетка градуированная 1-2-2-2, предел допускаемой погрешности ±0,02 см³, ГОСТ 29227-91.

9. Пипетка градуированная 1-2-2-5, предел допускаемой погрешности ±0,05 см³, ГОСТ 29227-91.

10. Пипетка градуированная 1-2-2-25, предел допускаемой погрешности ±0,2 см³, ГОСТ 29227-91.

11. Секундомер СОП пр-2а-3-221 утвержденного типа, предел допускаемой погрешности ±0,4 сек., ТУ 25-1819.0021-90.

12. Термометр лабораторный утвержденного типа ТЛ-5 № 2 с пределами измерений от 0 °С до +105 °С, предел допускаемой погрешности ±0,5 °С, ТУ 25-2021.003-88.

4.2 Требования к вспомогательному оборудованию

1. Аппарат для дистилляции воды ДЭ-10, ТУ 64-1-308-84.

2. Центрифуга лабораторная ЦЛР-1 У 4.2, ТУ5.375-4215-77.

3. Баня водяная лабораторная многоместная.

4. Ультразвуковая ванна «Сапфир» УЗВ-2,8 ТТЦ.

5. Наконечники полипропиленовые для пипеточных дозаторов, импортные.

6. Колба К-1-100-29/32 ТХС, ГОСТ 25336-82.

7. Воронка В-56-80 ХС, ГОСТ 25336-82.

8. Стакан Н-1-100 ТХС, ГОСТ 25336-82.

9. Палочка стеклянная, ГОСТ 21400-75.

10. Сито почвенное с сеткой 1 мм, ГОСТ 6613-86.

11. Кюветы эмалированные.

12. Полипропиленовая центрифужная пробирка одноразовая с винтовой крышкой вместимостью 50 см³.

13. Стаканчик для взвешивания (бюкс) СВ-34/12, ГОСТ 25336-82.

14. Холодильник «Samsung» RB 38J786154 имп.

4.3. Требования к реактивам и материалам

1. 4-аминобензойная кислота с массовой долей основного вещества не менее 99,9 %, ТУ 6-36-04691277-17-96.

2. Кислота соляная, х.ч., ГОСТ 3118-77.

3. Натрий углекислый, х.ч., ГОСТ 83-79.

4. Кислота уксусная ледяная, х.ч., ГОСТ 61-75.

5. Кальций хлористый безводный, ч., ТУ 6-09-4711-81.

6. Натрия 1,2-нафтохинон-4-сульфонат, с массовой долей основного вещества не менее 98,0 %, CAS № 521-24-4.

7. Натрий уксуснокислый 3-водный, ч.д.а., ГОСТ 199-78.

8. Спирт этиловый, высшей очистки, ГОСТ 5962-2013.

9. Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-72.

10. Бумага фильтровальная «синяя лента», ТУ 2642-001-68085491-2011.

11. Модельный почвенный эталон № 1 [3].

Примечания

1. Допускается использование других средств измерений утвержденных типов и вспомогательного оборудования, с метрологическими и техническими характеристиками не хуже указанных. Допускается использование реактивов аналогичной или более высокой квалификации, изготовленных по другой нормативной документации, в том числе импортных.

2. Средства измерений должны быть поверены в установленном порядке.

3. При наличии стандартного образца утвержденного типа состава 4-аминобензойной кислоты с требуемыми характеристиками, доступного к свободному обращению на рынке, применяют соответствующий стандартный образец утвержденного типа вместо реактива (4-аминобензойной кислоты). Сведения об утвержденных типах стандартных образцов содержатся в Федеральном информационном фонде по обеспечению единства измерений.

5. Метод измерений

Метод измерений массовой доли 4-аминобензойной кислоты в пробах почвы основан на фотометрировании раствора, содержащего окрашенные продукты взаимодействия 4-аминобензойной кислоты с 1,2-нафтохинон-4-сульфокислотой в щелочной среде.

Измерения выполняют после экстракции 4-аминобензойной кислоты из пробы почвы горячей дистиллированной водой.

Раствор, содержащий продукты взаимодействия 4-аминобензойной кислоты с натрия 1,2-нафтохинон-4-сульфонатом в щелочной среде, фотометрируют при длине волны 490 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 50 мм.

Массовую долю 4-аминобензойной кислоты в пробе почвы рассчитывают с помощью градуировочного графика зависимости оптической плотности раствора от содержания в нем 4-аминобензойной кислоты (методом абсолютной градуировки).

6. Требования безопасности, охраны окружающей среды

При выполнении измерений массовой доли 4-аминобензойной кислоты в пробах почвы должны быть соблюдены требования инструкции по технике безопасности при работе с 4-аминобензойной кислотой и типовой инструкции по технике безопасности при работе в химической лаборатории.

К работе с 4-аминобензойной кислотой допускаются лица не моложе 18 лет.

Поступающие на работу, а также работающие с 4-аминобензойной кислотой должны проходить:

- предварительное обучение безопасным методам работы и правилам обращения с защитными средствами;

- специальный инструктаж по технике безопасности с соответствующей записью в установленном порядке согласно ГОСТ 12.0.004-2015;

- предварительные и периодические медицинские осмотры согласно приказу Минздравсоцразвития России от 12.04.2011 № 302н «Об учреждении перечня вредных и (или) опасных производственных факторов и работ, при выполнении которых проводятся предварительные и периодические медицинские осмотры (обследования)», и «Порядка проведения предварительных и периодических осмотров (обследований) работников, занятых на тяжелых работах и на работах с вредными и (или) опасными условиями труда».

Все образующиеся продукты в результате выполнения работ по данной методике (отработанные растворы, твёрдые отходы и пр.) утилизируются. Утилизацию растворов, твердых отходов и проб 4-аминобензойной кислоты после выполнения измерений проводят в соответствии с нормативным документом по утилизации растворов и твёрдых отходов, разработанным в организации.

При работе с электроустройствами соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ Р 12.1.019-2009 и руководством по эксплуатации приборов.

Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91, взрывобезопасности по ГОСТ 12.1.010-76 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают специалиста с высшим или средним специальным химическим образованием, имеющего допуск к работе по данной методике измерений.

8. Требования к условиям измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- температура воздуха	(20 ± 5) °С;
- атмосферное давление	84,0 - 106,7 кПа (630 - 800 мм рт.ст.);
- влажность воздуха	не более 80 % при температуре 25 °С;
- напряжение в сети	(220 ± 10) В;
- частота переменного тока	(50 ± 1) Гц.

9. Подготовка к выполнению измерений

При подготовке к выполнению измерений массовой доли 4-аминобензойной кислоты в пробах почвы проводят следующие работы:

9.1. Подготовка фотоэлектроколориметра

Подготовку фотоэлектроколориметра к работе осуществляют в соответствии с инструкцией по эксплуатации.

9.2. Приготовление растворов

9.2.1. Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации 0,05 моль/дм³

В мерную колбу вместимостью 100 см³ пипеточным дозатором вместимостью 100 - 1000 мкл помещают 0,420 см³ концентрированной соляной кислоты (плотность 1,19), доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Срок хранения - 1 день.

9.2.2. Приготовление раствора углекислого натрия молярной концентрации 0,05 моль/дм³

В мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят (0,53 ± 0,01) г углекислого натрия, мерным цилиндром вместимостью 25 см³ добавляют 25,0 см³ дистиллированной воды, полностью растворяют навеску, доводят объем раствора до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Срок хранения в емкости из полимерного материала при температуре 2 - 5 °С - 2 недели.

9.2.3. Приготовление раствора натрия 1,2-нафтохинон-4-сульфоната с массовой долей 0,5 %

Навеску натрия 1,2-нафтохинон-4-сульфоната массой (0,125 ± 0,001) г помещают в мерную колбу вместимостью 25 см³, мерным цилиндром вместимостью 25 см³ добавляют 10,0 см³ дистиллированной воды, полностью растворяют навеску, доводят объем раствора до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Раствор применяют свежеприготовленным.

9.2.4. Приготовление буферного раствора

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (2,50 ± 0,01) г натрия уксуснокислого, мерным цилиндром вместимостью 25 см³ добавляют 25,0 см³ ледяной уксусной кислоты, доводят объем раствора до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Срок хранения - 1 неделя.

9.3. Приготовление образцов для градуировки (ОГ)

9.3.1. Приготовление градуировочного раствора 4-аминобензойной кислоты с массовой концентрацией 1,0 мг/см³

В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают (50,0 ± 0,5) мг 4-аминобензойной кислоты, пипеткой вместимостью 5,0 см³ добавляют 5,0 см³ этилового спирта, тщательно растворяют навеску, доводят до метки этиловым спиртом и перемешивают.

Срок хранения при температуре 2 - 5 °С - 1 неделя.

9.3.2. Приготовление образцов для градуировки (ОГ) с массовой долей 4-аминобензойной кислоты 0; 1,0; 5,0; 10,0; 15,0; 20,0 мг/кг

Образцами для градуировки являются навески модельного почвенного эталона № 1 (МПЭ № 1) [3] с известными добавками 4-аминобензойной кислоты.

Для приготовления ОГ навески МПЭ № 1 массой (10,0 ± 0,1) г помещают в центрифужные пробирки из полипропилена вместимостью 50,0 см³ и согласно таблице 2 вносят раствор 4-аминобензойной кислоты с массовой концентрацией 1,0 мг/см³, приготовленный в соответствии с п. 9.3.1. Содержимое пробирок тщательно перемешивают при помощи стеклянных палочек, высушивают при комнатной температуре до полного удаления растворителя, и еще раз тщательно перемешивают.

Таблица 2 - Приготовление образцов для градуировки

Образцы для градуировки хранению не подлежат, используются сразу после приготовления.

9.4. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности анализируемого раствора от содержания в нем 4-аминобензойной кислоты, устанавливают с использованием шести ОГ, приготовленных в соответствии с п. 9.3.2.

9.4.1. В пробирки с ОГ, подготовленные в соответствии п. 9.3.2, мерным цилиндром вместимостью 50 см³ вносят по 30,0 см³ горячей (90 - 95 °С) дистиллированной воды и тщательно перемешивают содержимое при помощи стеклянных палочек. Затем пробирки с ОГ закрывают крышками и производят экстракцию 4-аминобензойной кислоты с использованием ультразвуковой ванны при температуре 60 °С в течение 15 минут.

После чего ОГ еще раз тщательно перемешивают встряхиванием, а затем центрифугируют со скоростью 3000 мин^-1 в течение 10 минут или до прозрачного водного слоя над осадком.

Полученные экстракты ОГ декантируют и количественно переносят в стаканчики вместимостью 100 см³.

Процедуру экстракции 4-аминобензойной кислоты дистиллированной водой повторяют еще один раз, полученные экстракты каждого ОГ объединяют.

Экстракты ОГ помещают на кипящую водяную баню и упаривают до объема 30 см³, добавляют по 0,10 - 0,15 г кальция хлористого безводного для осветления растворов и охлаждают до комнатной температуры.

9.4.2. Полученные экстракты ОГ количественно переносят в мерные колбы вместимостью 50,0 см³ через воронки с фильтром «синяя лента», фильтры промывают 5,0 см³ дистиллированной воды и удаляют. Затем градуированными пипетками вместимостью 5 см³ в каждый ОГ добавляют по 3,0 см³ раствора соляной кислоты молярной концентрации 0,05 моль/дм³, приготовленного в соответствии с п. 9.2.1, по 3,0 см³ раствора натрия углекислого молярной концентрации 0,05 моль/дм³, приготовленного в соответствии с п. 9.2.2, и по 2,0 см³ раствора натрия 1,2-нафтохинон-4-сульфоната с массовой долей 0,5 %, приготовленного в соответствии с п. 9.2.3. После добавления каждого раствора содержимое колб тщательно перемешивают вращательными движениями.

Через 30 минут в колбы с ОГ пипеткой вместимостью 2 см³ вносят по 2,0 см³ буферного раствора, приготовленного в соответствии с п. 9.2.4, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

9.4.3. Через 5 минут измеряют оптическую плотность полученных растворов в кюветах с толщиной поглощающего слоя 50 мм при длине волны 490 нм по отношению к ОГ № 1.

От каждого ОГ получают по два аналитических сигнала, значения аналитических сигналов по каждому ОГ усредняют и по усредненным данным строят градуировочный график, выражающий зависимость оптической плотности растворов от содержания 4-аминобензойной кислоты.

9.4.4. По результатам измерений, полученным в соответствии с требованиями п.п. 9.4.1 - 9.4.3, устанавливают зависимость усредненной оптической плотности раствора от массовой доли 4-аминобензойной кислоты в ОГ (мг/кг).

9.4.5. Градуировочный график должен быть линейным. Проверку линейности следует проводить по действующим нормативным документам (НД), регламентирующим установление градуировочных характеристик средств измерений [4].

9.5. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Для настоящей методики процедура оперативного контроля точности практически полностью совпадает с процедурой контроля стабильности градуировочной характеристики. При удовлетворительных результатах контроля точности, градуировочная характеристика признается стабильной, поэтому контроль стабильности градуировочной характеристики не проводят.

9.6. Отбор и хранение проб

Отбор проб почвы производится в соответствии с ГОСТ 17.4.3.01-83 и ГОСТ 17.4.4.02-84. Отобранную пробу, в количестве не менее 500 г, упаковывают в полиэтиленовый пакет или герметично закрывающуюся стеклянную банку.

Срок хранения пробы - 1 месяц.

9.7. Подготовка проб

9.7.1. Пробу почвы подготавливают к проведению измерений в соответствии с требованиями ГОСТ 17.4.4.02-84.

9.7.2. Навеску пробы воздушно-сухой почвы массой (10,0 ± 0,1) г, подготовленной в соответствии с п. 9.7.1, помещают в полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 50 см³ и производят все операции в соответствии с п.п. 9.4.1 и 9.4.2.

9.7.3. Аналогично готовят раствор «холостой» пробы, используя вместо исследуемой почвы контрольную воздушно-сухую почву, изначально не содержащую 4-аминобензойную кислоту, близкую по типу к анализируемой пробе.

Образец почвы отбирают в контрольном районе (не загрязненном 4-аминобензойной кислотой) из поверхностного слоя 0 - 20 см в количестве не менее 1,0 кг, сушат до постоянного веса в чистом хорошо проветриваемом помещении на эмалированном лотке и просеивают через сито с диаметром отверстий 1 мм, предварительно удалив включения (камни, корни растений, стекло и пр.).

Контрольную воздушно-сухую почву хранят в таре, закрытой крышкой.

Срок хранения не ограничен.

10. Порядок выполнения измерений

Через 5 минут раствор, подготовленный в соответствии с п. 9.7.2, дважды фотометрируют при длине волны 490 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 50 мм по отношению к «холостому» раствору, подготовленному в соответствии с п. 9.7.3. Полученные аналитические сигналы (значения оптической плотности) усредняют.

11. Обработка результатов измерений

11.1. Результат единичного анализа - массовую долю 4-аминобензойной кислоты (X, мг/кг) вычисляют по градуировочному графику, выражающему зависимость оптической плотности раствора от содержания 4-аминобензойной кислоты.

11.2. За результат измерений массовой доли 4-аминобензойной кислоты в анализируемой пробе почвы (X, мг/кг) принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных измерений X₁ и Х₂, полученных в условиях повторяемости:

(1)

для которых выполняется следующее условие:

(2)

где r_o - относительное значение предела повторяемости для двух результатов параллельных измерений, % (таблица 3).

При невыполнении условия (2) необходимо дополнительно получить еще два результата параллельных измерений. Если при этом расхождение (Х_mах - Х_min) результатов четырех параллельных измерений равно или меньше критического диапазона CR_0,95(4), выраженного в абсолютных единицах по формуле (3), то в качестве окончательного результата принимают среднее арифметическое значение результатов четырех параллельных измерений.

(3)

Значение критического диапазона для четырех результатов параллельных определений в относительных единицах (CR_0,95(4)_o, %) приведено в таблице 3.

Если расхождение (Х_mах - Х_min) больше CR_0,95(4), в качестве окончательного результата измерений может быть принята медиана четырех результатов параллельных измерений. Кроме того, целесообразно выяснить причины появления неприемлемых результатов параллельных измерений и устранить их.

Таблица 3 - Диапазон измерений, значения пределов повторяемости, воспроизводимости и критического диапазона при доверительной вероятности Р = 0,95

11.3. Расхождение между результатами измерений, полученными в двух лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости, выраженного в абсолютных единицах относительно среднего значения двух результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости. При выполнении этого условия приемлемы оба результата измерений и в качестве окончательного может быть использовано их общее среднее значение. Значения предела воспроизводимости в относительных единицах приведены в таблице 3.

При превышении предела воспроизводимости могут быть использованы методы оценки приемлемости результатов измерений согласно ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002, раздел 5 и МИ 2881-2004 [5].

12. Оформление результатов измерений

Результаты измерений регистрируют в протоколе испытаний, который оформляют в соответствии с ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009.

Результаты измерений массовой доли 4-аминобензойной кислоты в пробе почвы , мг/кг, представляют в виде (при подтвержденном в лаборатории соответствии аналитической процедуры требованиям настоящего документа):

(4)

где  - результат измерений массовой доли 4-аминобензойной кислоты, полученный в соответствии с процедурами разделов 10 и 11, мг/кг;

∆ - абсолютная погрешность измерений массовой доли 4-аминобензойной кислоты в почве, мг/кг, вычисляемая по формуле:

(5)

где δ - относительная погрешность измерений массовой доли 4-аминобензойной кислоты в почве, по таблице 1, %.

Примечание - Числовые значения результата измерений оканчиваются цифрой того же разряда, что и значение показателя точности методики измерений (абсолютной погрешности измерений массовой доли определяемого компонента, с числом значащих цифр не более двух).

Допустимо результат измерений представлять в виде:

(6)

при условии ∆_л < ∆, где ∆_л - значение показателя точности измерений (доверительные границы абсолютной погрешности измерений), установленное при реализации настоящей методики в лаборатории и обеспечиваемое контролем стабильности результатов измерений, мг/кг.

Примечание - При необходимости (в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002, раздел 5.2) для результата измерений  указывают количество параллельных определений и способ установления результата измерений.

13. Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории

13.1. Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории предусматривает:

- оперативный контроль исполнителем процедуры выполнения измерений;

- контроль стабильности результатов измерений (на основе контроля стабильности среднеквадратического отклонения повторяемости, среднеквадратического отклонения внутрилабораторной прецизионности, погрешности).

13.2. Оперативный контроль процедуры измерений проводят на основе контроля внутрилабораторной прецизионности и погрешности.

13.2.1. Контроль внутрилабораторной прецизионности осуществляют путем сравнения результатов измерений массовой доли 4-аминобензойной кислоты в пробах, полученных в условиях внутрилабораторной прецизионности. Расхождение между результатами измерений не должно превышать предела внутрилабораторной прецизионности, выраженного в единицах измеряемых содержаний.

(7)

где  - результаты измерений массовой доли 4-аминобензойной кислоты, полученные в условиях внутрилабораторной прецизионности, мг/кг;

 - среднее арифметическое значение результатов измерений массовой доли 4-аминобензойной кислоты, полученных в условиях внутрилабораторной прецизионности, мг/кг;

R_{л, о} - относительное значение предела внутрилабораторной прецизионности, %.

Значение R_{л, о} (%) может быть приведено в Протоколе установленных показателей качества результатов анализа при реализации методики измерений в лаборатории.

При невыполнении условия (7) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (7) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам и устраняют их.

13.2.2. Контроль погрешности с использованием образцов для контроля (ОК)

Образцами для контроля погрешности (ОК) являются навески МПЭ № 1, в которые вносят известные добавки 4-аминобензойной кислоты.

Для приготовления ОК навеску МПЭ № 1 массой (10,0 ± 0,1) г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку, вместимостью 50 см³, затем в соответствии с таблицей 4 вносят аликвоту раствора 4-аминобензойной кислоты с массовой концентрацией 1,0 мг/см³, приготовленного в соответствии с п. 9.3.1.

Измеряют массовую долю 4-аминобензойной кислоты в ОК в соответствии с п.п. 9.7.2, 9.7.3, 10, 11.

Таблица 4 - Приготовление образцов для контроля погрешности с использованием ОК

Контроль погрешности осуществляют путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры К_к с нормативом контроля К. Результат контрольной процедуры К_к рассчитывают по формуле:

(8)

где  - массовая доля 4-аминобензойной кислоты в ОК - среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми удовлетворяет условию (2), мг/кг;

С - массовая доля 4-аминобензойной кислоты в ОК, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

К = ∆л,

(9)

где ∆_л - абсолютное значение характеристики погрешности результатов измерений, соответствующее массовой доле 4-аминобензойной кислоты в ОК, мг/кг, рассчитанное по формуле:

∆л = 0,01 × δл × C,

(10)

где δ_л - относительное значение характеристики погрешности результатов измерений, соответствующее массовой доле 4-аминобензойной кислоты в ОК, %;

С - массовая доля 4-аминобензойной кислоты в ОК, мг/кг.

Значение δ_л (%) может быть приведено в Протоколе установленных показателей качества результатов анализа при реализации методики измерений в лаборатории.

Результат контрольной процедуры признают удовлетворительным, при выполнении условия:

(11)

При невыполнении условия (11) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (11) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

13.3. Периодичность контроля исполнителем процедуры выполнения измерений, а также реализуемые процедуры контроля стабильности результатов выполняемых измерений регламентируют во внутренних документах лаборатории.

14. Библиографические данные

1. Р 50.2.060-2008. Рекомендации по метрологии. Государственная система обеспечения единства измерений. Внедрение стандартизированных методик количественного химического анализа в лаборатории. Подтверждение соответствия установленным требованиям. М.: Стандартинформ, 2008 - 27 с.

2. ТУ 6-36-04691277-17-96. 4-аминобензойная кислота. Технические условия.

3. Методические рекомендации по гигиеническому обоснованию ПДК химических веществ в почве [Электронный ресурс]: утв. Минздравом СССР 05.08.1982 № 2609-82 (вместе с «Временными методическими указаниями по применению расчетного метода обоснования ориентировочных допустимых концентраций (ОДК) пестицидов в почве», утв. Минздравом СССР 14.01.1981 № 2283-81) - Доступ из справ.-правовой системы «Консультант Плюс».

4. РМГ 54-2002. Государственная система обеспечения единства измерений. Методика выполнения измерений с использованием стандартных образцов. Характеристики градуировочные средств измерений состава и свойств веществ и материалов. Москва: ИПК Издательство стандартов, 2004 - 11 с.

5. МИ 2881-2004. Государственная система обеспечения единства измерений. Методики количественного химического анализа. Процедуры проверки приемлемости результатов анализа. Екатеринбург: УНИИМ, 2004 - 17 с.