Государственное санитарно-эпидемиологическое
нормирование 4.2.
МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И Измерение концентраций штаммов Сборник методических указаний МУК 4.2.3255-14 Выпуск 1 Москва 2015 1. Разработаны и подготовлены ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова Минздрава России (д.б.н. Н.И. Шеина). 2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6.11.2014 № 2). 3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 30 декабря 2014 г. 4. Введены впервые. СОДЕРЖАНИЕ Введение Сборник методических указаний «Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в атмосферном воздухе населенных мест» (выпуск 1) разработан с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций микроорганизмов их предельно допустимым концентрациям (ПДК), что является обязательным при осуществлении санитарно-эпидемиологического контроля. Включенные в данный сборник методические указания по контролю биотехнологических штаммов в атмосферном воздухе населенных мест разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ» и Р 8.563-96 «Методики выполнения измерений». Методики выполнены с использованием современных и адекватных микробиологических методов исследования и позволяют контролировать концентрации биотехнологических штаммов микроорганизмов на уровне и ниже их ПДК в атмосферном воздухе населенных мест, установленных в гигиенических нормативах. Методические указания по измерению концентраций штаммов микроорганизмов в атмосферном воздухе населенных мест предназначены для лабораторий центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, санитарно-микробиологических лабораторий промышленных предприятий, а также для научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований, для осуществления контроля за содержанием штаммов в атмосферном воздухе населенных мест.
4.2.
МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И Микробиологическое измерение
концентрации Методические указания 1. Назначение и область применения1.1. Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода микробиологического количественного анализа концентрации L. xylanilyticus 5rb ВКПМ В-11685 в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 50 до 50000 клеток в 1 м3 воздуха. 1.2. Методические указания носят рекомендательный характер. 2. Биологическая характеристика штамма L.
xylanilyticus 5rb
|
Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5 - 790 мм рт. ст. и пределом допустимой погрешности ±2,5 мм рт. ст. |
ТУ 2504-1799-75 |
Весы лабораторные, аналитические, наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности ±0,2 мг |
|
Колбы мерные 2-100-2, 2-250-2, 2-1000-2 |
|
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см3 |
|
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25 и 50 см3 |
|
Термометр лабораторный шкальный, пределы измерения 0 - 55 °С |
ТУ 25-2021.003-88 |
Аспирационный аппарат и устройство для отбора проб воздуха |
|
Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
Шкаф сушильный стерилизационный, позволяющий поддерживать температуру (160 ± 5) °С |
ТУ 9452-010-00141798-02 |
Термостаты, позволяющие поддерживать рабочую температуру (28 ± 2) °С и (37 ± 2) °С |
ТУ 9452-002-00141798-97 |
Автоклав электрический |
ГОСТ 9586-75 |
Стерилизаторы паровые медицинские |
|
Дистиллятор |
ТУ 4952-007-33142130-2000 |
Облучатель бактерицидный настенный |
ТУ 9444-015-03965956-08 |
Холодильник бытовой |
|
Микроскоп биологический с иммерсионной системой |
|
Лупа с увеличением ×10 |
|
Пробирки типов П1, П2 |
|
Спиртовки лабораторные стеклянные |
|
Чашки биологические (Петри) или одноразовые из полимерных материалов |
|
Воронки конусные диаметром 40 - 45 мм |
|
Груша резиновая |
ТУ 9398-005-0576-9082-03 |
Петля бактериологическая |
|
Марля медицинская |
ГОСТ 9412-77 |
Вата медицинская гигроскопическая |
ГОСТ 25556-81 |
Бумага фильтровальная лабораторная |
Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
Агар микробиологический |
|
Вода дистиллированная |
ГОСТ 6709-90 |
Глюкоза |
|
Пептон сухой ферментативный |
|
Спирт этиловый технический |
|
Спирт этиловый ректификованный |
|
Натрий хлористый, хч |
|
Глюкозо-пептонная среда стандартная |
|
При выполнении измерений концентрации клеток в атмосферном воздухе населенных мест соблюдают следующие требования.
6.1. СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
6.2. СП 1.3.2518-09. Дополнения и изменения 1 к СП 1.3.2322-08.
6.3. Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.
6.4. Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
6.5. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.
К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.
Приготовление сред, подготовку к анализу проводят в следующих условиях:
- температура воздуха (20 ± 5) °С;
- атмосферное давление (760 ± 20) мм рт. ст.;
- влажность воздуха не более 80 %.
Для приготовления используют сухую готовую глюкозо-пептонную среду: 50,0 г порошка размешивают в 1000 см3 дистиллированной воды.
Можно использовать отдельные компоненты среды следующего состава: пептон - 20,0 г; глюкоза - 10,0 г; хлорид натрия - 5,0 г; агар-агар - 15,0 г. Сухие компоненты растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды и тщательно перемешивают.
Приготовленную среду разливают в стерильные колбы по 250 - 500 см3 и автоклавируют при 121 °С в течение 15 мин.
Готовые среды хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше 8 °С в течение 14 дней, не более.
Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ» и Р 8.563-96 «Методики выполнения измерений».
Для этого воздух аспирируют при помощи пробоотборника на поверхность плотной питательной среды в соответствии с технической документацией (инструкцией) на прибор. Время аспирации и объем отбираемого воздуха зависит от предполагаемой концентрации микроорганизма.
Аппарат перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают 96° этиловым спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенки крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо (количество питательной среды в чашки вносят в соответствии с инструкцией к прибору). После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.
При выполнении анализа воздуха прямым методом стерильную агаризованную среду (ГПА) расплавляют, остужают до 50 - 60 °С и разливают в чашки Петри.
Контроль чистоты розлива проводят в соответствии с п. 7.1.1 МУК 4.2.2316-08. Для этого чашки с застывшей средой помещают в термостат при температуре 37 °С не менее чем на 18 ч. Проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха. Разлитую в чашки питательную среду хранят при температуре (2 - 8) °С не более 10 дней.
После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат с температурой (28 ± 2) °С. Через 1 - 2 суток производят подсчет выросших колоний по культурально-морфологическим признакам (прямой метод).
Ростовые свойства используемой питательной среды должны быть проверены до проведения анализа воздуха в соответствии с требованиями к ростовым свойствам питательных сред (МУК 4.2.2316-08). Для этого эталонный музейный штамм L. xylanilyticus 5rb ВКПМ В-11685 высевается на 2 - 3 чашки используемой среды.
Лиофилизованную культуру музейного штамма необходимо использовать 2 - 3 пассажа во избежание потери им заданных ростовых свойств.
Расчет концентрации клеток производят по формуле:
К = (П×1000)/С×Т, кл/м3, где |
К - концентрация L. xylanilyticus 5rb ВКПМ В-11685 в воздухе, кл./м3;
П - количество типичных колоний, выросших на чашке Петри;
1000 - коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха;
С - скорость аспирации воздуха, л/мин;
Т - время аспирации, мин.
Результаты измерений оформляют протоколом по следующей форме.
Протокол № количественного микробиологического анализа штамма L.
xylanilyticus 5rb 1. Дата проведения анализа _________________________________________________ 2. Рабочее место (профессия работающего) ___________________________________ 3. Место отбора пробы (название и адрес организации, производство, технологическая стадия, точка отбора пробы) ___________________________________ 3. Вид пробоотборника ____________________________________________________ 4. Дата последней метрологической поверки оборудования для отбора проб ___________________________________________________________________________ 5. Питательная среда, время инкубации ______________________________________ 6. Результаты испытания ростовых свойств питательной среды __________________ 7. Количественная и качественная характеристика выросших колоний (количество типичных колоний) __________________________________________________________ 8. Результаты идентификации микроорганизмов L. xylanilyticus 5rb ВКПМ В-11685 (микроморфологические признаки) ____________________________________________ 9. Результаты расчёта концентрации штамма __________________________________ 10. Соотношение полученных результатов с уровнем ПДКа.в. ____________________ 11. Отбор пробы произведён (Ф. И. О., должность, дата, подпись) ___________________________________________________________________________ 12. Идентификация штамма и расчёт концентрации произведены (Ф. И. О., должность, дата, подпись) ____________________________________________________ |