СанПиН 42-123-4083-86 "Временные гигиенические нормативы и методы
определения (утв.
Главным государственным санитарным врачом СССР Вводятся на всей территории СССР с момента издания Настоящие правила разработаны и утверждены на основе Положения о государственном санитарном надзоре в СССР (п. 7а), утвержденного Постановлением Совета Министров СССР от 31.05.73 г., № 361. Нарушение санитарно-гигиенических и санитарно-противоэпидемических правил и норм влечет дисциплинарную, административную или уголовную ответственность в соответствии с законодательством Союза ССР и союзных республик (статья 18). Государственный санитарный надзор за соблюдением санитарно-гигиенических и санитарно-противоэпидемических правил и норм государственными органами, а также всеми предприятиями, учреждениями и организациями, должностными лицами и гражданами возлагается на органы и учреждения санитарно-эпидемиологической службы Министерства здравоохранения СССР и министерств здравоохранения союзных республик (ст. 19) (Основы законодательства Союза ССР и союзных республик о здравоохранении, утвержденные Законом СССР от 19 декабря 1969 г. и введенные в действие с 1 июля 1970 г.). В целях охраны здоровья населения СССР устанавливаются временные гигиенические нормативы и метод определения содержания гистамина в рыбопродуктах. Гистамин (β-имидазолэтиламин или 2-аминоэтилимидазол) является широко распространенным биогенным амином, повышенное накопление которого в некоторых продуктах питания при определенных условиях может служить причиной пищевых отравлений. Гистамин является естественной составной частью продуктов питания, так как в процессе жизнедеятельности он образуется в различных тканях животных. Естественное содержание гистамина невелико и не оказывает неблагоприятного воздействия на организм. Гистамин образуется в продуктах в результате декарбоксилирования гистидина при участии ферментов микрофлоры, развивающейся при нарушении условий хранения. Среди микробов, ответственных за процесс декарбоксилирования гистидина, отмечают многих представителей семейства Enterobacteriacea (Echerichia, Enterobacter, Schigella, Salmonella, Proteus) и некоторые виды, принадлежащие к Pseudomonas, Streptococcus, Lactobacillus, Clostridlum, Vibrio. Накопление гистамина в рыбе может происходить в период от вылова до замораживания, особенно, если рыба в этот период хранится без охлаждения. Возможно накопление гистамина в рыбе при нарушении цепи холодильного хранения и несоблюдении технологии оттаивания и сроков хранения перед термической обработкой. В этих случаях в мышечной ткани некоторых видов рыб, особенно тунцов, скумбрии и некоторых других может происходить накопление гистамина до токсических уровней. В подавляющем большинстве случаев зарегистрированные вспышки гистаминовых отравлений были обусловлены использованием рыбы из семейства скумбриевых, содержащей большое количество гистамина, и продуктов из нее. Скрытый период отравления рыбой с повышенным содержанием гистамина обычно составляет менее одного часа, но может колебаться в зависимости от индивидуальных различий от 5 минут до 5 часов. Симптомы гистаминовой интоксикации весьма характерны. Пострадавшие отмечают резкий или горький (перечный) вкус пищи, наблюдаются покраснение лица и шеи с чувством жара и общего дискомфорта, сильные головные боли, слезотечение, боли в глазах, отек слизистой оболочки носа. Иногда отмечаются нарушения сердечного ритма, жжение в полости рта и глотки, затруднение глотания. Появляются сыпь на лице и шее, зуд кожи. У части пострадавших отмечаются желудочно-кишечные расстройства, боли в животе, тошнота, понос. В тяжелых случаях наблюдаются шок, бронхоспазмы, удушье и расстройства дыхания. Предел переносимости гистамина для взрослого человека составляет 5 - 6 мг/кг веса тела. Токсическая доза находится в пределах > 100 - 1000 мг/кг продукта и высокотоксичная - свыше 1 г/кг. Временная предельно допустимая концентрация гистамина в рыбопродуктах установлена на уровне 100 мг/кг с учетом практики международного законодательства (Финляндия, Чехословакия, США, Швеция и др.). В случае обнаружения гистамина в рыбе, содержание которого превышает предельно допустимую концентрацию, ее следует направлять на рыбообрабатывающие предприятия для изготовления рыбопродукции, где по технологии предусматриваются разбавление (фаршевые изделия) или подсортировка с другими видами рыб (консервы). При этом среднее содержание гистамина в продуктах, поступающих для питания, не должно превышать 100 мг/кг массы рыбы. Метод определения содержания гистамина в рыбопродуктахВ основе метода определения гистамина лежит измерение интенсивной флуоресценции производного, полученного при взаимодействии гистамина с о-фталевым альдегидом. Предел обнаружения метода - 0,1 мг/кг, относительное стандартное отклонение - 0,20 - 0,30. Степень извлечения добавленного к образцу стандарта гистамина - 65 - 85 %. Продолжительность анализа - 3 ч. Метод включает следующие этапы: - подготовку образца к анализу; - экстракцию метанолом; - очистку экстракта с помощью ионообменной хроматографии; - построение калибровочной кривой; - количественное определение гистамина. Методические рекомендации предназначены для лабораторий институтов гигиенического профиля и санитарно-эпидемиологических станций для определения содержания гистамина в рыбопродуктах. Оборудование и материалы1. Мясорубка по ГОСТ 4025-83Е. 2. Микроразмельчитель тканей РТ-2 по МРТУ 64-1-1505-63. 3. Весы технические по ГОСТ 24104-80Е. 4. Весы аналитические по ГОСТ 24104-80Е. 5. Спектрофотометр СПЕКОЛ (Карл Цейсс ИЕНА) с измерительной приставкой для определения флуоресценции. Светофильтры: первичный λ = 365 нм, вторичный λ = 465 нм. Возможно использование отечественного флуориметра БИАН-130 (светофильтры: первичный λ = 365 нм, вторичный λ = 470 нм). 6. Баня водяная с нагревателем. 7. Термометр 0 - 100 °C по ГОСТ 2045-71. 8. Колонка хроматографическая стеклянная 60×30 мм. 9. Колбы конические плоскодонные на 50 мл с НШ 14,5, на 100 мл с НШ 29 по ГОСТ 23932-79Е. 10. Колбы мерные на 50, 100, 250 мл по ГОСТ 1770-74Е. 11. Дефлегматорная насадка по ГОСТ 23932-79Е. 12. Стаканы химические на 500 мл. 13. Цилиндры мерные на 50 мл по ГОСТ 1770-74Е. 14. Воронки химические диаметром 60 мм по ГОСТ 23932-79Е. 15. Пипетки на 2, 5, 10 мл по ГОСТ 20292-74Е. 16. Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026-76. 17. Ионообменная смола Анионит АРА-12п (Cl-форма; фракция 0,25 - 0,10 мм) по ТУ 6-09-10-818-73. Для перевода смолы в OH-форму 100 г ее помещают в химический стакан, заливают 150 мл 2 н. едкого натра, перемешивают и оставляют на 30 мин. Сливают жидкость и вновь добавляют щелочь. Повторяют процедуру промывания дважды. Тщательно отмывают смолу дистиллированной водой до pH 7 - 8. Смолу хранят под водой. После проведения анализа смолу регенерируют следующим образом: заливают 1 н соляной кислотой, выдерживают 10 - 15 минут, раствор сливают. Обработку смолы кислотой повторяют дважды. Промывают дистиллированной водой до нейтральной реакции и переводят смолу в OH-форму, как описано выше. 18. Фталевый альдегид "ч" по МРТУ 6-09-5387-68. 19. Соляная кислота "чда" по ГОСТ 3118-77. 20. Ортофосфорная кислота "ч" по ГОСТ 6552-80. 21. Натр едкий "чда" по ГОСТ 4328-77. 22. Метиловый спирт "хч" по ГОСТ 6995-77. 23. Гистамин или хлоргидрат гистамина. 24. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72. 1. Подготовка образца к анализу1.1. Отбор образцов для анализа и хранение ихОт правильности осуществления этого этапа контроля в значительной степени зависят достоверность полученных данных по содержанию в анализируемом продукте гистамина и объективность гигиенической оценки его. При исследовании рыб, продуктов из них, пищевых продуктов из морских животных эта задача является весьма важной и требует соответствующей предварительной подготовки. Как известно, отбор проб пищевых продуктов слагается из нескольких этапов: отбора транспортных упаковок, отбора пробы и навесок для анализа. Каждая из перечисленных операций должна производиться в строгом соответствии с требованиями ГОСТов на исследуемые продукты: ГОСТ 7631-73 "Рыба, продукты из рыбы, морских млекопитающих и беспозвоночных" (с. 12 - 17) и ГОСТ 8756-70 "Продукты пищевые консервированные" (с. 1 - 5). Отобранные в соответствии с указанным образцы рыбы, продуктов из рыб, морских млекопитающих и беспозвоночных, подлежащих исследованию, упаковывают каждый в отдельности в пергаментную бумагу или в целлофан, затем в плотную оберточную бумагу и перевязывают бечевкой, для этой цели можно использовать также чистые стеклянные банки с притертыми стеклянными или плотными корковыми пробками. Образцы доставляют в лабораторию сразу же после отбора, в случае длительной транспортировки их охлаждают до температуры +2 - 4 °C, используя для этой цели холодильники или соответствующие приспособления. К исследованию образцов следует приступить в день доставки их в лабораторию. При отсутствии такой возможности образцы должны храниться при температуре, предусмотренной для хранения данной продукции, не более 3-х суток со времени отбора среднего образца. 1.2. Подготовка образца к исследованиюРыбу, отобранную для исследования, размораживают, очищают от механических загрязнений и чешуи. Обмывание рыбы не допускается. Для исследования крупной рыбы берут только мясо без кожи и костей. Для этого от рыбы отделяют голову и плавники, разрезают тушку по брюшку и удаляют все внутренности; разрезают продольным разрезом по спинке и удаляют позвоночник и, по возможности, все ребра, а мясо вместе с подкожным жиром тщательно соскабливают с кожи. Мелкую рыбу исследуют целиком. При весе каждого неразделанного экземпляра рыбы свыше 500 г после разделки берут для дальнейшего измельчения только одну продольную половину рыбы. При весе одной продольной половины рыбы свыше 1 кг ее разрезают на поперечные куски шириной 2 - 4 см и берут для анализа мясо от половины всего числа кусков через один. Мелкую неразделанную рыбу или пробу мяса от крупной рыбы дважды пропускают, как можно быстрее, через мясорубку; фарш тщательно перемешивают и из разных мест отбирают навеску в соответствии с прописью избранного метода. При исследовании консервов из рыб или морских животных из содержимого всех банок, выделенных в качестве среднего образца, после определения соотношения составных частей (жидкой и твердой) готовят одну общую пробу. Специи (лук, перец и др.) должны быть удалены из рыбы. Твердую часть консервов быстро пропускают два раза через мясорубку, смешивают с жидкой частью и растирают по частям в фарфоровой ступке до состояния однородной массы. Консервы, имеющие заливку, рассол, можно измельчать на аппарате "Измельчитель тканей". Из подготовленной таким образом пробы отбирают навески для последующих определений. Средние образцы продукции сохраняются в холодильнике до конца анализа; в случае обнаружения гистамина в количестве выше установленной гигиенической нормы - до вручения результатов исследований в соответствующие учреждения и принятия необходимых профилактических мер. 2. ЭкстракцияНавеску 10 г (с точностью 0,01 г) приготовленного образца помещают в сосуд микроразмельчителя тканей, добавляют 25 мл метанола и перемешивают 5 минут Полученную смесь переносят в плоскодонную коническую колбу на 100 мл, ополаскивают сосуд смесителя 15 - 20 мл метанола, сливают в колбу, снабженную дефлегматором и нагревают на водяной бане до 60 °C 15 минут; затем охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через складчатый бумажный фильтр в мерную колбу на 50 мл. Осадок промывают метанолом и доводят до метки объем экстракта. Метанольный экстракт можно хранить в холодильнике несколько недель. 3. Очистка экстрактаВ стеклянную хроматографическую колонку (60×30 мм) заливают суспензию ионообменной смолы Анионит АРА-12п до образования столбика высотой 40 мм и промывают 20 мл дистиллированной воды. (Вода должна покрывать смолу постоянно). Наносят 5 мл метанольного экстракта, добавляют 5 мл 1 н соляной кислоты, пропускают через колонку и элюируют дистиллированной водой до получения 35 мл элюата. Элюат следует хранить в холодильнике. 4. Построение калибровочной кривойДля приготовления основного раствора, содержащего 10 мкг/мл гистамина, 2,5 мг гистамина растворяют в 0,1 н соляной кислоте в мерной колбе на 250 мл 1, 2 и 3 мл основного раствора помещают в мерные колбы на 100 мл, доводят 0,1 н соляной кислотой до метки и получают рабочие растворы с концентрациями 0,1 мкг/мл, 0,2 мкг/мл и 0,3 мкг/мл соответственно. Основной раствор гистамина хранят в холодильнике неделю, рабочие растворы готовятся ежедневно. 10 мл каждого рабочего раствора вносят в колбы на 50 мл, добавляют 10 мл 0,1 н соляной кислоты, 3 мм 1 н едкого натра и смешивают. При перемешивании вносят 1 мл 0,1 % метанольного раствора о-фталевого альдегида, через 4 минуты добавляют 3 мл 3,47 н фосфорной кислоты и оставляют на 1,5 часа при комнатной температуре. Измеряют интенсивность флуоресценции рабочих стандартных растворов гистамина при λвозбуждения = 365 нм, λэмиссии = 465 нм. На основании полученных данных строится калибровочная кривая зависимости интенсивности флуоресценции от концентрации гистамина в растворе. Каждое деление оси абсцисс соответствует 0,02 мкг гистамина в 1 мл раствора. 5. Количественное определение гистамина в рыбопродуктах10 мл элюата вносят в колбу на 50 мл, добавляют 10 мл 0,1 н соляной кислоты и перемешивают. Далее проводят процедуру, описанную в п. 4 "Построение калибровочной кривой". Если образцы содержат гистамина более 100 мг/кг рыбы, необходимо взять 1 мл элюата, добавить 10 мл 0,1 н соляной кислоты и далее повторить процедуру количественного определения гистамина. Для количественного определения содержания гистамина используется калибровочная кривая. Содержание гистамина в рыбе Г (в мг/кг) вычисляется по формуле:
где: С0 - концентрация гистамина в растворе образца, найденная по калибровочной кривой, мкг/мл; Р - навеска образца для анализа в г (10 г); А - объем метанольного экстракта в мл (50 мл); Б - количество метанольного экстракта, пропущенного через колонку в мл (5 мл); В - объем элюата в мл (35 мл); Ф - фактор разведения:
______________ * Данными нормативами рекомендуется пользоваться в случаях, когда имеются нарушения условий и сроков хранения рыбопродукции с целью профилактики пищевых отравлений гистаминной этиологии, а также в процессе расследования случаев пищевых отравлений. К настоящим СанПиН введено дополнение, утвержденное заместителем государственного санитарного врача СССР 31 марта 1987 г. № 4274-87. СОДЕРЖАНИЕ
|