Федеральная
служба по надзору в сфере защиты прав потребителей 4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Определение остаточных Сборник методических указаний 1. Разработаны Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Токсикология пестицидов и агрохимикатов» (Калинин В.А., Калинина Т.С., Рыбакова О.И., Калинин А.В.). 2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-гигиеническому нормированию Минздрава России (протокол № 1 от 31 марта 2005 г.). 3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 21 апреля 2005 г. 4. Введены в действие с 1 июля 2005 г. 5. Введены впервые. СОДЕРЖАНИЕ
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Определение остаточных количеств флутриафола Методические указания 1. Вводная частьДействующее вещество: флутриафол. Структурная формула: СА: (±)-α-(2-фторфенил)-α-(4-фторфенил)-1Н-1,2,4-триазол-1-этанол. Эмпирическая формула: C16H13F2N3O. Мол. масса: 301,3. Твердое белое кристаллическое вещество. Температура плавления: 130 °С. Давление паров при 20 °С 7,1×10-6 mPa. Коэффициент распределения н-октанол/вода: KowlogP = 2,3 (20 °С). Растворимость (20 °С) в воде 130 мг/л, хорошо растворим в ацетоне 190 г/л, дихлорметане 150 г/л, метаноле 69 г/л, слабо растворим в гексане 0,3 г/л. В почве период полураспада DT50 65 - 125 дней. Оральная токсичность (LD50) для крыс 1480 мг/кг. Гигиенические нормативы для флутриафола: МДУ (мг/кг) виноград - н.д., яблоки - 0,05*. Область применения: фунгицид широкого спектра действия для борьбы с болезнями листа и колоса зерновых культур, также применяется для защиты плодовых, зернобобовых и других культур. Используется для борьбы с почвенными, семенными и аэрогенными инфекциями. 2. Методика определения флутриафола в плодах
яблони,
|
Объект анализа |
Предел обнаружения, мг/кг |
Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг |
Среднее значение определения, % (n = 24) |
Стандартное отклонение S, % |
Доверительный интервал среднего, % n = 24, Р = 0,95 |
яблоня, плоды |
0,05 |
0,05 - 0,5 |
85,8 |
5,40 |
4,95 |
виноград, ягоды |
0,025 |
0,025 - 0,5 |
83,4 |
5,75 |
4,15 |
виноград, сок |
0,025 |
0,025 - 0,5 |
83,0 |
5,95 |
4,15 |
Флутриафол, аналитический стандарт |
|
Ацетон, осч |
ТУ 2633-039-4493179-00 |
Ацетон, чда |
|
Вода дистиллированная |
ГОСТ 7602-76 |
н-Гексан, хч |
ТУ 6-09-3375-78 |
Натрий серно-кислый безводный, чда |
|
Натрия хлорид, хч |
|
Стекловата |
|
Серная кислота ОСЧ 11-5 |
|
Флорисил 150 - 250 мкм (Merck, Германия) |
|
Хлористый метилен, чда |
ТУ-2631-020-11291058-96 |
Газовый хроматограф Кристалл 2000М или аналогичный с ДЭЗ |
|
Колонка кварцевая капиллярная 30 м × 0,32 мм с неподвижной фазой НР-1 (0,25 мкм) |
|
Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные |
ГОСТ 34104-80Е |
Весы технические ВЛКТ-500 |
ГОСТ 24104-80 |
Установка ультразвуковая «Серьга» |
ТУ 3.836.008 |
Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М или аналогичный |
ТУ 25-11-917-74 |
Микрошприц МШ-10, МШ-10М |
ТУ 2-833-106 |
Насос водоструйный |
МРТУ 42 861-64 |
Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС |
ГОСТ 10384-72 |
Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29-32 ТС |
ГОСТ 10384-72 |
Воронки лабораторные В-75-110 |
|
Воронки делительные на 500, 1000 мл ВД-3-500 |
ГОСТ 8613-75 |
Цилиндры мерные на 100 см3, 500 см3 |
ГОСТ 1774-74 |
Колбы мерные на 100 см3 |
|
Пипетки на 1, 2, 5, 10 см3 |
ГОСТ 22292-74 |
Стаканы химические |
|
Колонка стеклянная хроматографическая длиной 30 см, диаметром 10 мм |
|
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (от 21.08.79 № 2051-79).
Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют.
Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают на вакуумном ротационном испарителе до объема 1 мл и хроматографируют. При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.
Перед началом анализа колонку, не присоединяя к детектору, кондиционируют в токе инертного газа (азот) при температуре 250 °С в течение 8 - 10 часов.
Для приготовления стандартного раствора с концентрацией 100 мг/мл количественно переносят 20 мг аналитического стандарта флутриафола в мерную колбу на 200 мл и растворяют навеску в ацетоне. Из полученного раствора готовят градуировочные растворы с концентрациями 5, 10, 25, 50 мкг/мл методом последовательного разбавления ацетоном.
Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют соответствующий стандартный раствор флутриафола в ацетоне.
Для построения градуировочного графика зависимости высоты (площади) пика от концентрации флутриафола в растворе в хроматограф вводят по 1 мкл градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты, мм (площади, мВ⋅с) пика от концентрации флутриафола в градуировочном растворе (мкг/мл).
В нижнюю часть колонки помещают тампон из стекловаты, затем слой 0,5 см безводного сульфата натрия и заполняют через воронку суспензией 5 г флорисила в 25 мл гексана при открытом кране колонки. Затем вносят слой 1 см безводного сульфата натрия и подключают выход колонки к водоструйному насосу для уплотнения слоя сорбента. После этого колонку промывают 15 мл гексана, затем смесью гексан-ацетон в соотношении 2:3 и закрывают кран, когда уровень растворителя достигнет верхнего края сорбента. Колонка готова к работе.
В подготовленную колонку пипеткой вносят 1 мл стандартного раствора флутриафола и дают впитаться. После этого вносят 10 мл смеси гексан-ацетон (2:3), элюат отбрасывают. Элюирование флутриафола проводят 40 мл смеси гексан-ацетон (1:5), отбирая фракции по 5 мл, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют фракции, содержащие флутриафол, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют. Рассчитывают содержание флутриафола в элюате, определяют полноту извлечения препарата из колонки и необходимый для этого объем элюирующей смеси.
Примечание: профиль вымывания флутриафола может измениться при использовании флорисила другой партии.
Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.
2.6.1.1. Плоды яблони. Навеску измельченных плодов 50 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл и экстрагируют флутриафол 150 мл ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Надосадочную жидкость фильтруют через складчатый фильтр «красная лента» в делительную воронку объемом 1000 мл. Экстракцию повторяют дважды порциями по 100 мл ацетона. После третьей экстракции осадок переносят на фильтр, колбу ополаскивают 20 мл ацетона и вносят в делительную воронку через фильтр с осадком. К объединенному экстракту добавляют 100 мл дистиллированной воды и промывают 20 мл гексана, встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают и промывку повторяют дважды порциями по 20 мл гексана. Промытый гексаном водно-ацетоновый экстракт концентрируют на роторном испарителе до объема 130 - 150 мл и переносят в делительную воронку, ополаскивая концентратор. Переэкстрагируют флутриафол в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл, встряхивая воронку в течение 2 мин. Нижний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия, затем промывают осушитель 10 мл хлористого метилена. Объединенный дихлорметановый экстракт упаривают досуха и проводят очистку на колонке с флорисилом по п. 2.6.2.
2.6.1.2. Ягоды винограда. Навеску размолотых ягод 50 г помещают в коническую колбу объемом 500 мл и экстрагируют флутриафол 150 мл ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Экстракт фильтруют через складчатый фильтр «красная лента» в делительную воронку объемом 1000 мл. Экстракцию повторяют дважды порциями экстрагента по 150 мл, после чего остаток переносят на фильтр, колбу и осадок промывают 20 - 30 мл ацетона. К объединенному экстракту в делительную воронку добавляют 20 мл гексана и встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз 90 % нижнего водно-ацетонового слоя отделяют. После этого эмульсию пограничного слоя разбивают внесением в него малого количества хлористого натрия. Остатки водно-ацетонового слоя собирают, гексановый слой отбрасывают. Объединенный водно-ацетоновый экстракт упаривают на роторном испарителе до объема 150 - 180 мл и переносят в делительную воронку. Флутриафол переэкстрагируют в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл, встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. Нижние органические слои собирают, фильтруя через безводный сульфат натрия. Объединенный экстракт выпаривают досуха на роторном испарителе. Далее проводят очистку на колонке с флорисилом по п. 2.6.2.
2.6.1.3. Сок винограда. 50 мл сока помещают в делительную воронку объемом 500 мл, добавляют 50 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 1:9 и встряхивают в течение 2 - 3 мин. Гексановый слой отбрасывают. К собранному водно-ацетоновому слою добавляют 5 мл гексана и интенсивно встряхивают в делительной воронке. После полного разделения фаз собирают водно-ацетоновый слой, гексановый слой отбрасывают. Объединенный экстракт переносят в чистую делительную воронку, добавляют 25 - 30 мл дистиллированной воды и переэкстрагируют флутриафол в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл. Дихлорметановый экстракт фильтруют через безводный сульфат натрия и выпаривают досуха на роторном испарителе. Далее проводят очистку на колонке с флорисилом по п. 2.6.2.
Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси гексан-ацетон (3:2). Пипеткой количественно вносят анализируемую пробу в хроматографическую колонку. Колбу ополаскивают еще 2 мл той же смеси и раствор вносят в хроматографическую колонку, затем открывают кран и дают раствору впитаться в сорбент. После этого в колонку вносят 10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 2:3, элюат отбрасывают. Флутриафол элюируют 10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 1:5, элюат собирают и выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют.
Газовый хроматограф «Кристалл 2000М» с ДЭЗ или аналогичный. Колонка кварцевая капиллярная 30 м × 0,32 мм с неподвижной фазой НР-1 (0,25 мкм).
Температура колонки программируется от 200 °С (4 мин) до 220 °С со скоростью 10 °С/мин.
Температура испарителя 250 °С, детектора 280 °С.
Скорость газа-носителя (азот) через колонку 3 см3/мин.
Объем вводимой пробы 2 мкл. Время удерживания флутриафола 10 мин 29 ± 2 с.
Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание флутриафола в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
H1 - высота (площадь) пика флутриафола в стандартном растворе, мм (мВ⋅с);
H2 - высота (площадь) пика флутриафола в анализируемой пробе, мм (мВ⋅с);
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
Р - навеска анализируемого образца, г;
С - концентрация флутриафола в стандартном растворе, мкг/мл;
V1 и V2 - дозируемые в хроматограф объемы стандартного и анализируемого растворов, мкл.
Концентрацию флутриафола в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2 параллельных определений.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор флутриафола 50 мкг/мл, разбавляют.
При проведении работы необходимо соблюдать требования Инструкции «Основные правила безопасной работы в химической лаборатории», общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации газового хроматографа и электрооборудования до 400 В.
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-2003. «ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа».
Долженко В.И., Цибульская И.А., Карпова Л.М.
Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, г. Санкт-Петербург.