Государственное санитарно-эпидемиологическое
нормирование 4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Определение химических соединений и Сборник методических указаний Москва 2015 1. Сборник подготовлен творческим коллективом авторов в составе: д.б.н., проф. А.Г. Малышева (руководитель), к.б.н. А.А. Ермаков, В.А. Шохин (ФГБУ «Научно-исследовательский институт экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина» Минздрава России). 2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 3. Методические указания утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой. 4. Введены впервые. СОДЕРЖАНИЕ Введение Включенные в сборник 10 методических указаний по определению химических соединений в биологических средах предназначены для использования в химико-аналитических исследованиях при проведении биомониторинга состояния здоровья населения, для практического использования в рамках социально-гигиенического мониторинга на территориях с высокой антропогенной нагрузкой, а также могут быть использованы для диагностических целей в рамках осуществления государственного санитарного надзора, контроля, экспертизы, расследований. Методические указания предназначены для специалистов химико-аналитических лабораторий системы Роспотребнадзора, научно-исследовательских институтов, работающих в области экологии человека, гигиены окружающей среды и защиты прав потребителей. Методические указания, включенные в сборник, разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений», ГОСТ Р 1.5-92 «ГСС. Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов», МИ 2335-95 «Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа», МИ 2336-95 «Характеристики погрешности результатов количественного химического анализа. Алгоритм оценивания». Все методики измерения прошли метрологическую аттестацию в соответствии с правилами ПР 50.2.002-94 «ГСИ. Порядок осуществления государственного метрологического надзора за выпуском, состоянием и применением средств измерений, аттестованными методиками выполнения измерений, эталонами и соблюдением метрологических правил и норм». В методических указаниях, включенных в сборник, приведены методы определения 15 органических соединений и 15 тяжелых металлов и элементов в биологических средах, в том числе 9 веществ и 15 элементов - в крови, 3 вещества и 12 элементов - в моче и 5 веществ - в молоке. Определение токсичных веществ и элементов основано на использовании современных высокочувствительных методов физико-химического анализа - капиллярной газовой хроматографии и газохроматографическом анализе равновесного пара, высокоэффективной жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой. Методические указания одобрены и рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека и утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека - Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации.
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Измерение массовых концентраций 2,4-дихлорфенола Методические указания Свидетельство о метрологической аттестации № 88-16374-241-01.00076-2012 от 26.11.2013. 1. Назначение и область применения1.1. Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газовой хроматографии для измерения массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в пробах крови в диапазоне концентрации для 2,4-дихлорфенола от 0,05 до 0,8 мг/дм3 и для 2,4,6-трихлорфенола от 0,05 до 0,9 мг/дм3. 1.2. Методические указания по измерению массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в пробах крови предназначены для использования в санитарно-гигиенических, экологических, лечебных и научных организациях, осуществляющих деятельность в области профпатологии и экологии человека. 1.3. Методические указания носят рекомендательный характер. 2. Физико-химические и токсикологические свойства2,4-дихлорфенол - бесцветные игольчатые кристаллы. Относится к опасным веществам. 2,4,6-трихлорфенол - ромбические кристаллы. Относится к опасным веществам. 2,4-дихлорфенол и 2,4,6-трихлорфенол оказывают эмбриотоксическое, тератогенное и мутагенное действие, вызывают поражение верхних дыхательных путей, легких, печени, почек, миокарда, селезенки. 2,4-дихлорфенол
2,4,6-трихлорфенол
3. Метрологические характеристики методики
|
Объект измерения |
Диапазон измерений массовой концентрации мг/дм3 |
Показатель точности (границы относительной погрешности при вероятности, Р = 0,95), ±δ, % |
Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), σr, % |
Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), σR, % |
Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории), r, % |
2,4-дихлорфенол |
|||||
Кровь |
от 0,05 до 0,8 вкл. |
24 |
в |
12 |
17 |
2,4,6-трихлорфенол |
|||||
Кровь |
от 0,05 до 0,9 вкл. |
22 |
5 |
11 |
14 |
Значения показателя точности используют:
- при оформлении результатов измерений, выдаваемых лабораторией;
- при оценке деятельности лабораторий на качество проведения измерений;
- при оценке возможности использования результатов измерений при реализации методики измерений в конкретной лаборатории.
Выполнение измерений массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в пробе крови проводят методом капиллярной газовой хроматографии с использованием детектора электронного захвата и применением химической модификации. Методика модификации и количественного определения 2,4-дихлорфенола в крови основана на экстракционном концентрировании 2,4-дихлорфенола из крови методом жидкостной экстракции в кислой среде, бромировании органического экстракта, содержащего 2,4-дихлорфенол, бромной водой и проведении этерификации трифторуксусным ангидридом в среде пиридина.
Методика количественного определения 2,4,6-трихлорфенола в крови основана на экстракционном концентрировании 2,4,6-трихлорфенола из крови методом жидкостной экстракции в кислой среде и проведении этерификации в органическом экстракте трифторуксусным ангидридом при добавлении пиридина.
Определению не мешают хлороформ, тетрахлорметан и другие хлорфенолы в количествах, не превышающих установленную величину.
Длительность анализа, включая экстракцию, бромирование и этерификацию биопробы, - 3 часа.
Хроматограф газовый с детектором электронного захвата и капиллярной колонкой |
|
Термометр жидкостной стеклянный |
|
Секундомер 60-минутный счетчик с ценой деления 0,2 мин. Диапазон рабочих температур от -20 до +40 °С |
ТУ 25-1894.003-90 |
Микрошприцы, диапазон дозируемого объема 1 - 10 мкл с ценой деления 0,2 мкл, погрешность 1 % |
ТУ 2.833.106-2000 |
Весы лабораторные равноплечие 2-го класса точности; наибольший предел взвешивания 200 г, диапазон взвешивания по шкале мг от 0 до 100 мг, цена деления делительного устройства - 0,05 мг. Погрешность взвешивания по шкале мг ±0,15 мг |
|
Меры массы |
|
Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-1000-2 см3 |
|
Пипетки градуированные 1-го класса точности вместимостью 1-2-1-1, 1-2-1-2, 1-2-2-5 см3 |
|
Мерный стакан вместимостью 1 дм3 |
|
Воронка делительная |
|
Дозаторы жидкости механические с погрешностью ±0,1 мм3, объемом дозирования 1 - 5 см3, 100 - 1000 мм3, 20 - 200 мм3 с одноразовыми наконечниками |
Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная) |
ГОСТ 52501-05 |
Спирт этиловый ректифицированный |
|
Калий двухромовокислый, чда |
|
Серная кислота концентрированная, осч |
|
Щавелевая кислота, х |
|
Толуол, осч 22-5 |
ТУ 263106544493179-01 |
Трифторуксусный ангидрид |
|
Пиридин, чда |
|
Натрий сернисто-кислый, чда |
|
Натрий серно-кислый безводный, чда |
|
Калий бромистый, хч |
|
Бром, хч |
|
Стандартный образец 2,4-дихлорфенола высокой чистоты |
ГСО 7198-95 |
Стандартный образец 2,4,6-трихлорфенола высокой чистоты |
ГСО 7103-94 |
Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.
Хроматографическая капиллярная колонка из кварцевого стекла с внутренним диаметром 0,32 мм длиной 30 м и толщиной пленки 1,8 мкм |
|
Редуктор кислородный |
ТУ 3645-032-00220531-97 |
Сушильный шкаф, обеспечивающий нагрев до 150 °С с погрешностью ±5 °С |
ТУ 16.531.743-83 |
Центрифуга лабораторная медицинская с частотой вращения от 1000 до 8000 об./мин |
|
Азот газообразный |
|
Водород технический |
|
Бумага фильтровальная лабораторная |
|
Пробирки вакуумные для забора крови с напылением гепарина вместимостью 6 см3 |
|
Пробирки из полипропилена конические градуированные на 15 см3, ТС 15А |
|
Примечание. Допускается использование вспомогательных устройств и материалов аналогичного назначения, технические характеристики которых не уступают указанным.
6.1. При выполнении работ необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76.
6.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией и соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83.
6.3. При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09 и инструкцией по эксплуатации прибора.
6.4. При работе с сосудами, работающими под давлением, необходимо соблюдать правила их устройства и безопасной эксплуатации в соответствии с ПБ 03-576-03.
6.5. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать допустимых значений по ГОСТ 12.1.005-88, ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07.
6.6. Организуют обучение работающих безопасности труда по ГОСТ 12.0.004-90.
6.7. При работе с биологическими средами соблюдают санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.2322-08.
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения работ на газовом хроматографе.
При выполнении измерений в лаборатории соблюдают следующие условия:
- температура окружающего воздуха (20 ± 5) °С;
- атмосферное давление от 84,0 до 106,7 кПа (630 - 800 мм рт. ст.);
- относительная влажность воздуха от 30 до 80 %;
- напряжение в сети (220 ± 10) В;
- частота переменного тока (50 ± 10) Гц.
Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
При подготовке к выполнению измерений проводят следующие работы:
- подготовка стеклянной посуды;
- подготовка хроматографической системы;
- приготовление растворов для градуировки;
- построение градуировочной характеристики;
- отбор проб.
В термостойкий стакан вместимостью 1 дм3 помещают 25 г калия двухромовокислого, осторожно приливают по палочке частями, тщательно перемешивая, 1 дм3 концентрированной серной кислоты.
Используемую посуду необходимо замочить в свежеприготовленном 3 %-м растворе бихромата калия в серной кислоте, промыть проточной водопроводной водой, ополоснуть дистиллированной водой и высушить в сушильном шкафу при температуре 105 °С.
Подготовку хроматографа к работе осуществляют в соответствии с
инструкцией по эксплуатации хроматографа.
9.2.1. Подготовка хроматографической колонки.
Хроматографическую колонку перед эксплуатацией устанавливают в хроматограф и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (азота) с расходом 4 см3/мин при температуре 240 °С в течение 2 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору и проверяют стабильность нулевой линии при рабочей температуре термостата колонок. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.
9.2.2. Устанавливают режим работы газового хроматографа в соответствии со следующими условиями:
- температурный режим термостата колонки: 135 °С с выдержкой 10 мин, подъём со скоростью 10 °С/мин до 250 °С;
- режим испарителя: температура 260 °С;
- режим детектора: температура 280 °С;
- режим расхода газа-носителя (азота): 20 см3/мин;
- время удерживания:
°2,4-дихлорфенола: 7,08 ± 0,05 мин;
°2,4,6-трихлорфенола: 14,08 ± 0,02.
Записывают нулевую линию при установленных режимных параметрах. При отсутствии флуктуации приступают к работе.
9.3.1. Приготовление исходного раствора 2,4-дихлорфенола. Используется готовый стандартный образец 2,4-дихлорфенола высокой чистоты ГСО 7198-95. Масса ГСО в ампуле составляет не менее 0,1 г. В мерной пробирке объемом 10 см3 взвешивают 5 мг сухого вещества 2,4-дихлорфенола и добавляют пипеткой 10 см3 метанола. Массовая концентрация 2,4-дихлорфенола в исходном растворе составляет 500 мкг/см3. Срок хранения раствора в течение 30 дней.
9.3.2. Приготовление рабочего раствора 2,4-дихлорфенола. В мерную пробирку объемом 2 см3, содержащую толуол в объеме 0,5 см3, вводят дозатором 0,5 см3 исходного раствора 2,4-дихлорфенола. Массовая концентрация 2,4-дихлорфенола в рабочем растворе для градуировки составляет 0,25 мг/см3. Срок хранения раствора 5 часов.
9.3.3. Приготовление исходного раствора 2,4,6-трихлорфенола. Используется готовый стандартный образец 2,4,6-трихлорфенола высокой чистоты ГСО 7103-94. Масса ГСО в ампуле составляет не менее 0,1 г. В мерную колбу объемом 25 см3, вносят навеску 2,4,6-трихлорфенола массой 0,0221 г и заполняют колбу до метки толуолом. Массовая концентрация 2,4,6-трихлорфенола в исходном растворе составляет 0,884 мг/см3. Срок хранения раствора в течение 30 дней.
9.3.4. Приготовление рабочего раствора 2,4,6-трихлорфенола. В мерную пробирку объемом 2 см3, содержащую толуол в объеме 0,5 см3, вводят дозатором 0,5 см3 исходного раствора 2,4,6-трихлорфенола. Массовая концентрация 2,4,6-трихлорфенола в рабочем растворе для градуировки составляет 0,442 мг/см3. Срок хранения раствора 5 часов.
9.3.5. Приготовление 10 %-го раствора щавелевой кислоты. 10 г щавелевой кислоты растворяют в небольшом количестве бидистиллированной воды, количественно переносят в мерную колбу на 100 см3 и заполняют колбу до метки водой.
9.3.6. Приготовление раствора серной кислоты (1:3). В термостойкий химический стакан помещают 60 см3 бидистиллированной воды, при непрерывном помешивании приливают 20 см3 концентрированной серной кислоты. Раствор охлаждают. Срок хранения неограничен.
9.3.7. Приготовление 10 %-го раствора сернисто-кислого натрия. Растворяют 10 г сернисто-кислого натрия в небольшом количестве бидистиллированной воды, количественно переносят в мерную колбу на 100 см3 и заполняют колбу до метки водой. Срок хранения 1 месяц.
9.3.8. Приготовление раствора бромирующего реактива. Растворяют 20 г бромистого калия в небольшом количестве бидистиллированной воды, количественно переносят в мерную колбу на 100 см3 и заполняют колбу до метки водой. К полученному раствору приливают 0,5 см3 брома. Раствор хранят в темной склянке. Срок хранения 1 месяц.
9.3.9. Приготовление растворов 2,4-дихлорфенола для градуировки. В пробирку объемом 13,0 см3, содержащую 5,0 см3 бидистиллированной воды, вводят микрошприцем различные объемы рабочих растворов 2,4-дихлорфенола для градуировки согласно табл. 2. Каждая серия состоит из 5 растворов для градуировки.
Растворы для установления градуировочной характеристики
при определении концентраций 2,4-дихлорфенола
Номер рабочего раствора для градуировки |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
Объем рабочего раствора (с = 0,25 мг/см3), мм3 |
1 |
2 |
4 |
8 |
16 |
Массовая концентрация 2,4-дихлорфенола, мг/дм3 |
0,050 |
0,100 |
0,200 |
0,400 |
0,800 |
9.3.10. Приготовление растворов 2,4,6-трихлорфенола для градуировки. В пробирку объемом 13,0 см3, содержащую 5,0 см3 бидистилированной воды, вводят дозатором различные объемы рабочих растворов 2,4,6-трихлорфенола для градуировки согласно табл. 3. Каждая серия состоит из 5 растворов для градуировки.
Растворы для установления градуировочной характеристики
при определении концентраций 2,4,6-трихлорфенола
Номер рабочего раствора для градуировки |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
Объем рабочего раствора (с = 0,442 мг/см3), мм3 |
0,6 |
1 |
2 |
6 |
10 |
Массовая концентрация 2,4,6-трихлорфенола, мг/дм3 |
0,053 |
0,088 |
0,117 |
0,530 |
0,884 |
Перед приготовлением градуировочных растворов необходимо удостовериться, что применяемая кровь не содержит 2,4-дихлорфенол и 2,4,6-трихлорфенол.
Градуировочные характеристики устанавливают на градуировочных растворах 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола методом абсолютной градуировки. Приготовленные растворы хроматографируют на капиллярной колонке не менее 5 раз. На полученной хроматограмме определяют площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам измерений по 5 концентрациям для градуировки строят градуировочную характеристику. Она выражает зависимость площади пика исследуемых веществ на хроматограмме (мВ - при автоматическом обсчете с использованием программно-аппаратного комплекса) от содержания (мг/дм3).
2,4-дихлорфенол. В пробирку объемом 13,0 см3 помещают 5,0 см3 бидистиллированной воды и градуировочный раствор 2,4-дихлорфенола (табл. 2). Затем добавляют 2,5 см3 толуола и проводят экстракционное концентрирование в течение 5 мин. К полученному экстракту добавляют раствор бромирующего реактива V = 2 см3 и 0,4 см3 разбавленной серной кислоты (1:3) и бромируют в течение 5 мин. После завершения бромирования избыток брома нейтрализуют 0,6 см3 раствора сернистокислого натрия. Для отделения органического растворителя (толуол) экстракт центрифугируют в течение 2 - 3 мин при 8000 об./мин и затем сушат сульфатом натрия массой 0,5 г.
Превращение бромпроизводного в эфиры осуществляют путем ацетилирования с помощью трифторуксусного ангидрида (V = 0,1 см3) в среде пиридина (V = 0,1 см3) в органическом растворителе в течение 5 мин.
Полученный эфир (трифторацетата 2,4-дихлорфенол) в объеме 1 мм3 анализируют методом ГХ/ЭЗД. Процедуру повторяют аналогично для каждого градуировочного раствора. На полученной хроматограмме определяют площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам из 5 серий строят градуировочную характеристику.
2,4,6-трихлорфенол. В пробирку объемом 13,0 см3 помещают 5,0 см3 бидистиллированной воды и градуировочный раствор 2,4,6-трихлорфенола (табл. 3). Затем добавляют 2,5 см3 толуола и проводят экстракционное концентрирование в течение 5 мин.
Полученный экстракт центрифугируют в течение 2-3 мин при 8000 об./мин. и затем сушат сульфатом натрия массой 0,5 г. Превращение 2,4,6-трихлорфенола в простые эфиры осуществляют путем ацетилирования с помощью трифторуксусного ангидрида (V = 0,1 см3) в среде пиридина (V = 0,1 см3) в органическом растворителе в течение 5 мин.
Полученный эфир (2,4,6-трихлорфенилтрифторацетат) в объеме 1 мм3 анализируют методом ГХ/ЭЗД. Процедуру повторяют аналогично для каждого градуировочного раствора. На полученной хроматограмме определяют площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам из 5 серий строят градуировочную характеристику.
Градуировку проводят 1 раз в месяц и при смене реактивов.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Образцами для контроля стабильности являются градуировочные растворы, выбранные таким образом, чтобы массовая концентрация 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола соответствовала нижней, верхней границам и середине диапазона построения градуировочной характеристики. Градуировка признается стабильной при выполнении условия:
|Cm - C| ≤ 0,10⋅C, где |
(1) |
С - заданная массовая концентрация 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в градуировочном растворе;
Cm - результат измерения массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в образце для градуировки.
При невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики эксперимент повторяют с другим градуировочным раствором. При повторном невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики.
Отбор проб венозной крови объемом не менее 10 см3 производят в одноразовый шприц, оттуда переносят в пластмассовые пробирки с антикоагулянтом и закручивающимися крышками (использование резиновых крышек недопустимо). В качестве антикоагулянта используется гепарин (из расчета на 5 см3 крови - 0,05 см3 гепарина с концентрацией 5000 ЕД/см3). Анализ крови проводят в течение суток. Возможно хранение пробы крови в морозильной камере не более пяти дней.
2,4-дихлорфенол. Анализируемую пробу крови V = 5 см3 помещают в пробирку вместимостью 13,0 см , приливают 3,0 см3 бидистиллированной воды, 1 см3 10 %-го раствора щавелевой кислоты и 2,5 см3 толуола и проводят экстракционное концентрирование в течение 5 мин. К полученному экстракту добавляют 2 см3 раствора бромирующего реактива и 0,4 см3 разбавленной (1:3) серной кислоты и бромируют в течение 5 мин. После завершения бромирования избыток брома нейтрализуют 0,6 см3 раствора сернисто-кислого натрия.
Для отделения органического растворителя (толуол) экстракт центрифугируют в течении 2 - 3 мин при 8000 об./мин и затем сушат сульфатом натрия массой 0,5 г.
Превращение бромпроизводного в простые эфиры осуществляют путем ацетилирования с помощью трифторуксусного ангидрида (0,1 см3) в среде пиридина (0,1 см3) в органическом растворителе в течение 5 мин.
Полученный эфир (трифторацетата 2,4-дихлорфенол) в объеме 1 мм3 анализируют и проводят количественное определение анализируемого соединения в подготовленной пробе. Процедуру повторяют аналогично для второго образца и проводят выполнение измерений двух параллельных проб крови. Условия выполнения измерений аналогичны условиям при установлении градуировочной характеристики (п. 9.4).
2,4,6-трихлорфенол. Анализируемую пробу крови - 5 см3 помещают в пробирку вместимостью 13,0 см3, приливают 3,0 см3 бидистиллированной воды, 1 см3 10 %-го раствора щавелевой кислоты и проводят экстракционное концентрирование 2,5 см3 толуола в течение 5 мин.
Полученный экстракт цетрифугируют в течение 2 - 3 мин при 8000 об./мин и затем сушат сульфатом натрия массой 0,5 г. Превращение 2,4,6-трихлорфенола в простые эфиры осуществляют путем ацетилирования с помощью трифторуксусного ангидрида (0,1 см3) в среде пиридина (0,1 см3) в органическом растворителе в течение 5 мин.
Полученный эфир (2,4,6-трихлорфенилтрифторацетат) в объеме 1 мм3 анализируют и проводят количественное определение анализируемого соединения в подготовленной пробе. Процедуру повторяют аналогично для второго образца и проводят выполнение измерений двух параллельных проб крови. Условия выполнения измерений аналогичны условиям при установлении градуировочной характеристики (п. 9.4).
11.1. На хроматограмме рассчитывают площадь пика и по градуировочной характеристике определяют массовую концентрацию 2,4-дихлорфенола (С, мг/дм3) и 2,4,6-трихлорфенола (С, мг/дм3) в крови.
11.2. За окончательный результат измерения принимают результат среднего арифметического значения двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости C1, С2 (параллельных определений), для которых выполняется условие:
r - предел повторяемости. Значения предела повторяемости приведены в табл. 4.
При невыполнении условия (2) получают дополнительно еще два результата измерений. За результат измерений принимают среднее арифметическое четырех результатов измерений (C1, С2, С3, С4), полученных в условиях повторяемости, для которых выполняется условие:
CR0,95(4) - критический диапазон. Значения критического диапазона приведены в табл. 4;
Сmax,4 - наибольший результат измерений, полученный в условиях повторяемости;
Cmin,4 - наименьший результат измерений, полученный в условиях повторяемости.
При невыполнении условия (3) в качестве окончательного результата измерений принимают медиану четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений).
Дополнительно выявляют и устраняют причины, приводящие к невыполнению условий (1) и (2).
Значения пределов повторяемости, воспроизводимости и
критического
диапазона при доверительной вероятности Р = 0,95
Диапазон измерений, мг/дм3 |
Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории в условиях повторяемости), r, % |
Критический диапазон (относительное значение допускаемого расхождения между наибольшим и наименьшим из четырех результатов измерений, полученных в одной лаборатории в условиях повторяемости), СR0,95(4),% |
Предел воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), R,% |
2,4-дихлорфенол |
|||
От 0,05 до 0,8 вкл. |
17 |
23 |
34 |
2,4,6-трихлорфенол |
|||
От 0,05 до 0,9 вкл. |
14 |
19 |
31 |
Результат измерений представляют в виде мг/дм3, где - результат измерений массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола, полученный в соответствии с процедурами раздела 9.4, мг/дм3;
Δ - абсолютная характеристика погрешности измерений массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола, мг/дм3 при Р = 0,95, вычисляемое по формуле:
|
где δ - относительное значение характеристики погрешности измерений массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола, %.
13.1. Обеспечение достоверности измерений в пределах лаборатории организуют и проводят путем проведения оперативного контроля процедуры измерений и контроля стабильности результатов измерений в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6 и РМГ 76.
Периодичность получения результатов контрольных процедур и формы их регистрации приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.
13.2. Контроль процедуры измерений с использованием образцов для контроля.
Оперативный контроль процедуры измерений с использованием метода добавок проводят путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры Кк с нормативом контроля К.
Результат контрольной процедуры Кк рассчитывают по формуле:
|
- результат измерений массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в пробе с известной добавкой - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (1);
- результат измерений массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в исходной пробе - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (1);
Сд - величина добавки.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
|
- значения характеристики погрешности результатов измерений, установленные в лаборатории при реализации методики, соответствующие массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в пробе с известной добавкой и в исходной пробе соответственно.
Примечание. Допустимо характеристику погрешности результатов измерений при внедрении методики в лаборатории устанавливать на основе выражения: Δл = 0,84⋅Δ с последующим уточнением по мере накопления информации в процессе контроля стабильности результатов измерений.
Процедуру измерений признают удовлетворительной при выполнении условия:
При невыполнении условия (4) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (4) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
(4) |
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях внутрилабораторной прецизионности.
Образцами для проверки приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях внутрилабораторной прецизионности, являются образцы крови с внесенными в них добавками аттестованных растворов 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола, подготовленных в соответствии с пп. 9.3.1 - 9.3.5 и 9.3.10.
Проверку приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях внутрилабораторной прецизионности (в пределах одной лаборатории, разными операторами, в разное время), проводят по результатам измерений массовых концентраций 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в образцах крови с одинаковым содержанием 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола.
Результаты измерений признают приемлемыми при выполнении условия:
С1 и С2 - результаты измерений массовых концентраций 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола, полученные в условиях внутрилабораторной прецизионности, т.е. в одной лаборатории в разное время, разными операторами;
Rл - предел внутрилабораторной прецизионности, значения предела внутрилабораторной прецизионности приведены в табл. 5.
При невыполнении условия (5) процедуру повторяют. При повторном превышении предела внутрилабораторной прецизионности выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
Значения предела внутрилабораторной прецизионности
при доверительной вероятности Р = 0,95
Диапазон измерений, мг/дм3 |
Предел внутрилабораторной прецизионности (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории в разное время, разными операторами), Rл, % |
|
2,4-дихлорфенол |
От 0,05 до 0,80 вкл. |
22 |
|
2,4,6-трихлорфенол |
От 0,05 до 0,9 вкл. |
20 |
13.4. Проверка приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях воспроизводимости.
Образцами для проверки приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях воспроизводимости, являются образцы крови с внесенными в них добавками аттестованного раствора 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола, подготовленные в соответствии с пп. 9.3.1 - 9.3.5 и 9.3.10.
Проверку приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях воспроизводимости, проводят по результатам измерений массовых концентраций 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола из образцов крови (специально подготовленные образцы крови с внесенными добавками аттестованного раствора 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола) с одинаковым содержанием 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола.
Результаты измерений признают приемлемыми при выполнении условия:
С1 и С2 - результаты измерений массовых концентраций 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола;
R - предел воспроизводимости, значения предела воспроизводимости приведены в табл. 4.
При невыполнении условия (6) процедуру повторяют. При повторном превышении предела воспроизводимости выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.5. Оперативный контроль процедуры измерений, а также реализуемые процедуры контроля стабильности результатов выполняемых измерений приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.
Список нормативно-технических документов
1. ГОСТ Р 51652-2000 «Спирт этиловый ректифицированный».
2. ГОСТ Р ИСО 5725-6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
3. ГОСТ 12.1.004-91 «ССБТ. Пожарная безопасность. Общие требования».
4. ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны».
5. ОСТ 12.1.007-76 «ССБТ. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
6. ГОСТ 12.1.019-09 «ССБТ. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
7. ГОСТ 12.4.009-83 «ССБТ. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
8. ГОСТ 195-77 «Реактивы. Натрий сернисто-кислый. Технические условия».
9. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки».
10. ГОСТ 4109-79 «Реактивы. Бром. Технические условия».
11. ГОСТ 4160-74 «Реактивы. Калий бромистый. Технические условия».
12. ГОСТ 4220-75 «Реактивы. Калий двухромовокислый. Технические условия».
13. ГОСТ 7328-01 «Гири. Общие технические условия».
14. ГОСТ 9293-74 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
15. ГОСТ 12026-76 «Бумага фильтровальная лабораторная».
16. ГОСТ 13647-78 «Реактивы. Пиридин. Технические условия».
17. ГОСТ 14262-78 «Кислота серная особой чистоты. Технические условия».
18. ГОСТ 22180-76 «Реактивы. Кислота щавелевая. Технические условия».
19. СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
20. ГОСТ Р 53228-08 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. метрологические и технические требования. Испытания».
21. ГОСТ 28311-89 «Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний».
22. ГОСТ 28498-90 «Термометр жидкостной стеклянный. Общие технические требования. Методы испытаний».
23. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
24. ГОСТ 52501-05 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
25. РМГ 76-04 «Государственная система обеспечения единства измерений. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа».
26. ТУ 25-11.1592-81 «Бидистиллятор стеклянный типа БС».
27. Система очистки воды Milli-QIntegral.
28. ТУ 25-11.1630-84 «Шкаф вытяжной химический».
29. ТУ 3645-032-00220531-97 «Редуктор кислородный. Технические условия».
Примечание. При использовании настоящей методики измерений целесообразно проверить действие ссылочных стандартов на территории Российской Федерации по соответствующему указателю стандартов, составленному на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный документ заменен (изменен), то при пользовании настоящей методикой измерений, следует руководствоваться замененным (измененным) стандартом. Если ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
Методические указания разработаны ФБУН «Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения» (авторы: Т.С. Уланова, Н.В. Зайцева, Т.В. Нурисламова, Н.А. Попова, Г.И. Терентьев).