На главную | База 1 | База 2 | База 3

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций штаммов
микроорганизмов в воздухе
рабочей зоны

Сборник методических указаний
МУК 4.2.3248-14
МУК 4.2.3250-14
МУК 4.2.3252-14
МУК 4.2.3254-14
МУК 4.2.3256-14

Выпуск 2

Москва 2015

1. Разработаны и подготовлены ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава России (д.б.н. Н.И. Шеина).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6 ноября 2014 г. № 2).

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 30 декабря 2014 г.

4. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Назначение и область применения. 2

2. Биологическая характеристика штамма Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 и его гигиенический норматив в воздухе рабочей зоны.. 2

3. Пределы измерений. 3

4. Методы измерений. 3

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы.. 3

6. Требования безопасности. 4

7. Требования к квалификации операторов. 5

8. Условия измерений. 5

9. Приготовление питательных сред. 5

10. Проведение измерения. 5

11. Вычисление результатов измерения. 6

12. Оформление результатов измерений. 6

 

Введение

Сборник методических указаний «Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны» (выпуск 2) разработан с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций микроорганизмов их предельно допустимым концентрациям (ЦЦК), что является обязательным при осуществлении санитарно-эпидемиологического контроля.

Включенные в данный список методические указания по контролю биотехнологических штаммов в воздухе рабочей зоны разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССТБ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования» и ГОСТ 8.563-96 ГСИ. «Методики выполнения измерений».

Методики выполнены с использованием современных и адекватных микробиологических методов исследования и позволяют контролировать концентрации биотехнологических штаммов на уровне и ниже их ЦЦК в воздухе рабочей зоны, установленных в гигиенических нормативах.

Методические указания по измерению концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны предназначены для лабораторий центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, санитарно-микробиологических лабораторий промышленных предприятий, а также для научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований, для осуществления контроля за содержанием штаммов в воздухе рабочей зоны.

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации

______________________ А.Ю. Попова

30 декабря 2014 г.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Микробиологическое измерение концентрации
Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029
в воздухе рабочей зоны

Методические указания
МУК 4.2.3250-14

1. Назначение и область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода микробиологического количественного анализа концентрации Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 500000 клеток в 1 м3 воздуха.

1.2. Методические указания носят рекомендательный характер.

2. Биологическая характеристика штамма Azotobacter
chroococcum
ВН-1811 ВКПМ В-9029 и его гигиенический
норматив в воздухе рабочей зоны

Штамм Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 выделен из почв Подмосковья, не является генетически модифицированным штаммом. Штамм продуцирует гетероауксин, антибиотики. Предполагается использовать в растениеводстве.

На среде Федорова штамм образует крупные, круглые, выпуклые, непрозрачные, гладкие колонии с ровными краями. Через 18 - 20 ч при 128 - 30 °С можно видеть мелкие полиморфные клетки. Через 48 ч роста наблюдаются мелкие палочки, которые могут располагаться парами.

Желатин разжижает, крахмал быстро гидролизует. Восстанавливает лакмусовое молоко. Нитраты восстанавливает до нитритов, каталазоположительный, образует сероводород, вызывает гемолиз.

Штамм Azotobacter chroococcum ВН-1811 депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ В-9029.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 50000 кл/м3.

3. Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 500000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительной вероятности 0,95.

4. Методы измерений

Прямой метод основан на аспирации из воздуха производственных помещений бактерий на среду Федорова и подсчета количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства,
реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы, реактивы и питательные среды.

5.1. Средства измерений

Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5 - 790 мм рт. ст. и пределом допустимой погрешности ±2,5 мм рт. ст.

ТУ 2504-1799-75

Весы лабораторные, аналитические, наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности ±0,2 мг

ГОСТ Р 53228-08

Колбы мерные 2-100-2, 2-250-2, 2-1000-2

ГОСТ 1770-74

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см3

ГОСТ 29227-91

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25 и 50 см3

ГОСТ 1770-74

Термометр лабораторный шкальный, пределы измерения 0 - 55 °С

ТУ 25-2021.003-88

Аспирационный аппарат и устройство для отбора проб воздуха

 

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

5.2. Вспомогательные устройства и материалы

Шкаф сушильный стерилизационный, позволяющий поддерживать температуру (160 ± 5) °С

ТУ 9452-010-00141798-02

Термостаты, позволяющие поддерживать рабочую температуру (28 ± 2) и (37 ± 2) °С

ТУ 9452-002-00141798-97

Автоклав электрический

ГОСТ 9586-75

Стерилизаторы паровые медицинские

ГОСТ Р ЕН 13060-11, ГОСТ Р 51935-2002

Дистиллятор

ТУ 4952-007-33142130-2000

Облучатель бактерицидный настенный

ТУ 9444-015-03965956-08

Холодильник бытовой

ГОСТ 26678-85

Микроскоп биологический с иммерсионной системой

 

Лупа с увеличением ×10

ГОСТ 25706-83

Пробирки типов П1, П2

ГОСТ 25336-82

Спиртовки лабораторные стеклянные

ГОСТ 23932-90

Чашки биологические (Петри)

ГОСТ 23932-90

Воронки конусные диаметром 40 - 45 мм

ГОСТ 25336-82

Груша резиновая

ТУ 9398-005-0576-9082-03

Петля бактериологическая

 

Марля медицинская

ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая

ГОСТ 25556-81

Бумага фильтровальная лабораторная

ГОСТ 12026-76

Примечание. Допускается применение оборудования и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

5.3. Реактивы и питательные среды

Агар микробиологический

ГОСТ 17206-96

Аммоний молибденово-кислый, хч

ГОСТ 3765-78

Вода дистиллированная

ГОСТ 6709-90

Железо серно-кислое, хч

ГОСТ 6981-94

Калий однозамещенный фосфорно-кислый, хч

ГОСТ 4198-75

Кальций углекислый, хч

ГОСТ 4530-76

Кислота борная, хч

ГОСТ 18704-78

Магний серно-кислый, хч

ГОСТ 4523-77

Марганец серно-кислый 5-водный, чда

ГОСТ 435-77

Меласса свекловичная

Р 52304-05

Натрий хлористый, хч

ГОСТ 4233-77

Спирт этиловый ректификованный

ГОСТ Р 51652-2000 или ГОСТ 18300-87

Спирт этиловый технический

ГОСТ 17299-78

Примечание. Допускается использование других питательных сред и диагностических препаратов с аналогичными характеристиками.

6. Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток в воздухе рабочей зоны соблюдают следующие требования.

6.1. СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».

6.2. СП 1.3.2518-09. Дополнения и изменения 1 к СП 1.3.2322-08.

6.3. Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.4. Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.

6.5. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Приготовление сред, подготовку к анализу проводят в следующих условиях:

- температура воздуха (20 ± 5) °С;

- атмосферное давление (760 ± 20) мм рт. ст.;

- влажность воздуха не более 80 %.

9. Приготовление питательных сред

Для приготовления агаризованной среды Федорова смешивают указанные компоненты: калий однозамещенный фосфорно-кислый - 0,5 г; магний серно-кислый - 0,3 г; натрия хлорид - 0,3 г; железо сернокислое - 0,005 г; марганец серно-кислый - 0,005 г; аммоний молибденово-кислый - 0,005 г; борная кислота - 0,005 г; кальций углекислый - 3,5 г; меласса - 30,0 г; агар-агар - 17,0 г. Сухие компоненты растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают.

Смесь нагревают до растворения агара, стерилизуют автоклавированием при 121 °С в течение 15 мин и охлаждают до 60 °. Приготовленную среду разливают в стерильные колбы по 250 - 500 см3 и автоклавируют при 121 °С в течение 15 мин.

Готовую среду хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше 8 °С в течение 14 дней, не более.

10. Проведение измерения

10.1. Отбор проб воздуха

Отбор проб воздуха проводят с учетом требований ГОСТ 12.1.005-88 с изменением 1 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны» и ГОСТ 8.563-96. ГСИ. «Методики выполнения измерений».

Для этого воздух аспирируют при помощи пробоотборника на поверхность плотной питательной среды в соответствии с технической документацией (инструкцией) на прибор. Время аспирации и объем отбираемого воздуха зависит от предполагаемой концентрации микроорганизма.

Аппарат перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают 96°-м этиловым спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо (количество питательной среды в чашки вносят в соответствии с инструкцией к прибору). После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

10.2. Выполнение анализа

При выполнении анализа воздуха прямым методом стерильную агаризованную среду (среда Федорова) расплавляют, остужают до 50 - 60 °С и разливают в чашки Петри.

Контроль чистоты розлива проводят в соответствии с п. 7.1.1 МУК 4.2.2316-08. Для этого чашки с застывшей средой помещают в термостат при температуре 37 °С не менее, чем на 18 ч. Проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха. Разлитую в чашки питательную среду хранят при температуре (2 - 8)°С не более 10 дней.

После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат с температурой (28 ± 2) °С. Через 1 - 2 суток производят подсчет выросших колоний по культурально-морфологическим признакам.

Ростовые свойства используемой питательной среды должны быть проверены до проведения анализа воздуха в соответствии с требованиями к ростовым свойствам питательных сред (МУК 4.2.2316-08). Для этого эталонный музейный штамм Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 высевается на 2 - 3 чашки используемой среды.

Лиофилизованную культуру музейного штамма необходимо использовать 2 - 3 пассажа во избежание потери им заданных ростовых свойств.

11. Вычисление результатов измерения

Расчет концентрации клеток производят по формуле:

К = (П×1000)/С×Т, кл/м3, где

К - концентрация Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 в воздухе, кл/м3;

П - количество типичных колоний, выросших на чашке Петри;

1000 - коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха;

С - скорость аспирации воздуха, л/мин;

Т - время аспирации, мин.

12. Оформление результатов измерений

Результаты измерений оформляют протоколом по ниже приведенной форме.

Протокол №

количественного микробиологического анализа Azotobacter chroococcum
ВН-1811 ВКПМ В-9029 в воздухе рабочей зоны

1. Дата проведения анализа _________________________________________________

2. Рабочее место (профессия работающего) ___________________________________

3. Место отбора пробы (название и адрес организации, производство, технологическая стадия, точка отбора пробы) ____________________________________

3. Вид пробоотборника ____________________________________________________

4. Дата последней метрологической поверки оборудования для отбора проб

___________________________________________________________________________

5. Питательная среда, время инкубации ______________________________________

6. Результаты испытания ростовых свойств питательной среды __________________

7. Количественная и качественная характеристика выросших колоний (количество типичных колоний) __________________________________________________________

8. Результаты идентификации микроорганизмов Azotobacter chroососсum ВН-1811 ВКПМ В-9029 (морфологические признаки) _____________________________________

9. Результаты расчёта концентрации штамма __________________________________

10. Соотношение полученных результатов с уровнем ПДКр.з. ___________________

11. Отбор пробы произведён (Ф. И. О., должность, дата, подпись)_________________

___________________________________________________________________________

12. Идентификация штамма и расчёт концентрации произведены (Ф. И. О., должность, дата, подпись)

___________________________________________________________________________